青霉L1来源具有生产木寡糖应用潜力的高比活GH11木聚糖酶 被引量：6

1

作者 王晓宇 刘伟娜 +2 位作者 谢响明 姚斌 罗会颖 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期68-77,共10页

木聚糖酶是一种备受关注的糖苷水解酶,能够应用于酿造、饲料、制药、生物能源等多个领域,但是目前大部分木聚糖酶在低于30℃的环境中活力较低。为了获得在较低温度下具有高活力的木聚糖酶,从青霉L1(Penicilliumsp.L1)中克隆到一条GH11... 木聚糖酶是一种备受关注的糖苷水解酶,能够应用于酿造、饲料、制药、生物能源等多个领域,但是目前大部分木聚糖酶在低于30℃的环境中活力较低。为了获得在较低温度下具有高活力的木聚糖酶,从青霉L1(Penicilliumsp.L1)中克隆到一条GH11木聚糖酶基因XYN11A,并在毕赤酵母GS115中进行异源表达。经过纯化和酶学性质测定,该酶的最适p H和最适温度分别为3.5-4.0和55℃,能够在酸性和中性缓冲液(p H 1.0-7.0)中以及40℃下保持稳定,同时对所有已测试的金属离子和化合物都有一定的抗性。值得注意的是,该酶具有GH11家族中比较高的比活力6 700 U/mg,另外,该酶在较低温度20-40℃亦可展现出较高的酶活力(24%-58%)。经过16 h的榉木木聚糖水解实验,该木聚糖酶的水解产物主要是木二糖、木三糖和木四糖,几乎不产生单体木糖。因该酶同时具有产寡糖、较低温度下活力高以及嗜酸性等3种特性,XYN11A在食品和饲料工业中具有巨大的应用潜力。 展开更多

关键词 木聚糖酶 高比活力 木寡糖

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黑酵母Hortaea werneckii GH10家族耐热木聚糖酶的异源表达及其降解桑皮特性 被引量：3

2

作者 谢晨 游帅 +3 位作者 张温馨 白致远 吴福安 王俊 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期559-567,共9页

我国桑树种植面积广,桑园管理每年需要伐枝,其桑皮除了含有活性物质还含有丰富的木质纤维素,急需进行高值化开发利用,因此选用高比活耐热木聚糖酶是桑皮降解及其转化应用的关键酶。本文从黑酵母Hortaea werneckii中克隆得到糖苷水解酶Hw... 我国桑树种植面积广,桑园管理每年需要伐枝,其桑皮除了含有活性物质还含有丰富的木质纤维素,急需进行高值化开发利用,因此选用高比活耐热木聚糖酶是桑皮降解及其转化应用的关键酶。本文从黑酵母Hortaea werneckii中克隆得到糖苷水解酶HwXYL10A基因,在毕赤酵母中进行了异源表达,探究其酶学性质,为利用其降解桑皮木质纤维素提供可行性。该基因编码的蛋白与GH10家族高温木聚糖酶XYL10C_△N(GenBank:ACS96449.1)的同源性为60%。该酶的最适温度为75℃,最适pH为4.0,T_(50)值为76℃,在75℃和80℃下半衰期分别为70 min和11 min,表明HwXYL10A具有良好的热稳定性。在最适条件下,以榉木木聚糖、甘蔗木聚糖和玉米芯木聚糖为底物测定,其比活分别是3 260 U/mg、3 160 U/mg和3 870 U/mg,催化效率分别为2 970 mL/(s·mg)、2 320 mL/(s·mg)和975 mL/(s·mg)。采用该木聚糖酶与纤维素酶协同水解经氨水或氢氧化钙预处理的桑皮,协同处理组均在12 h产糖量达到最高,分别为20.38μmol/mL和22.13μmol/mL;最大协同率分别为1.59和1.47。这些优良的酶学性质使HwXYL10A在桑皮以及其他木质纤维素降解中具有潜在的应用价值,同时为耐热木聚糖酶的研究和应用提供了新的素材。 展开更多

关键词 GH10木聚糖酶 高比活 耐热 桑皮 协同降解

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高比活度硼氚化钠的制备及其应用 被引量：2

3

作者 廖莎 蔡晓冬 +1 位作者 吴久伟 沈德存 《同位素》 CAS 2001年第3期210-213,共4页

采用改进的同位素交换法制备了硼氚化钠 ,其比活度可稳定在 (6 .7～ 7.8)× 10 13 Bq/ g,并利用它合成了 [1- 3 H]法呢醇、[1- 3 H]香叶基香叶醇、[2 - 3 H]肌醇、[1- 3 H]葡萄糖、[1- 3 H]正丁醇、[2 - 3 H]异丙醇、[2 - 3 H]异丁... 采用改进的同位素交换法制备了硼氚化钠 ,其比活度可稳定在 (6 .7～ 7.8)× 10 13 Bq/ g,并利用它合成了 [1- 3 H]法呢醇、[1- 3 H]香叶基香叶醇、[2 - 3 H]肌醇、[1- 3 H]葡萄糖、[1- 3 H]正丁醇、[2 - 3 H]异丙醇、[2 - 3 H]异丁醇、[2 - 3 展开更多

关键词 氚 硼氚化钠 放射性比活度 标记化合物 同位素交换法 制备

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无载体放射性碘标记间碘苄胍的制备和应用研究进展 被引量：1

4

作者 樊彩云 邓新荣 罗志福 《同位素》 CAS 2017年第1期54-62,共9页

放射性碘标记间碘苄胍([*I]MIBG)在神经内分泌肿瘤和心脏病的诊断,以及神经内分泌肿瘤的治疗方面起着重要作用。高比活度无载体放射性碘标记MIBG(no-carrier-added(n.c.a.)[*I]MIBG)克服了目前商用放射性碘标记MIBG(carrier-added(c.a.)... 放射性碘标记间碘苄胍([*I]MIBG)在神经内分泌肿瘤和心脏病的诊断,以及神经内分泌肿瘤的治疗方面起着重要作用。高比活度无载体放射性碘标记MIBG(no-carrier-added(n.c.a.)[*I]MIBG)克服了目前商用放射性碘标记MIBG(carrier-added(c.a.)[*I]MIBG)的缺点,有利于临床使用。近20年来,无载体放射性碘标记MIBG的制备和应用研究逐渐得到重视,并取得了重要进展。本文对无载体放射性碘标记MIBG的制备方法进行了总结,对n.c.a.[*I]MIBG和c.a.[*I]MIBG诊断与治疗方面的特点进行了对比,同时介绍了其在临床研究方面的最新进展。 展开更多

关键词 间碘苄胍 无载体 高比活度 诊断 放射性治疗

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溶菌酶分子活性长效性研究 被引量：1

5

作者 刘源岗 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期196-197,205,共3页

制备出具有高活性的溶菌酶微球,产品具有长效性,16d释放在29.8%～41.6%之间,在所考察的释放周期内,酶活基本保持在90%以上。酶与缓释体系的有效结合有利于促进溶菌酶在食品保鲜、防腐以及增强食品保健效果等方面发挥长期稳定的作用。

关键词 溶菌酶 高活性 长效性

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医用^(99)Mo工业化生产技术研发

6

作者 张建栋 陈真 陈雅宏 《同位素》 CAS 2023年第6期620-632,共13页

全球研究堆老化导致工业化生产^(99)Mo的靶辐照能力严重不足,以及核不扩散条约限制高浓铀的民用,迫使探索^(99)Mo新的生产工艺技术,并将现有的高浓铀靶向低浓铀靶转换,在新技术探索和靶转换的过程中,造成全球医用^(99)Mo供应短缺。美国... 全球研究堆老化导致工业化生产^(99)Mo的靶辐照能力严重不足,以及核不扩散条约限制高浓铀的民用,迫使探索^(99)Mo新的生产工艺技术,并将现有的高浓铀靶向低浓铀靶转换,在新技术探索和靶转换的过程中,造成全球医用^(99)Mo供应短缺。美国、加拿大、欧洲等正在探索医用^(99)Mo商业化稳定供应的新工艺技术,如加速器粒子束、次临界装置、小堆、熔盐堆和溶液堆等辐照靶件,采用新材料和新工艺制备靶件,超临界、离子液体、新型色谱柱等应用于^(99)Mo的制备。低浓铀靶生产逐渐代替高浓铀靶,光核反应工艺已经成熟,低功率研究堆、次临界装置和粒子束等工艺可以解决部分本地放射性药物和核医学的需求,而加速器生产工艺研究活跃,是未来医用^(99)Mo生产的发展方向。 展开更多

关键词 ^(99)Mo生产技术 ^(99)Mo分离 ^(99)Mo纯化 高比活度 ^(99)Mo/^(99m)Tc发生器

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来源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因的高效表达 被引量：25

7

作者 罗会颖 姚斌 +4 位作者 袁铁铮 王亚茹 史秀云 伍宁丰 范云六 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期78-84,共7页

高效表达高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的一个有效途径。对源于Escherichiacoli的高比活植酸酶基因appA ,按照毕赤酵母 (Pichiapastoris)密码子的偏爱进行了密码子优化改造。该改造后的基因appA m按正确... 高效表达高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的一个有效途径。对源于Escherichiacoli的高比活植酸酶基因appA ,按照毕赤酵母 (Pichiapastoris)密码子的偏爱进行了密码子优化改造。该改造后的基因appA m按正确的阅读框架融合到毕赤酵母表达载体pPIC9上的α 因子信号肽编码序列 3′端 ,通过电击转化得到重组转化子。对重组毕赤酵母的Southernblotting分析证实植酸酶基因已整合到酵母基因组中 ,并确定了整合基因的拷贝数。Northernblotting分析证实植酸酶基因得到了正常转录。SDS PAGE分析和表达产物的研究表明 ,植酸酶得到了高效分泌表达 ,在 5L发酵罐中植酸酶蛋白表达量达到 2 5mg mL发酵液 ,酶活性 (发酵效价 )达到 7 5× 10 6 IU mL发酵液以上 ,大大高于目前报道的各种植酸酶基因工程菌株的发酵效价。 展开更多

关键词 高比活植酸酶 基因改造 毕赤酵母 基因表达

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来源于Selenomonas ruminantium的高比活植酸酶基因在毕赤酵母中的高效表达 被引量：11

8

作者 王亚茹 姚斌 +5 位作者 罗会颖 袁铁铮 都占魁 史秀云 伍宁丰 范云六 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期762-768,共7页

应用酶解效率更高的高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的有效途径。根据毕赤酵母对于密码子的选择偏向,对来源于原核瘤胃微生物Selenomonasruminantium的高比活植酸酶基因phyS进行了密码子优化,将优化后的植... 应用酶解效率更高的高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的有效途径。根据毕赤酵母对于密码子的选择偏向,对来源于原核瘤胃微生物Selenomonasruminantium的高比活植酸酶基因phyS进行了密码子优化,将优化后的植酸酶基因phyS(m)与未优化的phyS插入到毕赤酵母转移载体pPIC9中,转化毕赤酵母得到重组子,在摇瓶水平上,phyS(m)的表达水平比phyS高10倍。在5L发酵罐中,优化后的植酸酶基因phyS(m)其蛋白表达量达到4mgml-1发酵液,效价达到1.6×106IUml-1,高于目前报道的各种植酸酶基因工程菌株的发酵效价。 展开更多

关键词 高比活植酸酶 毕赤酵母 基因表达 植酸酶 Selenomonas ruminantium 植酸磷 饲料添加剂

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来源于橄榄绿链霉菌A1的高比活木聚糖酶XYNB的高效表达及性质的比较分析 被引量：10

9

作者 何永志 姚斌 +5 位作者 王亚茹 袁铁峥 罗会颖 史秀云 伍宁丰 范云六 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期340-344,共5页

高效表达高比活木聚糖酶是进一步提高木聚糖酶发酵效价、降低其生产成本的有效途径。将橄榄绿链霉菌 (Streptomycesolivaceoviridis)A1的高比活木聚糖酶成熟蛋白编码基因xynB克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中 ,转化毕赤酵母得到重组酵母 ... 高效表达高比活木聚糖酶是进一步提高木聚糖酶发酵效价、降低其生产成本的有效途径。将橄榄绿链霉菌 (Streptomycesolivaceoviridis)A1的高比活木聚糖酶成熟蛋白编码基因xynB克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中 ,转化毕赤酵母得到重组酵母 ,在重组酵母中木聚糖酶基因得到了高效分泌表达 ,且表达产物具有生物学活性。在 3L发酵罐中蛋白表达量约 1 4mg mL ,酶活性 (效价 )为 1 2 0 0IU mL。SDS PAGE分析表明 ,表达的木聚糖酶XYNBa为糖基化蛋白 ,分子量为 31kD ,经脱糖基化处理得到 2 1kD的XYNBb ,与橄榄绿链霉菌A1所产原酶XYNB大小一致。通过对XYNB、XYNBa及XYNBb酶学性质的比较发现 :三者在比活性、Vmax及热稳定性方面有较大差异。该酶对不同木聚糖的酶解产物的糖份分析表明 :酶解产物的主要成分为木二糖、木三糖和木四糖 ,占总糖含量的 95 展开更多

关键词 高比活木聚糖酶 高效表达 毕赤酵母 酶学性质

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来源于柠檬酸杆菌的高比活植酸酶基因在毕赤酵母中的高效表达 被引量：4

10

作者 黄火清 罗会颖 +5 位作者 柏映国 王亚茹 姚斌 孟昆 袁铁铮 杨培龙 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期945-950,共6页

柠檬酸杆菌(Citrobacterbraakii)来源的植酸酶是目前报道的比活最高的植酸酶。按照毕赤酵母(Pichiapastoris)对密码子的选择偏向性,对来源于柠檬酸杆菌的高比活植酸酶基因AppA进行了密码子优化改造。改造后的基因AppA(m)按正确的阅读框... 柠檬酸杆菌(Citrobacterbraakii)来源的植酸酶是目前报道的比活最高的植酸酶。按照毕赤酵母(Pichiapastoris)对密码子的选择偏向性,对来源于柠檬酸杆菌的高比活植酸酶基因AppA进行了密码子优化改造。改造后的基因AppA(m)按正确的阅读框架融合到毕赤酵母表达载体pPIC9的α-因子信号肽编码序列3′端,通过电击转化得到重组转化子。通过PCR验证,AppA(m)已整合在酵母染色体上。SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,植酸酶得到了高效分泌表达,在5L发酵罐中植酸酶蛋白表达量达到3·2mg/mL发酵液,发酵效价达到每毫升发酵液1·4×107IU以上,高于目前报道的各种植酸酶基因工程菌株的发酵效价。 展开更多

关键词 高比活植酸酶 基因改造 毕赤酵母 高效表达

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在烟草中表达的高比活性木聚糖酶XYNB 被引量：2

11

作者 杨培龙 姚斌 +4 位作者 王亚茹 罗会颖 袁铁铮 柏映国 范云六 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期176-181,共6页

来源于橄榄绿链霉菌(Streptomyces olivaceoviridis)A1的木聚糖酶XYNB是一性质优良的高比活性木聚糖酶,已在饲料中作为添加剂应用。本研究利用携带双35S启动子和AMV增强子的表达载体,在烟草中高效表达了XYNB。转基因烟草及其子代植株基... 来源于橄榄绿链霉菌(Streptomyces olivaceoviridis)A1的木聚糖酶XYNB是一性质优良的高比活性木聚糖酶,已在饲料中作为添加剂应用。本研究利用携带双35S启动子和AMV增强子的表达载体,在烟草中高效表达了XYNB。转基因烟草及其子代植株基因组PCR检测证实xynB基因已整合到转基因烟草的基因组中,ELISA和SDS-PAGE以及Westernblot分析确证了xynB基因的高效表达,木聚糖酶活性分析证实了表达酶具有正常的生物学活性。表达的XYNB约占叶片总蛋白含量的6%,转基因烟草表现的最高酶活性约为170 IU/g鲜叶片(23 IU/mg总蛋白)。表达酶蛋白分子量为20.8 kD,与理论分子量相当。转基因植株可以正常生长和繁殖,T1子代植株表现了与亲代相似的酶活性,具有较好的遗传稳定性。 展开更多

关键词 高比活性木聚糖酶 转基因植物 烟草

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高比度同位素^(192)Ir和^(60)Co辐照的计算

12

作者 周全 钟文发 徐小琳 《计算物理》 CSCD 北大核心 1997年第4期684-686,共3页

利用反应堆物理的方法，对使用高通量堆辐照生产高比度同位素１９２Ｉｒ和６０Ｃｏ的方案进行了计算。从同位素产量和对堆物理参数的影响两方面分析了计算结果，提出了一个方案作为实际生产的参考。

关键词 高通量堆 高比度 辐照 同位素 钴60 铱192

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