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体外诱导人脐血间充质干细胞向肝细胞样细胞分化的研究 被引量：27
1
作者 孙艳 段芳龄 +4 位作者 陈香宇 孙嫣 李玉龙 曾艳丽 王豪勋 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2004年第3期239-243,共5页
目的 探讨人脐血间充质干细胞能否在体外诱导分化为肝细胞样细胞,并探索其定向诱导分化为肝细胞样细胞的分化机制。方法 无菌条件下采集正常产妇脐血,用相对密度为1.077的淋巴细胞分离液分离脐血MNC,进而采用贴壁培养法获得MSC,流式细... 目的 探讨人脐血间充质干细胞能否在体外诱导分化为肝细胞样细胞,并探索其定向诱导分化为肝细胞样细胞的分化机制。方法 无菌条件下采集正常产妇脐血,用相对密度为1.077的淋巴细胞分离液分离脐血MNC,进而采用贴壁培养法获得MSC,流式细胞仪检测其表面际志。分别用HGF、FGF4、俩者联合、无生长因子四种处理因素,及含2％FBS的DMEM,1×ITS讲行诱导培养,并于诱导前及诱导后的第7、14、21、28天留取细胞,RT～PCR法检测AFP、白蛋白及C-met FGFR2mRNA的表达,免疫细胞化学法检测AFP、白蛋白、抗肝细胞抗体和CK18的表达,PAS法进行糖原染色,分析是否诱导出肝细胞样细胞。结果 MSC强表达CD29、CD44,不表达CD34。诱导后7,21天分别检测出AFP,白蛋白mRNA及蛋白的表达,28天检测出CK18、抗肝细胞抗体的表达,21天、28天均可检测到糖原染色阳性细胞,随诱导时间的延长C-met,FGFR2 mRNA表达增高,HGF+FGF4诱导组肝系细胞标志阳性率均高于单独生长因子诱导组(P<0.05);单独生长因子诱导组间无明显差异(P>0.05)。无生长因子诱导组在以上时间点均未检测到上述指标。结论HGF、FGF4均能诱导人脐血MSC分化为具有肝系细胞表型和功能的细胞,且二者在一定程度上有联合作用。生长因子与其相幢受体之间,可能存在正反馈调节机制。 展开更多
关键词 体外诱导 脐血 间充质干细胞 肝细胞样细胞分化 生长因子 免疫细胞
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人骨髓间充质干细胞体外分化为肝细胞样细胞 被引量：24
2
作者 孙嫣 段芳龄 +4 位作者 陈香宇 孙艳 李玉龙 曾艳丽 王豪勋 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2004年第3期244-248,共5页
目的 探讨人骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养及特异性诱导为肝细胞样细胞的能力。方法 骨髓标本来源于健康志愿者的胸骨,年龄2～35岁,采用淋巴细胞分离液(密度1.077)分离人MSCs,并分别采用HGF、FGF4、HGF+FGF4以及无生长因子四种处理... 目的 探讨人骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养及特异性诱导为肝细胞样细胞的能力。方法 骨髓标本来源于健康志愿者的胸骨,年龄2～35岁,采用淋巴细胞分离液(密度1.077)分离人MSCs,并分别采用HGF、FGF4、HGF+FGF4以及无生长因子四种处理因素体外诱导第三代人MSC向肝细胞样细胞分化。通过流式细胞术分析鉴定.MSCs的纯度,于诱导培养的0、7、14、21、28天时留取细胞检测CK18、AFP和白蛋白的表达情况,同时进行糖原染色验证细胞功能。结果 用淋巴细胞分离液分离出的人MSCs纯度可达90％,采用HGF、FGF4及HGF+FGF4三种处理因素均可在体外诱导人MSCs特异分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的细胞。结论 人MSCs能在体外扩增并定向诱导为肝细胞样细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 体外分化 肝细胞样细胞 MSCS 淋巴细胞
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脐带间充质干细胞体外分化为有功能的低免疫原性肝细胞样细胞 被引量：24
3
作者 任红英 赵钦军 +5 位作者 邢文 杨少光 卢士红 任倩 张磊 韩忠朝 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期190-194,246,共6页
目的观察人脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)体外诱导分化为肝细胞样细胞(DHC)后,是否具有肝细胞的生物学特性和功能,以及其免疫原性的变化。方法采用改良的二步法肝细胞分化培养体系体外诱导UC-MSCs向肝细胞分化,并用RT-PCR和免疫荧光... 目的观察人脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)体外诱导分化为肝细胞样细胞(DHC)后,是否具有肝细胞的生物学特性和功能,以及其免疫原性的变化。方法采用改良的二步法肝细胞分化培养体系体外诱导UC-MSCs向肝细胞分化,并用RT-PCR和免疫荧光染色法检测诱导后不同时间DHC肝细胞特异性标记的表达;采用ELISA法检测细胞培养液中白蛋白(ALB)和尿素的浓度,以及混合淋巴细胞培养检测DHC对淋巴细胞增殖能力的影响。结果 UC-MSCs低表达甲胎蛋白(AFP)、ALB和细胞角蛋白-19(CK-19)的mRNA和蛋白,成肝诱导分化后14和28dDHC均高表达肝细胞标志AFP、ALB、CK-19以及色氨酸2,3-加双氧酶基因。诱导后的DHC能够以时间依赖方式产生ALB和分泌尿素,不表达人白细胞DR抗原,而且能够抑制淋巴细胞增殖。结论 UC-MSCs在体外能够分化为有功能的DHC且具有低免疫原性的特征。 展开更多
关键词 间充质干细胞 肝细胞样细胞 分化 免疫原性
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大鼠骨髓间充质干细胞向肝样细胞的定向诱导分化 被引量：14
4
作者 陈鹏飞 吴小翎 +2 位作者 周伟 彭阳 芦曦 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第1期20-24,共5页
目的 探讨肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)和碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growthfactor,bFGF)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)分化为肝样细胞的可行性。方法取SD大... 目的 探讨肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)和碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growthfactor,bFGF)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)分化为肝样细胞的可行性。方法取SD大鼠股骨骨髓,直接贴壁法分离纯化BM-MSCs,并体外传代,流式细胞术和成骨诱导对其进行鉴定。取第3代BM-MSCs,分为2组:实验组用HGF(20 ng/ml)和bFGF(10 ng/ml)进行诱导,阴性对照组不加诱导剂,倒置显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR法检测诱导后细胞甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)和白蛋白(Albumin,ALB)基因mRNA的转录水平;免疫细胞化学染色法检测诱导后细胞的AFP和ALB蛋白的表达。结果第3代BM-MSCs表型标志和功能特性均符合MSCs的特点。BM-MSCs经HGF和bFGF诱导后呈肝样细胞形态。实验组细胞可检测出AFP和ALB基因mRNA的表达。实验组细胞诱导后第7天,AFP蛋白开始表达,第14天时表达降低,第21天时不表达;ALB于诱导后第14天出现表达,并随诱导时间的延长表达逐渐增加。结论 HGF和bFGF具有体外诱导BM-MSCs向肝样细胞分化的作用。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 分化 肝细胞生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 肝样细胞
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EGF和HGF体外诱导肝硬化患者骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的实验研究 被引量：10
5
作者 吴玉卓 张玉婷 +1 位作者 毛小荣 陈红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第16期1541-1544,共4页
目的探讨表皮细胞生长因子（epidermal growth factor，EGF）和肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）诱导肝硬化患者骨髓间充质干细胞（MSCs）向肝细胞分化的可行性。方法取肝硬化志愿者骨髓，密度梯度离心法联合贴壁筛选... 目的探讨表皮细胞生长因子（epidermal growth factor，EGF）和肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）诱导肝硬化患者骨髓间充质干细胞（MSCs）向肝细胞分化的可行性。方法取肝硬化志愿者骨髓，密度梯度离心法联合贴壁筛选法获取MSCs，分别用含有HGF、EGF、HGF＋EGF或不加生长因子的培养基进行培养。用流式细胞仪、免疫细胞化学法鉴定细胞表型，酶联免疫吸附法检测培养上清液中Alb水平。结果肝硬化患者骨髓MSCs生长良好，表型为CD29阳性，CD34阴性。诱导组细胞可在21～28d时，形态变为三角形、多角型或类圆形。诱导组细胞7d检测到AFP的表达，21、28d检测出CK18阳性，并以时间依赖方式产生Alb。未诱导组在以上时间点未检测到上述指标。结论HGF、EGF均能诱导骨髓MSCs分化为肝样细胞，两者在一定程度上具有联合作用。 展开更多
关键词 肝硬化 干细胞 细胞分化 肝样细胞
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人胎儿骨髓间充质干细胞体外向类肝细胞诱导分化条件的优化 被引量：9
6
作者 何念海 赵文利 王宇明 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第21期1939-1943,共5页
目的 :建立和优化骨髓间充质干细胞 (marrowmesen chymalstemcells,MMSCs)向类肝细胞诱导分化的条件及分化过程观察、鉴定 .方法 :采用体外分离培养的MMSCs为研究对象 ,设计不同的诱导分化条件进行体外诱导 ,观察细胞诱导分化过程中形... 目的 :建立和优化骨髓间充质干细胞 (marrowmesen chymalstemcells,MMSCs)向类肝细胞诱导分化的条件及分化过程观察、鉴定 .方法 :采用体外分离培养的MMSCs为研究对象 ,设计不同的诱导分化条件进行体外诱导 ,观察细胞诱导分化过程中形态结构变化及细胞生物学特性 ,应用免疫组化检测肝细胞标志ALB和CK18的表达 ,建立人胎儿MMSCs向类肝细胞分化的优化条件 .结果 :未进行诱导的对照组细胞保持长梭型 ,形状因子 4 .5± 1.0 ,面积较小 ,增生较快 ,呈典型成纤维细胞的漩涡状或火焰状生长 ,培养后期可见 5～ 7个分支 ,无细胞变圆 ,双核细胞率小于 0 .1% ,逐渐老化 ,颗粒增多 .组化染色未见表达ALB和CK18.所有诱导组细胞在培养中细胞分支均减少 ,多为 1～ 3个分支 ,未用基质的细胞仍保持长梭形生长 ,给予基质的诱导细胞部分形态由长变圆 ,形状因子下降 ,给予 5 氮胞苷 (5 azacitidine,AZA)预处理可抑制细胞过度增生 ,细胞形态由长梭型逐渐变短 ,PDGF BB预处理对细胞增生无明显抑制作用 ,细胞容易出现分支 .诱导各组组化染色显示 ,第 2 1日时均有ALB和CK18阳性表达 .诱导 2组～诱导 5组的细胞转圆率、双核细胞比率及ALB ,CK18阳性细胞比例均显著高于对照组及诱导 1组 (P <0 .0 5 ) .结论 :在无血清培养条件下 , 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 类肝细胞 细胞分化 诱导
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大鼠骨髓间充质干细胞向类肝细胞体外诱导分化 被引量：9
7
作者 何文艳 刘树贤 姜慧卿 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第22期2464-2469,共6页
目的:观察不同条件下骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化为类肝细胞的差异.方法:Wistar大鼠24只随机均分为3组,分别为正常对照组、肝纤维化模型组、自拟中药干预组.采用CCl4乳剂皮下注射建立肝纤维化模型.造模成功后中药干预组采用丹... 目的:观察不同条件下骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化为类肝细胞的差异.方法:Wistar大鼠24只随机均分为3组,分别为正常对照组、肝纤维化模型组、自拟中药干预组.采用CCl4乳剂皮下注射建立肝纤维化模型.造模成功后中药干预组采用丹金舒肝胶囊药液灌胃治疗.治疗结束后剖杀大鼠,留取大鼠肝脏标本,HE染色观察各组病理改变.采用密度梯度离心法和贴壁法分离各组大鼠的MSCs,经培养传代获得纯化的MSCs.各组纯化的MSCs采用HGF、FGF-4进行诱导培养.留取15、21、27d细胞培养液进行白蛋白(Alb)、甲胎蛋白(AFP)检测;于27d收集细胞爬片,进行糖原染色和CK-18免疫细胞化学染色.结果:3组15、21和27d各MSCs诱导组AFP水平均高于MSCs非诱导组(P<0.01),其中21dAFP水平最高(肝纤维化模型组:48.94±0.08vs9.90±0.09;中药干预组:49.86±0.29vs8.69±0.62;正常对照组:38.65±0.33vs9.04±0.11,均P<0.01);3组15d各MSCs诱导组与MSCs非诱导组白蛋白水平无统计学意义;21d、27d各MSCs诱导组白蛋白水平均高于MSCs非诱导组(1.11±0.08vs0.32±0.00,1.25±0.04vs0.32±0.00,1.06±0.03vs0.33±0.00;1.52±0.02vs0.33±0.00,1.79±0.01vs0.31±0.03,1.63±0.04vs0.32±0.01,均P<0.01),27d最高.27d各MSCs诱导组糖原染色阳性,免疫细胞化学染色CK-18均阳性,而MSCs非诱导组糖原染色、CK-18均阴性.从AFP、Alb水平综合比较,3组诱导效果发现自拟中药干预组优于其他2组.结论:HGF、FGF-4可在体外诱导实验性大鼠的MSCs分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的类肝细胞;自体MSCs可以作为治疗临床重症肝病的一种细胞来源,而临床联合中药复方治疗可能会使MSCs体外诱导的效果更为理想. 展开更多
关键词 骨髓 间充质干细胞 类肝细胞 大鼠 放射免疫法 免疫细胞化学 肝细胞生长因子 成纤维细胞生长因子4
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人骨髓间充质干细胞体外分化为肝样细胞的实验研究 被引量：9
8
作者 谢金敏 陈建锋 +1 位作者 高毅 姚坤厚 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1439-1442,共4页
目的探索肝细胞生长因子(HGF)联合成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)诱导人骨髓间充质干细胞(HMSCs)向肝细胞方向分化的能力,为生物人工肝及肝细胞移植等找到新的种子细胞来源。方法分别用HGF、FGF-4、HGF+FGF-4诱导HMSCs分化为肝样细胞;以... 目的探索肝细胞生长因子(HGF)联合成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)诱导人骨髓间充质干细胞(HMSCs)向肝细胞方向分化的能力,为生物人工肝及肝细胞移植等找到新的种子细胞来源。方法分别用HGF、FGF-4、HGF+FGF-4诱导HMSCs分化为肝样细胞;以未加诱导因素的HMSCs、L-02人肝细胞株为阴、阳性对照组。相差显微镜观察细胞形态的变化;在不同诱导分化阶段免疫细胞化学染色检测AFP和CK18,并用图像分析法计算HMSCs的分化比率;免疫荧光细胞化学染色法检测AFP、ALB的表达;RT-PCR检测AFP和ALBmRNA表达的情况。结果HMSCs经诱导向肝样细胞转化,变成纺锤形、不规则圆形或多角形细胞。免疫细胞化学染色各诱导组均可检测出AFP和CK18表达,图像分析表明HGF+FGF-4联合诱导分化的AFP、CK18阳性率最高,HGF次之,FGF-4则较弱;免疫荧光细胞化学染色发现各诱导组AFP、ALB均为阳性表达,而阴性对照组则为阴性表达;各诱导组RT-PCR均可检测出AFP和ALBmRNA的表达,而阴性对照组则没有表达。结论HGF、FGF-4、HGF+FGF-4均能诱导HMSCs分化为肝样细胞,分化的肝样细胞能分泌肝细胞特异性产物AFP、ALB、CK18等。以HGF+FGF-4诱导HMSCs分化为肝样细胞的阳性率最高,HGF次之,FGF-4则较弱。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 细胞分化 肝样细胞
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骨髓间充质干细胞向肝细胞样细胞的诱导分化 被引量：7
9
作者 邢全台 孙启龙 +6 位作者 李栋 邢培祥 马瑞萍 陈丰哲 邵美英 姚永远 关彦彦 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第26期2654-2661,共8页
目的:探讨大鼠骨髓间充质细胞向肝细胞样细胞的诱导分化,观察诱导分化细胞的形态和分子生物学特性,及其对急性肝损伤大鼠的治疗作用.方法:分离、培养并纯化大鼠骨髓间充质细胞,培养基中加入肝细胞生长因子(HGF)、纤维生长因子-4(FGF-4)... 目的:探讨大鼠骨髓间充质细胞向肝细胞样细胞的诱导分化,观察诱导分化细胞的形态和分子生物学特性,及其对急性肝损伤大鼠的治疗作用.方法:分离、培养并纯化大鼠骨髓间充质细胞,培养基中加入肝细胞生长因子(HGF)、纤维生长因子-4(FGF-4)及上皮细胞生长因子(EGF),分别于7、14、21、28d观察细胞形态变化,采用RT-PCR方法检测细胞白蛋白(ALB)、甲种胎儿球蛋白(AFP)、细胞角蛋白-18(CK-18)的mRNA表达,将诱导分化28d的细胞经DAPI染料染色后,经门静脉注入同种异体大鼠体内,经24、48、72及168h分批处死大鼠,观察大鼠肝组织内荧光细胞的分布.大鼠腹腔注射硫代乙酰胺制作急性肝衰竭模型,将1×106及5×106个诱导分化细胞经门静脉注入大鼠体内,经48、168h采血查肝功,168h处死大鼠,取肝组织病理学检查.结果:大鼠间充质细胞经上述3种细胞因子诱导后,形态和生物学行为方面都发生向肝细胞样细胞方面的转化,经门静脉注入大鼠体内后,有大量该种细胞在肝组织内分布,24h荧光细胞最多,随时间延长逐渐减少,可持续7d.骨髓间充质细胞的诱导分化细胞经门静脉注入肝损伤模型大鼠体内后,大鼠肝功能有所好转,注入1×106细胞大鼠ALT由注入前238.0±113.5U/L,48h后降至189±68.4U/L,168h后降至149.0±54.2U/L,TBIL由注入前2.9±1.6μmol/L,48h至3.0±1.4μmol/L,168h至1.3±0.3μmol/L;注入5×106个细胞者(ALT)由注入前238.0±113.5U/L,48h后降至169.7±46.0U/L,168h后降至103.7±46.0U/L,TBIL由注入前2.9±1.6μmol/L,48h至2.9±1.3μmol/L,168h至0.9±0.3μmol/L.结论:大鼠骨髓间充质细胞可在某些细胞因子的诱导作用下发生类肝细胞样转化,将转化细胞经门静脉植入同种异体大鼠体内后可在肝组织内存活并对大鼠肝损伤有一定修复作用. 展开更多
关键词 骨髓间充质细胞 肝细胞样细胞 诱导分化 肝细胞生长因子 成纤维细胞生长因子-4
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HGF质粒体内表达诱导脐血干细胞向肝系细胞分化 被引量：7
10
作者 范烨 王学浩 +3 位作者 张峰 李相成 王科 钱晓峰 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第8期767-771,共5页
目的:观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)作用下,脐血干细胞在体内向肝细胞分化的情况．方法:HGF的裸DNA质粒通过尾静脉快速注入6-8周龄的非肥胖糖尿病／重症联合免疫缺陷(NOD／SCID)小鼠体内,酶联免疫吸附法 (ELISA)检... 目的:观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)作用下,脐血干细胞在体内向肝细胞分化的情况．方法:HGF的裸DNA质粒通过尾静脉快速注入6-8周龄的非肥胖糖尿病／重症联合免疫缺陷(NOD／SCID)小鼠体内,酶联免疫吸附法 (ELISA)检测外周血中HGF水平．收集足月妊娠产妇的脐血,磁式分选法选出CD34+造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)．20 μL四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)腹腔注射建立NOD／SCID小鼠急性肝损伤模型,分别输注 CD34+HSC和／或HGF质粒,观察其对死亡率、肝功能恢复的影响,并检测小鼠肝组织内的人源性细胞．结果:快速注入HGF质粒后,体内HGF水平明显上升．实验各组存活率及肝功能恢复情况无明显差异．病理切片显示,联合应用 HGF+HSC的实验组,其肝组织损伤程度最轻, 单独应用HGF或HSC的两个实验组结果类似, 对照组最重．在两组注射HSC的小鼠肝组织中,均可检测到人源性的、分泌白蛋白的肝样细胞,且联合应用HGF的实验组中,此种细胞更多,分布更广．结论:HGF可以促进脐血干细胞向肝细胞分化,并发挥肝细胞功能． 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 造血干细胞 肝细胞
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大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞的实验研究 被引量：6
11
作者 林泽伟 陈斌 倪勇 《中国热带医学》 CAS 2006年第4期574-576,共3页
目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化为肝样细胞的能力。方法利用密度梯度离心法分离、纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞,在特定的培养液中加入肝细胞生长因子(HGF)和表皮细胞生长因子(EGF)联合培养进行定向诱导,分别于1周和2... 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化为肝样细胞的能力。方法利用密度梯度离心法分离、纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞,在特定的培养液中加入肝细胞生长因子(HGF)和表皮细胞生长因子(EGF)联合培养进行定向诱导,分别于1周和2周后通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定经诱导后细胞甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)的表达。结果诱导1周后RT-PCR检测MSCs示AFP表达,诱导2周后的MSCs AFP呈阴性,而ALB检测结果呈阳性。结论MSCs在体外特定的条件下可定向诱导分化为肝样细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 肝细胞生长因子 表皮细胞生长因子 肝样细胞 逆转录-聚合酶链反应
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龙胆苦苷与黄芩素对hiPS诱导的肝样细胞过氧化氢造成的氧化损伤的保护作用 被引量：8
12
作者 徐雯星 曾星 《辽宁中医杂志》 CAS 2019年第4期792-796,I0002,共6页
目的:建立H_2O_2致人诱导多能干细胞(i PSC)诱导的肝样细胞损伤模型并探讨龙胆苦苷与黄芩素对H_2O_2致肝样细胞损伤的保护作用。方法:采用四步诱导法,将人i PSC诱导为肝样细胞,将其分为正常组、模型组、中药单体干预组。除正常组外,其... 目的:建立H_2O_2致人诱导多能干细胞(i PSC)诱导的肝样细胞损伤模型并探讨龙胆苦苷与黄芩素对H_2O_2致肝样细胞损伤的保护作用。方法:采用四步诱导法,将人i PSC诱导为肝样细胞,将其分为正常组、模型组、中药单体干预组。除正常组外,其他组均以H_2O_2造模,建立肝样细胞氧化损伤模型,龙胆苦苷(gentiopicroside,GPS)做预防作用研究,在干预组中先加药,后造模。黄芩素(Baicalein,BAI)做保护作用研究,在干预组中先造模,后加药;通过收集细胞及细胞培养上清液,按照试剂盒的方法测定上清液中天冬氨酸转氨酶(ALT)、丙氨酸转氨酶(AST),细胞中丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与正常组相比,模型组上清中ALT、AST升高,细胞中MDA含量显著升高,SOD活性显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,黄芩素及龙胆苦苷干预组均可显著降低上清液中ALT和AST活性及肝样细胞中MDA含量,显著升高肝样细胞中SOD活性,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:基于人i PSC诱导的肝样细胞成功建立H_2O_2氧化损伤模型,相较于其他肝损伤模型,此次造模的细胞是人源诱导而来,更贴近于人的病理,对肝损伤疾病具有临床指导意义。龙胆苦苷对H_2O_2致人诱导多能干细胞诱导的肝样细胞损伤有显著的预防作用。黄芩素对H_2O_2致人诱导多能干细胞诱导的肝样细胞损伤有显著保护作用。 展开更多
关键词 黄芩素 龙胆苦苷 双氧水 肝样细胞 氧化损伤 肝保护
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人脐带间充质干细胞与肝细胞共培养可分化为肝样细胞 被引量：6
13
作者 李华 文峰 +10 位作者 漆仲春 周进军 朱亚杰 程朋 魏东 苏晓妹 谭勇 彭晶晶 罗巧丽 李东 张涛 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第32期5772-5777,共6页
背景:文献报道,从骨髓与脐带中分离获得的间充质干细胞可在体外连续传代培养,仍保持干细胞的特性,并在多种细胞因子的"鸡尾酒式"诱导下分化为肝细胞样细胞。目的:进一步验证人脐带间充质干细胞在体外正常人肝细胞共培养体系... 背景:文献报道,从骨髓与脐带中分离获得的间充质干细胞可在体外连续传代培养,仍保持干细胞的特性,并在多种细胞因子的"鸡尾酒式"诱导下分化为肝细胞样细胞。目的:进一步验证人脐带间充质干细胞在体外正常人肝细胞共培养体系下是否可分化为肝细胞并探讨其分化方法。方法:采用贴壁法,从脐带中分离培养间充质干细胞,流式细胞仪检测脐带间充质干细胞表面标志。人肝细胞LO2细胞与人脐带间充质干细胞建立共培养体系,不添加外源诱导因子,分别于第7,14,21天,通过RT-PCR法检测肝细胞特异标志物甲胎蛋白、白蛋白、人细胞角蛋白19mRNA的表达,糖原染色进行功能鉴定。结果与结论:从人脐带中可分离得到贴壁生长的间充质干细胞,其中CD29+细胞比例为96.02%,CD105+细胞比例为96.6%,CD34-细胞比例为99.65%,CD105+CD29+双阳性细胞比例为94.84%。与LO2细胞共培养后第7天仅有甲胎蛋白阳性表达;第14天表达白蛋白、人细胞角蛋白19,第21天时,LO2与人脐带间充质干细胞共培养组未出现甲胎蛋白表达;人细胞角蛋白19和白蛋白的表达比第14天略有增强。共培养21d后,糖原染色呈阳性。结果证实,无需额外添加外源诱导因子,脐带间充质干细胞可在人正常肝细胞共培养的微环境中,向正常肝细胞分化。 展开更多
关键词 干细胞 脐带脐血干细胞 脐带间充质干细胞 肝细胞 共培养 细胞分化 细胞培养 肝样细胞 甲胎蛋白 白蛋白 人细胞角蛋白19 省级基金 干细胞图片文章
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上调hHGF促进人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化 被引量：6
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作者 陈丽 崔洁 +4 位作者 侯军霞 贺莉 郑淑梅 曾维政 蒋明德 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期37-41,48,共6页
目的探讨人促肝细胞生长因子(hHGF)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向肝样细胞分化的影响。方法克隆hHGF基因,构建携带hHGF基因的真核表达质粒(pcDNA3.1(+)-hHGF),用脂质体法将pcDNA3.1(+)-hHGF转染hBMSCs,分别通过激光共聚焦、反转录聚... 目的探讨人促肝细胞生长因子(hHGF)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向肝样细胞分化的影响。方法克隆hHGF基因,构建携带hHGF基因的真核表达质粒(pcDNA3.1(+)-hHGF),用脂质体法将pcDNA3.1(+)-hHGF转染hBMSCs,分别通过激光共聚焦、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫蛋白印迹(Western blot)检测hBMSCs中表达hHGF的水平;用酒精性肝硬化患者血清诱导hHGF上调后的hBMSCs,采用Western blot分别检测诱导细胞内甲胎蛋白(AFP)及白蛋白(ALB)的表达变化。结果成功构建pcDNA3.1(+)-hHGF表达质粒;激光共聚焦、RT-PCR、Western blot结果均表明转染后hBMSCs中hHGF分子呈高表达,Western blot结果发现诱导7 d,14 d转染后hBMSCs中AFP、ALB表达明显高于对照组。结论转染pcDNA3.1(+)-hHGF可以明显上调hHGF在hBMSCs中的表达;hBMSCs高表达hHGF后,经酒精性肝硬化血清诱导可明显促进其向肝样细胞分化,为基因治疗终末期肝病提供了一种新方法。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 人促肝细胞生长因子 肝样细胞 甲胎蛋白 白蛋白
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Galectin-3诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞 被引量：6
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作者 谭铭辉 梁宇灵 +5 位作者 黄文斌 程远 蒋泽生 何国林 高毅 潘明新 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1076-1082,共7页
目的探索应用Galectin-3诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞的效果,筛选出所涉及的信号通路,并验证Hippo信号通路。方法对大鼠股骨骨髓间充质干细胞进行提取、分离、传代培养及鉴定。取第3代细胞进行诱导培养,分为SD大鼠BMSCs(A组)... 目的探索应用Galectin-3诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞的效果,筛选出所涉及的信号通路,并验证Hippo信号通路。方法对大鼠股骨骨髓间充质干细胞进行提取、分离、传代培养及鉴定。取第3代细胞进行诱导培养,分为SD大鼠BMSCs(A组)、SD大鼠BMSCs+0.5μg/m L Gal-3(B组)、SD大鼠BMSCs+20 ng/m L HGF(C组)、SD大鼠BMSCs+0.5μg/m L Gal-3+20 ng/m L HGF(D组)和大鼠肝细胞(E组)。分别在诱导后7、14、21、28 d进行细胞形态学观察、糖原染色观察,并行实时定量PCR以及Western blot检测,鉴定其分化情况。取B组细胞行基因芯片检测。将BMSCs与Gal-3、Gal-3+XMU-MP-1(Hippo信号通路抑制剂)分组进行诱导,Western Blot检测YAP、P-YAP、ALB、AFP、CK-18。结果大鼠股骨骨髓分离出的细胞符合骨髓间充质干细胞特性。诱导后,B、C、D组BMSCs形态逐渐向肝样细胞转化,D组28 d时细胞形态与肝细胞相对比相似度最高。糖原染色28 d时A组无染色,B、C、D组染色较前增多,B、C组间无明显差异(P>0.05),D组染色率最高(P<0.05)。Q-PCR检测AFP、ALB、CK-18表达逐渐升高,28 d时B组与C组各指标较接近(P<0.05)。Gal-3与HGF对AFP、ALB的m RNA表达不存在交互效应(AFP:F=0.236,P=0.640;ALB:F=50.639,P=0.000),对CK-18的m RNA表达有协同效应(F=50.639,P=0.000)。Western blot检测A组几乎不表达AFP、ALB及CK18,B、C、D组AFP、ALB及CK18蛋白表达随时间延长,逐渐增加。基因芯片检测发现上调基因27个,下调基因62个。涉及TGF-β、PI3K-Akt及Hippo等信号通路。Gal-3及Gal-3+XMU-MP-1诱导组的YAP表达较空白对照组增加,Gal-3+XMU-MP-1较单独应用Gal-3诱导BMSCs分化的效率高。结论 Galectin-3能够单独诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化,而且联合HGF诱导BMSCs分化的效率更高。诱导过程与TGF-β、PI3K-Akt及Hippo等信号通路相关。抑制Hippo信号通路可提高诱导效率。 展开更多
关键词 半乳糖凝集素-3 骨髓间充质干细胞 肝样细胞 诱导分化 基因芯片 信号通路 Hippo通路
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Transwell 3-D联合共培养促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化的研究 被引量：6
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作者 张胜利 范应中 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1323-1328,共6页
目的 探讨Transwell 3-D联合共培养促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化的可能性.方法 利用克隆杯,从人孕中期羊水标本中分离获得人羊水克隆样细胞来源干细胞,培养扩增后,通过流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定.利用Transwell... 目的 探讨Transwell 3-D联合共培养促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化的可能性.方法 利用克隆杯,从人孕中期羊水标本中分离获得人羊水克隆样细胞来源干细胞,培养扩增后,通过流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定.利用Transwell小室联合共培养肝细胞诱导其向肝样细胞分化,观察诱导后细胞形态的变化,利用细胞免疫荧光检测甲胎蛋白（AFP）、白蛋白（ALB）和细胞角蛋白-18（CK-18）在诱导后细胞中的表达,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝细胞相关基因的表达.结果 利用克隆杯分离出的人羊水克隆样细胞来源干细胞CD44和CD90表达阳性,CD10、CD14、CD34、CD45和人类白细胞抗原DR基因（HLA-DR）表达阴性.诱导2～4周后,肝样细胞出现,检测证实这些细胞表达AFP、ALB、CK-18、GATA结合蛋白-4（GATA4）、肝细胞核因子（HNF）-1α和细胞色素20A（CYP20A）等肝细胞相关标志和基因.结论 Transwell 3-D联合共培养可以促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化. 展开更多
关键词 人羊水克隆样细胞来源干细胞 TRANSWELL 3-D联合共培养 肝样细胞
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肝细胞生长因子联合成纤维细胞生长因子-4诱导人骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞的实验研究 被引量：4
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作者 谢金敏 陈建锋 高毅 《中华普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2006年第11期780-782,共3页
目的探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)联合成纤维细胞生长因子-4 (fibroblast growth factor-4,FGF-4)诱导人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,HMSCs)向肝细胞方向分化的能力。方法分别用HG... 目的探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)联合成纤维细胞生长因子-4 (fibroblast growth factor-4,FGF-4)诱导人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,HMSCs)向肝细胞方向分化的能力。方法分别用HGF、FGF-4、HGF+FGF-4诱导HMSCs分化为肝样细胞。在不同分化阶段用免疫细胞化学染色法检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)和细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18);免疫荧光细胞化学染色法检测AFP、自蛋白(albumin,ALB)的表达; RT-PCR检测AFP和ALB mRNA表达的情况。结果HMSCs经诱导向肝样细胞转化。免疫细胞化学染色各诱导组均可检测出AFP和CK18表达。图像分析表明HGF+FGF-4联合诱导分化的AFP、CK18阳性率最高,HGF次之,FGF-4则较弱;免疫荧光细胞化学染色发现各诱导组AFP、ALB均为阳性表达;各诱导组RT-PCR均可检测出AFP和ALB mRNA的表达,而阴性对照组则没有表达。结论HGF、FGF-4、HGF+FGF-4均能诱导HMSCs分化为肝样细胞,分化的肝样细胞能分泌肝细胞特异性产物AFP、ALB、CK18等。以HGF+FGF-4诱导HMSCs分化为肝样细胞的阳性率最高。 展开更多
关键词 间质干细胞 细胞分化 肝样细胞
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不同诱导条件对大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导类肝细胞的影响 被引量：3
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作者 何文艳 刘树贤 姜慧卿 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第5期473-478,共6页
目的:探讨实验性大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外培养、诱导的最优条件,为MSCs治疗临床重症肝病患者提供参考依据.方法:采用密度梯度离心法和贴壁法分离大鼠MSCs,经培养传代获得纯化的MSCs。采用析因实验,设不同诱导时间、不同浓度的FB... 目的:探讨实验性大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外培养、诱导的最优条件,为MSCs治疗临床重症肝病患者提供参考依据.方法:采用密度梯度离心法和贴壁法分离大鼠MSCs,经培养传代获得纯化的MSCs。采用析因实验,设不同诱导时间、不同浓度的FBS、不同浓度的细胞因子为3个因素,每个因素设不同水平,对纯化的MSCs进行分组诱导培养.留取15、21、27 d细胞培养液进行白蛋白(Alb)、甲胎蛋白(AFP)检测:于27 d时收集细胞爬片,采用过碘酸希夫(PAS)实验进行糖原染色和免疫细胞化学染色检测MSCs中CK-18和CK-19.结果:诱导15、21、27 d,各MSCs诱导组AFP水平均高于MSCs非诱导组(P<0.01),21 d诱导组AFP水平最高:15 d各MSCs诱导组与MSCs非诱导组白蛋白水平无统计学意义,21、27 d各MSCs诱导组白蛋白水平均高于MSCs非诱导组(P<0.01),27 d诱导组白蛋白水平最高.27 d各MSCs诱导组糖原染色阳性,免疫细胞化学染色CK-18、CK-19均阳性,而MSCs非诱导组糖原染色、CK-18、CK-19均阴性.多因素方差分析表明,MSCs体外最佳诱导条件为含200 mL/L FBS的DMEM+肝细胞生长因子(HGF)20μg/L+成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)20μg/L.结论:HGF和FGF-4可在体外诱导实验性大鼠MSCs分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的类肝细胞:不同浓度的FBS、HGF和FGF-4影响MSCs的体外分化;MSCs可作为治疗临床重症肝病的一种细胞来源. 展开更多
关键词 骨髓 间充质千细胞 类肝细胞 肝细胞生长因子 成纤维细胞生长因子-4
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人胎骨髓MSCs的分离鉴定及其向肝细胞样细胞的分化 被引量：4
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作者 王跃春 张洹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2205-2209,共5页
目的:分离鉴定人胎骨髓中的间质干细胞(MSCs),探索其体外培养的生物学特性,并在化学因子作用下诱导其向肝细胞分化。方法:利用细胞差速贴壁生长特性分离纯化人胎骨髓MSCs;利用流式细胞仪检测其细胞周期和表面标志;添加常规诱导液诱导其... 目的:分离鉴定人胎骨髓中的间质干细胞(MSCs),探索其体外培养的生物学特性,并在化学因子作用下诱导其向肝细胞分化。方法:利用细胞差速贴壁生长特性分离纯化人胎骨髓MSCs;利用流式细胞仪检测其细胞周期和表面标志;添加常规诱导液诱导其向脂肪、成骨方向分化;采用DMSO、β-Me和5-aza联合预诱导24h,换用H-DMEM和rh-HGF正式诱导人胎骨髓MSCs向肝细胞分化,并从形态学和特异性细胞化学染色等方面加以鉴定。结果:从人胎骨髓中成功分离、纯化得到MSCs,P4代MSCs有92.3%的细胞处于G0/G1期;P5代MSCs有96.1%的细胞处于G0/G1期。流式细胞仪检测P3代MSCs结果显示:人胎骨髓MSCs表达CD29、CD44、CD105和CD106,不表达造血细胞标志CD34、CD45,不表达与GVHD相关的HLA-DR、CD80、CD86、CD40、CD40L。在经典的诱导条件下,人胎骨髓MSCs可快速向脂肪及成骨细胞分化;在上述诱导条件下,人胎肝MSCs可分化为类肝细胞,表达特异性抗原甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)。结论:人胎骨髓中含有丰富的MSCs,人胎骨髓来源的MSCs具有较强的多向分化潜能,经DMSO、β-Me和5-aza联合预诱导及rh-HGF、nictinion等化学因子的作用,易向肝细胞样细胞分化,且免疫原性弱,是组织工程(生物型人工肝)的较为理想的种子细胞。 展开更多
关键词 人胎儿骨髓 间质干细胞 细胞分化 肝细胞样细胞
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表达肝细胞生长因子的大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞 被引量：4
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作者 李淑华 高丽莲 +2 位作者 陈系古 付强 张齐好 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1118-1123,共6页
目的:探讨悬滴培养诱导稳定表达人肝细胞生长因子(hHGF)的大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)向肝样细胞分化的效应。方法:体外分离和培养rMSCs,采用流式细胞术检测干细胞表面标志分子CD44、CD90、CD34和CD45的表达率;构建重组逆转录病毒表达... 目的:探讨悬滴培养诱导稳定表达人肝细胞生长因子(hHGF)的大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)向肝样细胞分化的效应。方法:体外分离和培养rMSCs,采用流式细胞术检测干细胞表面标志分子CD44、CD90、CD34和CD45的表达率;构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-hHGF,包装病毒感染rMSCs,获得稳定表达hHGF的细胞株hHGF-rMSCs;分别对rMSCs和hHGF-rMSCs进行悬滴培养,在培养第7、14和21天,通过RT-qPCR和免疫荧光技术检测白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(APF)和角蛋白18(CK-18)在mRNA和蛋白水平上的表达,此外,还利用ELISA的方法检测培养液上清中ALB的分泌。结果:第3代rMSCs高表达CD44和CD90,几乎不表达CD34和CD45;构建表达载体后,成功建立了hHGF-rMSCs细胞株,且经过悬滴培养后,在第7~21天都呈现ALB、AFP和CK-18在mRNA水平上的高表达(P<0.01);免疫荧光结果显示,AFP蛋白在第21天出现阳性表达,而ALB和CK-18蛋白在第7天就呈现阳性表达;在第7~21天,ELISA法均检测到hHGF-rMSCs细胞培养上清中ALB的分泌增多(P<0.01)。结论:将HGF基因导入rMSCs,经悬滴培养可诱导分化为肝样细胞,可能为临床肝脏疾病的细胞治疗和体外生物人工肝提供新型种子细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 悬滴培养 肝细胞生长因子 肝样细胞
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