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小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究 被引量:3
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作者 江海洪 王宇明 +3 位作者 刘国栋 陈耀凯 李俊刚 赵文利 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期503-506,共4页
目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,检测HPCs在小鼠脾脏内分化和移植细胞的功能及其在脾脏组织中的整合情况,探讨肝细胞合适的替换治疗细胞来源。方法体外培养ESC并制备拟胚体(EBs)... 目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,检测HPCs在小鼠脾脏内分化和移植细胞的功能及其在脾脏组织中的整合情况,探讨肝细胞合适的替换治疗细胞来源。方法体外培养ESC并制备拟胚体(EBs),体外诱导EBs 18 d后得到HPCs,然后用Hochest 3342荧光标记HPCs并制备成6.0×107/m l细胞悬液。移植受体小鼠用2乙-酰氨基芴(2-AAF)处理,移植前受体鼠经过7 Gy60Coγ全身辐照和50%肝脏切除,造成小鼠体内对肝细胞的极大需求;然后将0.1 m l含6.0×106HPCs细胞悬液经尾静脉注射移植入脾脏,细胞移植4周后,检测移植细胞在小鼠脾脏整合分化情况。结果体外培养ESC并制备出EBs,EBs经体外诱导为HPCs,并将HPCs移植到小鼠脾脏,4周后观察到移植细胞能够嵌合到受体脾脏组织,在脾脏组织中未形成畸胎瘤,并且移植细胞能表达肝细胞较特异标志物白蛋白、CK19和糖原PAS染色呈阳性反应。结论本实验建立一种将体外ESC诱导的HPCs移植并整合到脾脏的细胞移植技术,为研究肝细胞分化的分子机制和肝病的细胞替换治疗提供基础。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 脾脏 肝前体细胞 细胞移植 2-乙酰氨基芴
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骨形态发生蛋白-4对肝干细胞增殖与分化的影响 被引量:2
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作者 董娟娟 曾珊 +3 位作者 欧阳淼 黄增辉 Yuewen Gong 申竑 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期539-545,共7页
目的:探讨骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对大鼠肝干细胞系WB-F344的增殖及分化的影响。方法:采用50 ng/mL的基因重组BMP-4作用于WB-F344细胞,以BMP-4拮抗剂Noggin(200 ng/mL)阻断BMP-4的作用为对照。在实验不同时间点,通过四甲基偶氮唑盐(MTT... 目的:探讨骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对大鼠肝干细胞系WB-F344的增殖及分化的影响。方法:采用50 ng/mL的基因重组BMP-4作用于WB-F344细胞,以BMP-4拮抗剂Noggin(200 ng/mL)阻断BMP-4的作用为对照。在实验不同时间点,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测BMP-4对WB-F344增殖的影响,透射电镜下观察细胞的超微结构特征,RT-PCR检测各试验组中WB-F344细胞可能分化表型特异性分子标志物的mRNA表达。结果:细胞增殖实验显示:在不同作用时间点,BMP-4干预组的细胞吸光值均高于Noggin处理组和空白对照组。透射电镜下可观察到BMP-4干预后的WB-F344细胞具有分化良好的上皮细胞的超微结构特征。RT-PCR显示BMP-4诱导WB-F344分化后,肝干细胞的肝细胞特异性分子标志物的mRNA显著表达。结论:BMP-4可促进肝干细胞WB-F344的增殖,并诱导其向肝细胞定向分化。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白-4 肝干细胞 增殖 分化
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神经前体细胞表达发育调控样基因4在乙型肝炎病毒复制中的作用 被引量:3
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作者 陈邦涛 冯旭娇 +3 位作者 杨青青 刘明社 赵中夫 张芸 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 2020年第8期501-506,共6页
目的研究神经前体细胞表达发育调控样基因4(neural precursor cell-expressed developmentally down-regulated gene 4-like,NEDD4L)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响及其可能的分子机制。方法采用Lipofectamine2000分... 目的研究神经前体细胞表达发育调控样基因4(neural precursor cell-expressed developmentally down-regulated gene 4-like,NEDD4L)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响及其可能的分子机制。方法采用Lipofectamine2000分别将靶向NEDD4L的小干扰RNA、NEDD4L的过表达质粒(pcDNA3.1-NEDD4L-HA)、HBV复制质粒(pGEM-HBV1.3)和poly(dAT:dAT)瞬时转染至HepG2细胞,并以可稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测NEDD4L、α干扰素、β干扰素、干扰素刺激基因56(interferon-stimulated gene 56,ISG56)、黏液病毒抗性蛋白A(myxovirus resistance protein A,MxA)、寡腺苷酸合成酶(oligoadenylate synthetase,OAS)等的mRNA水平,以及HBV DNA和3.5 kb HBV RNA的表达水平;采用蛋白质印迹法验证NEDD4L沉默或过表达效果,并检测相关信号分子的蛋白质水平;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中β干扰素产量。统计学方法采用t检验。结果HepG2.2.15细胞中的NEDD4L mRNA和蛋白质水平分别为10.53±0.47和4.17±0.43,分别高于HepG2细胞中的1.00±0.05和1.26±0.25,差异均有统计学意义(t=3.27,P=0.008;t=1.68,P=0.030)。在敲减NEDD4L基因表达的细胞中,上清液HBV DNA表达水平为0.32±0.09,低于对照组的1.00±0.05,差异有统计学意义(t=-0.93,P=0.020);3.5 kb HBV RNA表达水平为0.49±0.11,低于对照组的1.00±0.05,差异有统计学意义(t=-0.68,P=0.040)。与对照组相比,NEDD4L敲减组的β干扰素、ISG56、MxA和OAS的mRNA相对表达水平均上升,差异均有统计学意义(t=4.66、9.38、7.29、7.01,均P<0.01)。NEDD4L敲减组β干扰素含量在poly(dAT:dAT)处理和水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)刺激时分别为(776.41±115.49)ng/L和(961.21±130.19)ng/L,分别高于对照组的(320.15±56.05)ng/L和(440.17±67.82)ng/L,差异均有统计学意义(t=2.43,P=0.020;t=2.85,P=0.030);NEDD4L过表达组β干扰素含量在poly(dAT:dAT)处理和VSV刺激时分别为(156.18±26.47 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 神经前体细胞表达发育调控样基因4 干扰素类
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成人慢性乙型肝炎合并急性淋巴细胞白血病1例报告 被引量:1
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作者 李萍英 杨永耿 +1 位作者 马颖才 陆伦根 《临床肝胆病杂志》 CAS 2015年第11期1894-1896,共3页
机体对HBV特异性细胞免疫反应的活力、多样性及效应功能是HBV感染后转归的关键,因此,HBV在体内持续存在及复制是引起机体免疫功能紊乱和肝炎慢性化的主要原因。近年来,有关乙型肝炎并发血液病的报道逐渐增多,现将临床工作中遇到的1例成... 机体对HBV特异性细胞免疫反应的活力、多样性及效应功能是HBV感染后转归的关键,因此,HBV在体内持续存在及复制是引起机体免疫功能紊乱和肝炎慢性化的主要原因。近年来,有关乙型肝炎并发血液病的报道逐渐增多,现将临床工作中遇到的1例成人慢性乙型肝炎合并急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的病例报告如下。 展开更多
关键词 肝炎 乙型 慢性 前体细胞淋巴母细胞白血病淋巴瘤 病例报告
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