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荷包猪SLA-2重链基因偶合底物肽及表达研究 被引量:7
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作者 张香春 冯磊 +3 位作者 张鑫 何潇涵 吴子环 高凤山 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期17-20,共4页
目的:构建荷包猪SLA-2重链基因偶合底物肽(BSP)并研究其在pET-21a(+)中的蛋白表达。方法:设计荷包猪SLA-2-BSP复合基因引物,PCR扩增荷包猪SLA-2-HB-BSP复合基因,并克隆至pMD19-T Simple Vector,经酶切鉴定后,将SLA-2-HB-BSP复合基因... 目的:构建荷包猪SLA-2重链基因偶合底物肽(BSP)并研究其在pET-21a(+)中的蛋白表达。方法:设计荷包猪SLA-2-BSP复合基因引物,PCR扩增荷包猪SLA-2-HB-BSP复合基因,并克隆至pMD19-T Simple Vector,经酶切鉴定后,将SLA-2-HB-BSP复合基因与表达系统pET-21a(+)连接,并转化BL21(Rosetta)菌进行诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白。结果:PCR结果显示,SLA-2-BSP大小为900bp左右,并成功克隆至pMD19-T Simple Vector载体,酶切后大小为876bp,该基因连接pET-21 a(+)并转化宿主菌BL21(Rosetta)后,经诱导表达和SDS-PAGE检测,目标蛋白大小为34.4kDa,经优化后目的蛋白相对表达含量达到了45%。结论:该研究成功构建荷包猪SLA-2偶合BSP的pET-21a重组表达系,为下一步构建猪SLAⅠ类分子四聚体奠定了基础。 展开更多
关键词 荷包猪 SLA-2 重链基因 底物肽
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石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH基因重排的检测 被引量:4
2
作者 李振玲 陈杰 +3 位作者 周炜洵 罗杰 张洁萍 沈悌 《诊断病理学杂志》 CSCD 2001年第5期280-281,共2页
目的 探讨克隆性免疫球蛋白重链第三互补决定簇区 (IgHCDR3)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤 (B NHL)诊断方面的价值。方法 采用半巢式PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)及银染技术 ,检测 38例B NHL、4例T NHL及 10例慢性扁桃腺炎 ,经福... 目的 探讨克隆性免疫球蛋白重链第三互补决定簇区 (IgHCDR3)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤 (B NHL)诊断方面的价值。方法 采用半巢式PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)及银染技术 ,检测 38例B NHL、4例T NHL及 10例慢性扁桃腺炎 ,经福尔马林固定、石蜡包埋病理组织的克隆性IgHCDR3重排。结果  2 9例B NHL及1例免疫组化未能明确细胞来源的NHL克隆性IgHCDR3重排阳性 ;4例T NHL及 10例慢性扁桃腺炎克隆性IgHC DR3重排阴性。结论 克隆性IgHCDR3重排可作为B NHL与反应性增生鉴别的特异性标志 。 展开更多
关键词 淋巴瘤 B细胞 免疫球蛋白重链 基因重排 克隆性 聚合酶链反应
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CHO细胞外源抗体基因拷贝数实时定量PCR检测方法的建立及验证 被引量:1
3
作者 张慧 高文丽 +2 位作者 李凤智 胡加亮 李剑 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第1期72-78,共7页
目的 采用SYBR GreenⅠ染料建立实时定量PCR法检测CHO细胞外源抗体轻链(light chain,LC)、重链(heavy chain,HC)基因拷贝数,并进行方法的验证及初步应用。方法 以CHO细胞中稳定表达的B2m(β2-microglobulin)基因作为内参基因,分别设计... 目的 采用SYBR GreenⅠ染料建立实时定量PCR法检测CHO细胞外源抗体轻链(light chain,LC)、重链(heavy chain,HC)基因拷贝数,并进行方法的验证及初步应用。方法 以CHO细胞中稳定表达的B2m(β2-microglobulin)基因作为内参基因,分别设计适宜的LC和HC基因引物及内参基因引物,确定实时定量PCR方法的反应体系和反应程序。对建立的方法进行特异性、线性、精密性及耐用性验证,并采用建立的方法检测重组细胞株工作细胞库(WCB)及不同传代次数细胞中LC和HC基因拷贝数。结果 外源基因与内参基因引物可特异性结合目标片段;B2m、LC、HC基因引物扩增效率分别为106.7%、106.3%和99.1%,线性方程相关系数均大于0.99,具有良好的线性关系;精密性验证的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于1%;短时间内少次冻融对检测结果影响较小。利用建立的方法检测不同代次重组细胞株LC和HC基因拷贝数,未见明显变化。结论 成功建立了CHO细胞外源基因拷贝数实时定量PCR检测方法,该方法特异性、线性、精密性及耐用性良好,为其他CHO细胞株表达的外源基因拷贝数检测提供了参考。 展开更多
关键词 实时定量PCR CHO细胞 抗体 轻链 重链 基因拷贝数
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鲢鱼骨骼肌肌球蛋白重链基因的cDNA克隆与表达 被引量:4
4
作者 党静 陶妍 +1 位作者 王孙勇 鲍其泠 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期215-219,共5页
肌球蛋白分子含有2个约200kD的重链亚基和4个约20kD的轻链亚基,重链亚基由球状的头部(S1)和α-双螺旋的杆部(Rod)组成。在鱼类肌肉蛋白质的组成中,肌球蛋白约占肌原纤维蛋白的50%以上,并且其基因在生物进化过程中的变异性很大... 肌球蛋白分子含有2个约200kD的重链亚基和4个约20kD的轻链亚基,重链亚基由球状的头部(S1)和α-双螺旋的杆部(Rod)组成。在鱼类肌肉蛋白质的组成中,肌球蛋白约占肌原纤维蛋白的50%以上,并且其基因在生物进化过程中的变异性很大,以致肌原纤维蛋白性质的变化主要是由肌球蛋白的变化引起的。 展开更多
关键词 鲢鱼 肌球蛋白重链 同工型基因 CDNA克隆 RT-PCR
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Clonal immunoglobulin heavy chain and T-cell receptor γ gene rearrangements in primary gastric lymphoma 被引量:3
5
作者 Guo-Dong Shan Feng-Ling Hu +6 位作者 Ming Yang Hong-Tan Chen Wen-Guo Chen Yun-Gui Wang Li-Hua Chen You-Ming Li Guo-Qiang Xu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2013年第34期5727-5731,共5页
AIM:To study the diagnostic value of immunoglobulin heavy chain(IgH)and T-cell receptorγ (TCR-γ)gene monoclonal rearrangements in primary gastric lymphoma(PGL).METHODS:A total of 48 patients with suspected PGL at ou... AIM:To study the diagnostic value of immunoglobulin heavy chain(IgH)and T-cell receptorγ (TCR-γ)gene monoclonal rearrangements in primary gastric lymphoma(PGL).METHODS:A total of 48 patients with suspected PGL at our hospital were prospectively enrolled in this study from January 2009 to December 2011.The patients were divided into three groups(a PGL group,a gastric linitis plastica group,and a benign gastric ulcer group)based on the pathological results(gastric mucosal specimens obtained by endoscopy or surgery)and follow-up.Endoscopic ultrasonography(EUS)and EUSguided biopsy were performed in all the patients.The tissue specimens were used for histopathological examination and for IgH and TCR-γ gene rearrangement polymerase chain reaction analyses.RESULTS:EUS and EUS-guided biopsy were successfully performed in all 48 patients.In the PGL group(n=21),monoclonal IgH gene rearrangements were detected in 14(66.7%)patients.A positive result for each set of primers was found in 12(57.1%),8(38.1%),and 4(19.0%)cases using FR1/JH,FR2/JH,and FR3/JH primers,respectively.Overall,12(75%)patients with mucosal-associated lymphoid tissue lymphoma(n=16)and 2(40%)patients with diffuse large B-cell lymphoma(n=5)were positive for monoclonal IgH gene rearrangements.No patients in the gastric linitis plastica group(n=17)and only one(10%)patient in the benign gastric ulcer group(n=10)were positive for a monoclonal IgH gene rearrangement.No TCRgene monoclonal rearrangements were detected.The sensitivity of monoclonal IgH gene rearrangements was 66.7%for a PGL diagnosis,and the specificity was96.4%.In the PGL group,8(100%)patients with stage IIE PGL(n=8)and 6(46.1%)patients with stage IE PGL(n=13)were positive for monoclonal IgH gene rearrangements.CONCLUSION:IgH gene rearrangements may be associated with PGL staging and may be useful for the diagnosis of PGL and for differentiating between PGL and gastric linitis plastica. 展开更多
关键词 IMMUNOGLOBULIN heavy chain T-CELL receptor γ gene REARRANGEMENT Primary gastric lymphoma Endoscopic BIOPSY specimen
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儿童急性淋巴细胞白血病IgH基因重排的定量检测研究 被引量:4
6
作者 崔蕾 李志刚 +1 位作者 高超 吴敏媛 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1119-1122,共4页
目的建立免疫球蛋白重链(IgH)的实时定量(RQ)-PCR 检测体系,以用于儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)微小残留病(MRD)检测。方法采用定性 PCR 筛选109例儿童 B 细胞 ALL(B-ALL)IgH 基因单克隆重排,根据连接区序列设计等位基因特异性引物,应用... 目的建立免疫球蛋白重链(IgH)的实时定量(RQ)-PCR 检测体系,以用于儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)微小残留病(MRD)检测。方法采用定性 PCR 筛选109例儿童 B 细胞 ALL(B-ALL)IgH 基因单克隆重排,根据连接区序列设计等位基因特异性引物,应用 RQ-PCR 技术,采用胚系 Taqman 探针与引物,在41例患儿中建立 RQ-PCR 定量检测方法,并分析其敏感度、特异性等。结果109例儿童 B-ALL 初诊标本中 IgH 单克隆重排有48例,经测序分析发现,V、D、J 片段频率最高的分别为 V3家族、D3家族和 J4家族。RQ-PCR 方法扩增48例 IgH 单克隆重排的初诊 DNA,其中41例可重复敏感度和最大敏感度均≤10^(-4),非特异性扩增的循环阈值(Ct 值)均>40,与特异性扩增 Ct值的差距均>3。标准曲线斜率均值为-3.31±0.19,截距均值为37.66±1.23,相关系数均为0.97以上。结论以 IgH 基因重排为靶分子,采用 RQ-PCR 方法和胚系探针策略检测儿童 B-ALL,敏感性≤10^(-4),并具有较高的特异性,适于 MRD 的定量研究。 展开更多
关键词 白血病 淋巴细胞 急性 肿瘤 残余 免疫球蛋白类 重链 基因重排
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免疫球蛋白重链基因重排及bcl-2/J_H融合基因检测眼眶淋巴细胞增生性疾病 被引量:2
7
作者 颜建华 吴中耀 +1 位作者 黄树其 李永平 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期388-391,I007-001,共5页
目的 探讨检测免疫球蛋白重链 (immunoglobulinsheavy chain ,IgH)基因重排及bcl 2 /JH融合基因在眼眶淋巴细胞增生性疾病诊断中的意义。方法 对 1994年 1月至 1999年 12月我院通过手术或活检取得的 4 8例眼眶淋巴细胞增生性疾病患者... 目的 探讨检测免疫球蛋白重链 (immunoglobulinsheavy chain ,IgH)基因重排及bcl 2 /JH融合基因在眼眶淋巴细胞增生性疾病诊断中的意义。方法 对 1994年 1月至 1999年 12月我院通过手术或活检取得的 4 8例眼眶淋巴细胞增生性疾病患者眼眶组织的石蜡标本行光镜、免疫组织化学检查及聚合酶链反应 (PCR)扩增IgH可变区第三框架区 (thirdframeworkregion ,FR3)基因重排及bcl 2 /JH融合基因检测分析。结果 FR3重排的PCR扩增显示 2 2例标本为淋巴细胞单克隆增生。恶性淋巴瘤、良性反应性淋巴细胞增生及淋巴细胞性炎性假瘤的阳性率分别为 75 0 %、4 0 0 %及 16 7%。bcl 2 /JH融合基因的PCR扩增示恶性淋巴瘤的阳性率为 30 0 % ,良性反应性淋巴细胞增生及淋巴细胞性炎性假瘤患者检查结果均为阴性。结论 PCR扩增的FR3基因重排检测对诊断眼眶淋巴细胞增生性疾病有重要价值 ;bcl 2 /JH 融合基因检测阳性率偏低 。 展开更多
关键词 免疫球蛋白重链 眶疾病 淋巴组织增殖性疾病 基因重排 BCL-2
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实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数 被引量:3
8
作者 薛建华 黄雪怡 徐水清 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第5期523-527,共5页
目的建立实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数。方法以分别带有抗体轻链和重链的质粒作为标准品,进行实时定量PCR反应,建立标准曲线。提取转染抗体轻重链基因的CHO细胞基因组DNA,进行定量PCR反应,通过标准曲线... 目的建立实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数。方法以分别带有抗体轻链和重链的质粒作为标准品,进行实时定量PCR反应,建立标准曲线。提取转染抗体轻重链基因的CHO细胞基因组DNA,进行定量PCR反应,通过标准曲线,再根据10 ng CHO基因组中含有的单拷贝基因的数量,分别计算得到抗体的轻链和重链基因在CHO细胞中的拷贝数。结果分别建立了抗体轻链和重链基因的拷贝数标准曲线,标准曲线的相关系数均在0.99以上,PCR扩增效率分别为91.6%和91.8%,具有良好的特异性。随着细胞培养代次的增加,轻链基因和重链基因的拷贝数均出现降低的现象。结论成功建立了实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻链和重链基因的拷贝数,可用于外源抗体基因在CHO细胞中的遗传稳定性研究,也为高表达细胞株的获得提供了一种检测方法。 展开更多
关键词 实时定量PCR 转基因 CHO细胞 单克隆抗体 轻链 重链 基因拷贝数
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北京长白杂交猪IgGH链基因CH2-CH3的克隆、序列分析及表达质粒构建 被引量:3
9
作者 李新生 高凤山 +4 位作者 李云岗 崔保安 陈红英 崔沛 夏春 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-6,共6页
根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2 CH3序列.将PCR产物纯化回收后,... 根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2 CH3序列.将PCR产物纯化回收后,插入到含LacZ基因的克隆载体pGEM-T Easy中,转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆.将所克隆的目的片断亚克隆到原核表达载体pQE 30,构建重组质粒pQE 30/PIgG CH2 CH3.将重组表达质粒转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析.结果表明,本研究克隆了猪IgG H链基因CH2 CH3序列,全长663 bp,编码221个氨基酸,利用Gentyx version 6.0软件将CH2 CH3基因的核苷酸序列与GenBank中的参考序列比较,其核苷酸序列同源率为99.551%,推导的氨基酸序列同源率为100%.将pQE 30/PIgG CH2 CH3转化JM 109感受态细胞,表达的融合蛋白相对分子质量约为26.95 ku,经IPTG诱导2 h,表达量约占菌体总蛋白41.5%. 展开更多
关键词 猪IgG H链基因 CH2和CH3 基因克隆 DNA序列分析 原核表达
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儿童急性淋巴细胞白血病特异性标记物的精准检测方法研究 被引量:3
10
作者 刘丽晓 岳冬梅 +5 位作者 杨贵生 赵辉 周晋 刘淑贤 贾昆 王宁 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第32期6280-6284,共5页
目的:T细胞和免疫球蛋白重链基因重排是微小残留病灶水平的特异性标记物,而微小残留病灶的水平与儿童急性淋巴细胞白血病的复发强烈相关。应用传统的聚合酶链式反应方法来监测IgH/TCR基因重排不仅耗时、耗人力,而且敏感度较低。本研究... 目的:T细胞和免疫球蛋白重链基因重排是微小残留病灶水平的特异性标记物,而微小残留病灶的水平与儿童急性淋巴细胞白血病的复发强烈相关。应用传统的聚合酶链式反应方法来监测IgH/TCR基因重排不仅耗时、耗人力,而且敏感度较低。本研究旨在探索一种更为高效和敏感与实用的监测IgH/TCR基因重排的精准检测方法。方法:应用多重PCR技术检测26个患有急性淋巴细胞白血病的儿童的外周血样品中的标记物,这些儿童是在中国哈尔滨市最近两年内被诊断的患者。分别应用基因扫描和毛细血管电泳方法检测IgH(FRⅠ,FRⅡ,FRⅢ)/TCR(TCRβ,TCRγ)基因重排和分析PCR产物的片段。结果:IgH/TCR基因重排和对IgH基因重排的阳性率分别为92.3%和75%,在26个病例中,4个复发病人的IgH的三个片段(FRⅠ,FRⅡ,FRⅢ)基因重排显示阳性。进一步分析显示复发与IgH基因重排呈线性相关。结论:实验与临床应用表明,基因扫描这种方法对于IgH/TCR基因重排的检测是可靠的、实用的,因而可用于儿童急性淋巴细胞白血病的诊断和随访。 展开更多
关键词 儿童急性淋巴细胞白血病 细胞受体 免疫球蛋白重链 基因重排
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免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排在非霍奇金淋巴瘤中检测的临床意义 被引量:1
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作者 佟红艳 金洁 楼基余 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2001年第1期5-8,共4页
目的 :探讨免疫球蛋白重链 ( Ig H)和 T细胞受体 γ( TCRγ)基因重排在非霍奇金淋巴瘤( NHL )中的检测意义。方法 :用 PCR方法检测 2 5例 NHL和 1例反应性淋巴结炎患者 ,及 2 0例正常人骨髓、周围血和 /或淋巴结单个核细胞 ( MNCs)中克... 目的 :探讨免疫球蛋白重链 ( Ig H)和 T细胞受体 γ( TCRγ)基因重排在非霍奇金淋巴瘤( NHL )中的检测意义。方法 :用 PCR方法检测 2 5例 NHL和 1例反应性淋巴结炎患者 ,及 2 0例正常人骨髓、周围血和 /或淋巴结单个核细胞 ( MNCs)中克隆性 Ig H、TCRγ基因重排。结果 :克隆性Ig H和 /或 TCRγ基因重排在 2 5例 NHL 中检出为 84.0 % ( 2 1 / 2 5 ) ;克隆性 Ig H基因重排在 B-NHL和 T-NHL中检出分别为 86.7% ( 1 3 / 1 5 )和 2 0 .0 % ( 2 / 1 0 ) ,克隆性 TCRγ基因重排分别为5 3 .3 % ( 8/ 1 5 )和 80 .0 % ( 8/ 1 0 )。 1例反应性淋巴结炎和 2 0例正常人均未检测到 Ig H和 TCRγ基因重排。结论 :Ig H、TCRγ基因重排检测有助于 NHL 的诊断和鉴别诊断 ,及发现 NHL 展开更多
关键词 免疫球蛋白类 重链 基因重排 T细胞抗原受体γ链 非霍奇金淋巴瘤
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一步及半巢式PCR检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH重排的比较
12
作者 李振玲 沈悌 +4 位作者 陈杰 周炜洵 罗杰 张洁萍 郦筱能 《中日友好医院学报》 2000年第5期251-254,共4页
目的 :建立一种简便有效的方法 ,来检测B细胞非霍奇金淋巴瘤 (B NHL)石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链 (IgH)基因重排。 方法 :以IgH的第三互补决定簇区 (IgH CDR 3)为标志 ,用消化煮沸法和酚 氯仿法提取 36例B NHL及 1 0例扁桃体炎的石蜡... 目的 :建立一种简便有效的方法 ,来检测B细胞非霍奇金淋巴瘤 (B NHL)石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链 (IgH)基因重排。 方法 :以IgH的第三互补决定簇区 (IgH CDR 3)为标志 ,用消化煮沸法和酚 氯仿法提取 36例B NHL及 1 0例扁桃体炎的石蜡包埋组织的基因组DNA ,比较两者进行一步及半巢式聚合酶链反应 (SnPCR) ,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后检测克隆性IgH重排的结果。 结果 :B NHL组 ,34例经酚 氯仿法提取DNA ,其一步及SnPCR检测克隆性IgH CDR 3重排的阳性率分别为 2 6 5%和 76 5% (P <0 0 5) ;2 7例经消化煮沸法提取DNA ,其一步及SnPCR的阳性率分别为 7 4%和 66 7% (P <0 0 5) ;2 5例同时用上述 2种方法提取DNA ,SnPCR的阳性率分别为 76%和 68% (P >0 0 5)。对照组克隆性IgH重排阴性。结论 :消化煮沸法与酚 氯仿法提取的石蜡包埋组织的DNA均可用于IgH重排的检测 ,前者简便、经济、低毒 ,值得推荐。检测B NHL石蜡包埋组织的克隆性IgH重排 ,SnPCR优于一步PCR。 展开更多
关键词 淋巴瘤 B细胞 免疫球蛋白类 PCR
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中国扩张型心肌病与β-肌球蛋白重链基因的相关性研究 被引量:1
13
作者 程宽 王齐兵 +6 位作者 秦胜梅 李敏 李高平 陈瑞珍 杨英珍 葛均波 陈灏珠 《中国临床医学》 北大核心 2007年第2期137-138,共2页
目的:研究β-肌球蛋白重链基因(MYH-7)在中国扩张型心肌病(DCM)患者中的突变情况。方法:对81例DCM患者(其中8例为家族性DCM先证者)进行MYH-7基因突变扫描,用聚合酶链反应分别扩增MYH-7基因功能区的15个外显子片断,双脱氧末端终止法测序... 目的:研究β-肌球蛋白重链基因(MYH-7)在中国扩张型心肌病(DCM)患者中的突变情况。方法:对81例DCM患者(其中8例为家族性DCM先证者)进行MYH-7基因突变扫描,用聚合酶链反应分别扩增MYH-7基因功能区的15个外显子片断,双脱氧末端终止法测序。结果:在所有DCM患者中未检出MYH-7的致病突变,仅在1例散发性DCM患者的7号外显子检出同义突变。结论:MYH-7可能不是中国DCM患者的主要致病候选基因。 展开更多
关键词 扩张型心肌病 家族性扩张型心肌病 肌球蛋白重链 基因 突变
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IgH不同区域基因重排引物的分析及在石蜡淋巴瘤诊断中的应用 被引量:2
14
作者 齐宗利 张宝 +2 位作者 韩西群 朱梅刚 赵彤 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1964-1967,共4页
目的通过生物信息学方法分析并优化免疫球蛋白重链(IgH)不同框架(FR)区域基因重排的引物,探索其对石蜡包埋的淋巴瘤组织基因重排检测中的应用。方法通过Clustal W软件比较44条有效的IgH可变区和6条J区的基因片段,选取3对(IgHFR1、FR2、... 目的通过生物信息学方法分析并优化免疫球蛋白重链(IgH)不同框架(FR)区域基因重排的引物,探索其对石蜡包埋的淋巴瘤组织基因重排检测中的应用。方法通过Clustal W软件比较44条有效的IgH可变区和6条J区的基因片段,选取3对(IgHFR1、FR2、FR3区各一对,分别为P1c,P2A,P31)IgH基因重排引物作为B细胞基因重排引物。另选一对TCRγ引物作为T细胞基因重排引物。通过PCR扩增,检测经形态学及免疫组织化学确诊的101例(80例B细胞淋巴瘤、14例T细胞淋巴瘤和7例淋巴结反应性增生组织)石蜡包埋组织标本的基因重排状况。以DG75、Jurkat淋巴瘤细胞系DNA作为B和T细胞淋巴瘤基因重排的阳性对照,以反应性增生组织DNA作为阴性对照。结果IgHFR1、FR2和FR3区域引物对80例B细胞淋巴瘤的阳性检出率分别为37.5%(30/80)、52.5%(42/80)和70.0%(56/80),在14例T细胞淋巴瘤中均为7.1%,三者的检出率两两之间差异有显著性;IgHFR3区和IgHFR2区引物的组合可将其检出率提高到83.9%。以上引物在7例反应性淋巴结中均未检出阳性。结论IgH不同区域引物比较,FR3区引物检出率明显高于FR1区和FR2区。FR3区和FR2区引物联合检测可明显提高石蜡组织中B细胞淋巴瘤基因重排的检出率。 展开更多
关键词 免疫球蛋白重链 基因重排 B细胞淋巴瘤 聚合酶链反应 石蜡组织
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猪出生后IgG重链基因多样性的比较 被引量:1
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作者 郭南南 李梦静 欧阳红生 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期716-722,726,共8页
为研究在正常饲养环境下,猪对体外病原体和疫苗的免疫反应,分析了新生仔猪(0 d)、断奶仔猪(35 d)和成年猪(80 d)抗体重链基因(IGH)的多样性。结果表明:不同发育阶段猪抗体谱的分布有明显差异,成年猪抗体重链可变区(IGHV)1-6的使用频率... 为研究在正常饲养环境下,猪对体外病原体和疫苗的免疫反应,分析了新生仔猪(0 d)、断奶仔猪(35 d)和成年猪(80 d)抗体重链基因(IGH)的多样性。结果表明:不同发育阶段猪抗体谱的分布有明显差异,成年猪抗体重链可变区(IGHV)1-6的使用频率急剧下降。在3个发育阶段,猪抗体重链多样性的区域(IGHD)阅读框(RF)主要是RFⅢ,其编码亲水性氨基酸。随着个体发育,RFⅢ的使用频率逐渐减少;同时RFⅡ的使用频率不断增加,其编码疏水性氨基酸。末端脱氧核苷酸转移酶(Tdt)的表达水平增加。成年猪的N1区和N2区核酸长差异显著提高。 展开更多
关键词 猪IgG 抗体谱 重链基因 基因多样性
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猪IgG H链基因CH2-CH3的克隆和分析 被引量:1
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作者 姜法铭 曹海军 +5 位作者 朱志盈 姚惠娟 樊生超 华修国 崔立 缪德年 《上海农业学报》 CSCD 2006年第4期18-21,共4页
根据已发表的猪IgG H链序列,设计了1对通用引物,从猪外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IgG H链基因CH2-CH3序列,并克隆入pMD18-T Simple载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经SalI和XbaI双酶切鉴定,筛选出阳性克隆。核酸序列测定分... 根据已发表的猪IgG H链序列,设计了1对通用引物,从猪外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IgG H链基因CH2-CH3序列,并克隆入pMD18-T Simple载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经SalI和XbaI双酶切鉴定,筛选出阳性克隆。核酸序列测定分析表明,IgG H链基因CH2-CH3序列全长为669 bp,编码CH2-CH3的221个氨基酸和J区的1个脯氨酸。利用DNASTAR软件将其与猪IgG H链各CH2-CH3序列进行比较,发现其与U03778-1、U03779-2a、U03780-2b、U03781-3、U03782-4的核苷酸序列同源率分别为92.1%、98.4%、98.5%、93.0%和97.2%,推导的氨基酸序列同源率分别为86.5%、96.4%、96.5%、87.0%和94.2%。经进化树分析提示,该序列可能为一个新的亚型。 展开更多
关键词 猪IgG H链基因 CH2-CH3 基因克隆 DNA序列分析
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外套细胞淋巴瘤bcl-1/IgH基因重排的检测与序列分析
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作者 孙文佶 林茂芳 +2 位作者 蔡真 Udo Kellner Reza Parwaresch 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2002年第4期239-244,共6页
目的 :寻找一种敏感、特异而又快捷的方法检测外套细胞淋巴瘤中 bcl- 1/ Ig H 基因重排 ,并分析 bcl- 1/Ig H 基因重排产物的序列 ,以了解 bcl- 1/ Ig H 基因重排发生的确切机理。方法 :对 2 8例经临床确诊的外套细胞淋巴瘤的新鲜冰冻组... 目的 :寻找一种敏感、特异而又快捷的方法检测外套细胞淋巴瘤中 bcl- 1/ Ig H 基因重排 ,并分析 bcl- 1/Ig H 基因重排产物的序列 ,以了解 bcl- 1/ Ig H 基因重排发生的确切机理。方法 :对 2 8例经临床确诊的外套细胞淋巴瘤的新鲜冰冻组织 ,通过半巢式 PCR检测 bcl- 1/ Ig H基因重排 ,并对 bcl- 1/ Ig H基因重排产物进行克隆和序列分析。结果 :通过半巢式 PCR测到有 bcl- 1/ Ig H基因重排者计 17/ 2 8例。而采用一步法 PCR仅 9例有此基因重排 ,两者相比 ,差异显著 (χ2 =4 .59,P<0 .0 5)。对 bcl- 1/ Ig H基因重排产物进行序列分析后发现 ,bcl- 1/ Ig H基因重排产物为 74~ 16 2 bp大小 ,融合基因连接区为 6~ 2 4 bp大小。在断裂点集中的 6 5bp范围内 ,找到 10个不同的断裂点 ,其中 5个未见文献报道。对 JH 基因序列的分析 ,发现 bcl- 1/ Ig H 基因重排时 ,JH1,JH3,JH4 ,JH5和 JH6都可能参与重排 ,其中 ,以 JH4多见 ,而 JH2则没有涉及。结论 :该半巢式 PCR方法是检测外套细胞淋巴瘤中 bcl- 1/ Ig H基因重排的一种敏感而特异的方法 ,对外套淋巴细胞淋巴瘤的明确诊断和治疗都有一定的指导意义 ,而对 bcl- 1/Ig H基因重排的序列分析 ,则将为外套细胞淋巴瘤的的发病机理研究提供理论依据。 展开更多
关键词 外套细胞淋巴瘤 bcl-1/IgH基因 淋巴瘤 遗传学 基因重组 免疫球蛋白类 重链 序列分析 半巢式聚合酶链反应
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大肠杆菌表达托佩克猪SLA-1胞外区的研究 被引量:1
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作者 翟晓鑫 张秀娟 +1 位作者 杨杰 高凤山 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期135-139,共5页
为构建托佩克猪SLA-1重链基因原核重组表达载体并研究其在pET-21a(+)中的表达,设计引物,PCR扩增托佩克猪SLA-1基因胞外区(命名为SLA-1-TPKe),并克隆至pMD19-T Simple Vector,经酶切鉴定后将SLA-1-TPKe基因与表达系统pET-21a(+)连接,转化... 为构建托佩克猪SLA-1重链基因原核重组表达载体并研究其在pET-21a(+)中的表达,设计引物,PCR扩增托佩克猪SLA-1基因胞外区(命名为SLA-1-TPKe),并克隆至pMD19-T Simple Vector,经酶切鉴定后将SLA-1-TPKe基因与表达系统pET-21a(+)连接,转化到BL21(Rosseta)菌进行诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白。提取SLA-1-TPKe包涵体,并经SDSPAGE检测。PCR结果显示,SLA-1-TPKe大小为851 bp,成功克隆到pMD19-T Simple Vector,酶切鉴定大小为831 bp,连接到pET-21a(+)并转化到BL21(Rosseta)菌,经诱导表达和SDS-PAGE检测目的蛋白的大小为31 kD。目的蛋白以包涵体形式存在,纯化后蛋白纯度达到90%以上。 展开更多
关键词 托佩克猪 SLA-1 重链基因 表达 包涵体
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IgH基因重排对骨髓瘤患者监测的临床意义 被引量:1
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作者 黄红铭 李勇华 +2 位作者 项喜喜 姜华 侯健 《交通医学》 2007年第6期634-636,共3页
目的:探讨免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在多发性骨髓瘤(MM)患者治疗过程中监测的临床意义。方法:回顾分析41例经治疗后达到非常好的部分缓解(VGPR)或以上疗效的MM患者外周血的PCR的结果,包括自体外周血干细胞移植(ASCT)患者21例和未移... 目的:探讨免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在多发性骨髓瘤(MM)患者治疗过程中监测的临床意义。方法:回顾分析41例经治疗后达到非常好的部分缓解(VGPR)或以上疗效的MM患者外周血的PCR的结果,包括自体外周血干细胞移植(ASCT)患者21例和未移植患者20例。观察患者确诊时的IgH阳性率、达到上述疗效时的转阴率,以及两组患者的复发率和持续缓解时间(DOR)的差异。结果:41例患者IgH克隆性重排阳性35例(85.4%),经化疗后达疗效时IgH转阴率为25.6%。移植组未转阴者复发率为7/12,DOR为22.5个月,转阴者复发率为1/5,DOR为42.5个月。未移植组未转阴者复发率为7/13,DOR为22个月,转阴者复发率为1/5,DOR为21个月。结论:PCR技术检测MM患者IgH基因重排可作为诊断、疗效观察、预后判断及微小残留病灶监测的参考指标之一。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 免疫球蛋白重链 基因重排 微小残留病灶
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氯沙坦对心肌梗死后左心室肌球蛋白重链基因影响 被引量:1
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作者 赵雅红 张燕 许楚宏 《岭南心血管病杂志》 2007年第2期147-149,共3页
目的观察血管紧张素Ⅱ受体阻断药氯沙坦对急性心肌梗死后左心室心肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)基因表达的影响。方法Sprague-Dawley大鼠24只随机分为3组,正常对照组,急性心肌梗死组,氯沙坦急性心肌梗死组,每组8只。急性心肌... 目的观察血管紧张素Ⅱ受体阻断药氯沙坦对急性心肌梗死后左心室心肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)基因表达的影响。方法Sprague-Dawley大鼠24只随机分为3组,正常对照组,急性心肌梗死组,氯沙坦急性心肌梗死组,每组8只。急性心肌梗死造模后第2日开始灌胃给药,口服氯沙坦日剂量3mg/kg,6周后测量左心室重量、进行心肌肌球蛋白重链基因分析。结果急性心肌梗死组大鼠心脏重量指数明显增加,氯沙坦治疗后心脏重量指数明显下降(P<0.01);Northern plot发现,急性心肌梗死组大鼠心肌细胞的α-MHC mRNA表达量明显下降,而β-MHC mRNA的表达量则显著上升;而氯沙坦治疗组大鼠心肌的α-MHC mRNA表达较急性心肌梗死组增加,α-MHC mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论氯沙坦能减轻梗死心肌肥厚,改善梗死心肌心室重构,机制与其调节心肌MHC的基因表达有关。 展开更多
关键词 氯沙坦 肌球蛋白重链 心肌梗死 心室重构 基因 大鼠
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