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题名Prestin蛋白的稳定高表达卵巢细胞株的建立
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作者
于利
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机构
辽宁医学院生理教研室
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出处
《天津医药》
CAS
北大核心
2011年第7期625-627,共3页
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基金
辽宁省教育厅科学技术研究项目基金资助项目(项目编号:L2010267)
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文摘
目的：建立体外稳定高表达耳蜗外毛细胞马达蛋白（prestin）的多克隆中国仓鼠卵巢细胞株（CHO）。方法：采用prestin质粒转染CHO细胞进行表达,高浓度博来霉素400800mg/L筛选出多克隆细胞株,传代培养,同时长时间维持低浓度抗生素（200400mg/L）。收集所筛选的多克隆细胞株,提取总RNA,采用针对prestin蛋白不同片段设计的3对引物,进行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）,对扩增产物进行凝胶电泳分析。采用免疫荧光染色方法鉴定所筛选多克隆细胞株的prestin蛋白表达。结果：采用3对不同的prestin引物的RT-PCR结果均为阳性,而对照组则为阴性;利用prestin蛋白的特异性抗体,对所筛选的多克隆细胞株进行免疫荧光染色鉴定结果显示阳性率〉90%。结论：成功获得稳定高表达prestin蛋白的多克隆CHO细胞株,转染表达率高。
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关键词
CHO细胞
分子马达蛋白质类
耳蜗
毛细胞
听觉
外
质粒
转染
逆转录聚合酶链反应
荧光
免疫测定
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Keywords
CHO cells molecular motor proteins cochlea hair cells； auditory； outer plasmids transfection reverse transcriptase polymerase chain reaction fluoroimmunoassay
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分类号
R739.630.2
[医药卫生—肿瘤]
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