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环介导等温扩增联合横向侧流试纸(LAMP-LFD)对嗜水气单胞菌快速检测方法的建立
被引量：
9
1
作者
蔡怡
周前进
陈炯
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期256-264,共9页
以嗜水气单胞菌促旋酶B亚单位(gyrase subunit B,gyrB)基因为检测靶标,设计6条特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记探针,建立了嗜水气单胞菌的LAMP-LFD快速检测方法。该方法的流程可简单概括为将生物...
以嗜水气单胞菌促旋酶B亚单位(gyrase subunit B,gyrB)基因为检测靶标,设计6条特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记探针,建立了嗜水气单胞菌的LAMP-LFD快速检测方法。该方法的流程可简单概括为将生物素标记的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)产物与FITC标记的探针进行特异性杂交,并使用横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成检测。经优化,LAMP最佳反应条件为63℃,反应30min,从LAMP扩增到LFD结果判读仅需40min,比常规PCR检测缩短近2h。试验结果表明,LAMP-LFD可特异性检出嗜水气单胞菌,对鳗弧菌等常见水产或食源性病原菌检测结果为阴性;其针对细菌纯培养物的检测灵敏度达2.03×101 CFU/mL或0.81CFU/反应,是常规PCR(以F3/B3为引物)的100倍;可从人工污染1×102 CFU/mL浓度的嗜水气单胞菌的鲫鱼肝组织匀浆样品中检测到细菌。嗜水气单胞菌(106 CFU)人工感染鲫鱼24h,传统的细菌分离培养方法可获得肝、肾的载菌量分别为1.2×105 CFU/g和6×103 CFU/g;利用LAMP-LFD技术可成功从鲫鱼的肝、肾组织中检测出该病原;以F3/B3为引物的PCR方法仅能从感染鲫鱼的肝组织中检测到该病原菌,表明面对实际感染样品,LAMP-LFD的检测灵敏度优于PCR方法。因此,该方法可快速、灵敏、特异地检测出嗜水气单胞菌,而且操作简单,仪器设备依赖性低,有望成为嗜水气单胞菌现场检测的常规技术手段。
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关键词
嗜水气单胞菌
环介导等温扩增
横向侧流试纸
促旋酶
b
亚单位基因
检测
原文传递
基于gyrB基因的伯克霍尔德菌属核酸测序鉴定与系统进化分析
被引量：
6
2
作者
冯震
杨燕
+4 位作者
张宁
蒋波
李芳
秦峰
杨美成
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第11期1940-1944,共5页
目的:建立伯克霍尔德菌属典型菌株DNA促旋酶亚基B(gyrB)基因序列鉴定方法,为该菌属污染物的鉴定和分类提供研究思路和方法依据。方法:选择伯克霍尔德菌属内的典型菌株,以gyrB基因为研究靶点,设计引物,特异性扩增gyrB基因片段,测定核酸序...
目的:建立伯克霍尔德菌属典型菌株DNA促旋酶亚基B(gyrB)基因序列鉴定方法,为该菌属污染物的鉴定和分类提供研究思路和方法依据。方法:选择伯克霍尔德菌属内的典型菌株,以gyrB基因为研究靶点,设计引物,特异性扩增gyrB基因片段,测定核酸序列,并进行聚类比对分析。结果:伯克霍尔德菌属内的典型菌株鉴定的gyrB基因特征序列可满足"种"水平的鉴定。结论:本文建立了基于gyrB基因的伯克霍尔德菌属核酸测序鉴定方法,菌株鉴定的gyrB基因特征序列可满足"种"水平的鉴定,为该菌属污染物的鉴定与风险排查提供方法依据。
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关键词
伯克霍尔德菌
菌种鉴定
DNA促旋酶亚基
b
(gyr
b
)基因
DNA特征序列
系统发育分析
原文传递
题名
环介导等温扩增联合横向侧流试纸(LAMP-LFD)对嗜水气单胞菌快速检测方法的建立
被引量：
9
1
作者
蔡怡
周前进
陈炯
机构
宁波大学
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期256-264,共9页
基金
国家高技术研究发展计划资助项目(863计划)(2012AA092001)
浙江省重大科技专项重点社会发展资助项目(2013C03045-1)
+2 种基金
宁波大学学科资助项目(XKL14D2083
xkzsc1417)
宁波大学2015年度研究生科研创新基金资助项目
文摘
以嗜水气单胞菌促旋酶B亚单位(gyrase subunit B,gyrB)基因为检测靶标,设计6条特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记探针,建立了嗜水气单胞菌的LAMP-LFD快速检测方法。该方法的流程可简单概括为将生物素标记的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)产物与FITC标记的探针进行特异性杂交,并使用横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成检测。经优化,LAMP最佳反应条件为63℃,反应30min,从LAMP扩增到LFD结果判读仅需40min,比常规PCR检测缩短近2h。试验结果表明,LAMP-LFD可特异性检出嗜水气单胞菌,对鳗弧菌等常见水产或食源性病原菌检测结果为阴性;其针对细菌纯培养物的检测灵敏度达2.03×101 CFU/mL或0.81CFU/反应,是常规PCR(以F3/B3为引物)的100倍;可从人工污染1×102 CFU/mL浓度的嗜水气单胞菌的鲫鱼肝组织匀浆样品中检测到细菌。嗜水气单胞菌(106 CFU)人工感染鲫鱼24h,传统的细菌分离培养方法可获得肝、肾的载菌量分别为1.2×105 CFU/g和6×103 CFU/g;利用LAMP-LFD技术可成功从鲫鱼的肝、肾组织中检测出该病原;以F3/B3为引物的PCR方法仅能从感染鲫鱼的肝组织中检测到该病原菌,表明面对实际感染样品,LAMP-LFD的检测灵敏度优于PCR方法。因此,该方法可快速、灵敏、特异地检测出嗜水气单胞菌,而且操作简单,仪器设备依赖性低,有望成为嗜水气单胞菌现场检测的常规技术手段。
关键词
嗜水气单胞菌
环介导等温扩增
横向侧流试纸
促旋酶
b
亚单位基因
检测
Keywords
Aerom
onas
hydrophila
loop-mediated
isothermal
amplification
lateral
flow
dipstick
gyrase
subunit
b
gene
detection
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
基于gyrB基因的伯克霍尔德菌属核酸测序鉴定与系统进化分析
被引量：
6
2
作者
冯震
杨燕
张宁
蒋波
李芳
秦峰
杨美成
机构
上海市食品药品检验所国家药品监督管理局药品微生物检测技术重点实验室
出处
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第11期1940-1944,共5页
基金
国家重点研发计划资助项目(编号2018YFC1603900)
文摘
目的:建立伯克霍尔德菌属典型菌株DNA促旋酶亚基B(gyrB)基因序列鉴定方法,为该菌属污染物的鉴定和分类提供研究思路和方法依据。方法:选择伯克霍尔德菌属内的典型菌株,以gyrB基因为研究靶点,设计引物,特异性扩增gyrB基因片段,测定核酸序列,并进行聚类比对分析。结果:伯克霍尔德菌属内的典型菌株鉴定的gyrB基因特征序列可满足"种"水平的鉴定。结论:本文建立了基于gyrB基因的伯克霍尔德菌属核酸测序鉴定方法,菌株鉴定的gyrB基因特征序列可满足"种"水平的鉴定,为该菌属污染物的鉴定与风险排查提供方法依据。
关键词
伯克霍尔德菌
菌种鉴定
DNA促旋酶亚基
b
(gyr
b
)基因
DNA特征序列
系统发育分析
Keywords
b
urkholderia
b
acterial
identification
DNA
gyrase
subunit
b
(gyr
b
)
gene
DNA
signature
sequence
phylo
gene
tic
analysis
分类号
R917 [医药卫生—药物分析学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
环介导等温扩增联合横向侧流试纸(LAMP-LFD)对嗜水气单胞菌快速检测方法的建立
蔡怡
周前进
陈炯
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
9
原文传递
2
基于gyrB基因的伯克霍尔德菌属核酸测序鉴定与系统进化分析
冯震
杨燕
张宁
蒋波
李芳
秦峰
杨美成
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
6
原文传递
已选择
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