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大鼠膜联蛋白5的重组表达及其对人精子体外运动功能的影响
被引量：
5
1
作者
陶晓倩
柳海燕
+3 位作者
时姗姗
韩雪峰
林钗英
姚兵
《中华男科学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期400-404,共5页
目的:先前研究发现促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白5(annex-in5)的翻译和转录水平都有一定的影响,推测annexin5可能是睾酮分泌调节中的一个信号分子。为研究annexin5在雄性生殖调节中的作用,本研究拟获得...
目的:先前研究发现促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白5(annex-in5)的翻译和转录水平都有一定的影响,推测annexin5可能是睾酮分泌调节中的一个信号分子。为研究annexin5在雄性生殖调节中的作用,本研究拟获得具有活性的大鼠annexin5重组蛋白,并观察其对人精子运动功能的影响。方法:化学合成法合成大鼠annexin5的编码基因序列,将该基因插入组氨酸标签(HIS)融合表达载体pET28a中,在T7启动子控制下,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达HIS融合蛋白;以亲和层析法纯化表达融合蛋白并用活化部分凝血激酶时间(APTT)交叉试验法验证该蛋白的抗凝血活性。15例供精者的精液标本一式2份,1份加重组蛋白annexin5(终浓度为10-8mol/L),1份做对照,分别处理20和60min,用计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精子活力、活动率;处理20min后,做精子爬高试验。结果:合成的目的基因产物长度为974bp,插入序列与annexin5的序列完全一致。在IPTG诱导下,BL21(DE3)重组菌高效表达出相对分子质量为36000的融合蛋白,经纯化获得95%纯度的融合蛋白,纯化蛋白具有很强的抗凝血活性。Annexin5处理20min后精子活动率提高了21%(P<0.05),活力提高了40%(P<0.01),而处理60min后精子活力、活动率与对照组比较均无显著性差异;精子爬高高度与对照组比较具有极显著差异[(37.84±6.35)mmvs(49.5±12.27)mm,P<0.01]。结论:成功构建了大鼠annexin5重组表达载体并在大肠埃希菌中高效表达annexin5蛋白,且该蛋白体外处理精子20min时提高精子的运动能力。
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关键词
膜联蛋白5
精子
表达
活力
活动率
爬高试验
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题名
大鼠膜联蛋白5的重组表达及其对人精子体外运动功能的影响
被引量：
5
1
作者
陶晓倩
柳海燕
时姗姗
韩雪峰
林钗英
姚兵
机构
南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所
出处
《中华男科学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期400-404,共5页
基金
国家自然科学基金(30770801)~~
文摘
目的:先前研究发现促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白5(annex-in5)的翻译和转录水平都有一定的影响,推测annexin5可能是睾酮分泌调节中的一个信号分子。为研究annexin5在雄性生殖调节中的作用,本研究拟获得具有活性的大鼠annexin5重组蛋白,并观察其对人精子运动功能的影响。方法:化学合成法合成大鼠annexin5的编码基因序列,将该基因插入组氨酸标签(HIS)融合表达载体pET28a中,在T7启动子控制下,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达HIS融合蛋白;以亲和层析法纯化表达融合蛋白并用活化部分凝血激酶时间(APTT)交叉试验法验证该蛋白的抗凝血活性。15例供精者的精液标本一式2份,1份加重组蛋白annexin5(终浓度为10-8mol/L),1份做对照,分别处理20和60min,用计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精子活力、活动率;处理20min后,做精子爬高试验。结果:合成的目的基因产物长度为974bp,插入序列与annexin5的序列完全一致。在IPTG诱导下,BL21(DE3)重组菌高效表达出相对分子质量为36000的融合蛋白,经纯化获得95%纯度的融合蛋白,纯化蛋白具有很强的抗凝血活性。Annexin5处理20min后精子活动率提高了21%(P<0.05),活力提高了40%(P<0.01),而处理60min后精子活力、活动率与对照组比较均无显著性差异;精子爬高高度与对照组比较具有极显著差异[(37.84±6.35)mmvs(49.5±12.27)mm,P<0.01]。结论:成功构建了大鼠annexin5重组表达载体并在大肠埃希菌中高效表达annexin5蛋白,且该蛋白体外处理精子20min时提高精子的运动能力。
关键词
膜联蛋白5
精子
表达
活力
活动率
爬高试验
Keywords
annexin
5
sperm
expression
motility
grade
a＋
b
sperm
sperm
ascending
experiment
分类号
R321.1 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大鼠膜联蛋白5的重组表达及其对人精子体外运动功能的影响
陶晓倩
柳海燕
时姗姗
韩雪峰
林钗英
姚兵
《中华男科学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
5
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