补阳还五汤的抗氧化作用 被引量：20

1

作者 邢三丽 李振华 +2 位作者 孙晋浩 刘岳鹏 暴丽华 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期529-531,F0002,共4页

目的:探讨复方中药制剂补阳还五汤的抗氧化机制。方法:用水煎醇沉法制备补阳还五汤提取液,从新生鼠坐骨神经分离纯化雪旺细胞,建立过氧化氢(H2O2)损伤模型。将培养细胞分为补阳还五汤处理组、氧化损伤组及正常组和空白对照组,培养12 h时... 目的:探讨复方中药制剂补阳还五汤的抗氧化机制。方法:用水煎醇沉法制备补阳还五汤提取液,从新生鼠坐骨神经分离纯化雪旺细胞,建立过氧化氢(H2O2)损伤模型。将培养细胞分为补阳还五汤处理组、氧化损伤组及正常组和空白对照组,培养12 h时,检测丙二醛(MDA)的含量,用免疫组化方法检测Caspase-3的表达,用RT-PCR技术检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的表达。结果:与氧化损伤组相比,补阳还五汤处理组的MDA含量明显减弱,Caspase-3呈弱阳性表达,GDNF mRNA的表达量减少不明显。结论:补阳还五汤具有良好的抗过氧化损伤效果,对H2O2引起雪旺细胞的损伤具有保护作用。 展开更多

关键词 补阳还五汤 雪旺细胞 氧化损伤 丙二醛 Caspase-3胶质细胞源性神经营养因子

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GDNF、GFAP和NGFRp75在成年大鼠和金黄地鼠嗅球成鞘细胞的免疫组织化学研究 被引量：2

2

作者 杨磊 周长满 +1 位作者 买鸿宴 于恩华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期366-369,共4页

目的　研究GDNF在成年大鼠和金黄地鼠嗅球成鞘细胞的表达 ,探索成鞘细胞在中枢神经再生中的作用。　方法　用免疫组织化学ABC法 ,显示GDNF在成年大鼠和金黄地鼠嗅球成鞘细胞的表达和分布 ,同时用NGFRp75和GFAP染色作为阳性对照。　结果... 目的　研究GDNF在成年大鼠和金黄地鼠嗅球成鞘细胞的表达 ,探索成鞘细胞在中枢神经再生中的作用。　方法　用免疫组织化学ABC法 ,显示GDNF在成年大鼠和金黄地鼠嗅球成鞘细胞的表达和分布 ,同时用NGFRp75和GFAP染色作为阳性对照。　结果　在成年大鼠和金黄地鼠嗅球的纤维层和小球层内均可见深棕色的GDNF免疫组织化学反应的成鞘细胞。在小球层与纤维层分界处和小球层与分子层分界处及嗅小球之间密集分布 ,在嗅小球之内较稀疏。同时在同一嗅球组织的另两组切片的相同部位 ,分别出现GFAP和NGFRp75免疫反应性细胞 ,间接说明GDNF免疫反应的结构是嗅球成鞘细胞。 展开更多

关键词 嗅神经成鞘细胞 胶质细胞源性神经营养因子 免疫组织化学

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高压氧治疗创伤性脑损伤的效用及机制研究 被引量：18

3

作者 张祥根 姜正林 +4 位作者 王国华 李永财 王勇 李霞 沈洪妹 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期42-46,99,共6页

目的:研究高压氧(HBO)对大鼠创伤性脑损伤(TBI)治疗效用并观察脑组织星形胶质细胞活化及胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和神经生长因子(NGF)表达的变化以探讨作用机制。方法:SD雄性大鼠54只,随机分为3组(n=18):假手术组、TBI组和HBO治... 目的:研究高压氧(HBO)对大鼠创伤性脑损伤(TBI)治疗效用并观察脑组织星形胶质细胞活化及胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和神经生长因子(NGF)表达的变化以探讨作用机制。方法:SD雄性大鼠54只,随机分为3组(n=18):假手术组、TBI组和HBO治疗组。采用Feeney法建立大鼠TBI模型,假手术组只开放骨窗,不予打击。HBO治疗组大鼠于脑损伤后6 h采用动物高压舱,以3ATA压力纯氧治疗60 min。TBI后48 h测量神经功能,然后分离脑组织,其中18只用干湿法测定脑含水量;18只脑组织用于切片,部分进行尼氏染色后作形态学观察,部分进行免疫组织化学染色,检测星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、波形蛋白(vimentin)与S100蛋白的表达;另18只大鼠取伤侧脑半球,进行Western blot分析,观察GDNF和NGF的表达。结果:HBO治疗能减轻神经功能障碍,降低脑含水量,减少海马部位神经细胞丢失,进一步激活损伤侧皮质与海马部位GFAP、vimentin与S-100阳性表达星形胶质细胞,促进损伤侧脑组织GDNF与NGF的表达。结论:HBO对创伤性脑损伤有较好治疗效果,其机制与上调GDNF和NGF的表达有关。 展开更多

关键词 高压氧 创伤性脑损伤 星形胶质细胞 胶质细胞源性神经营养因子 神经生长因子

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黄连素对Aβ诱导的大鼠抑郁行为的缓解作用及其相关机制 被引量：9

4

作者 牛玉虎 郭国英 +2 位作者 弓韬 张栋 王惠珍 《山西医科大学学报》 CAS 2017年第6期519-525,共7页

目的探讨黄连素侧脑室注射对β淀粉样蛋白引起大鼠的抑郁焦虑行为的缓解作用及其可能机制。方法 60只大鼠随机分为对照组、Aβ组、低剂量黄连素治疗组、高剂量黄连素治疗组和氟西汀阳性对照组,每组12只,行为学试验检测各组大鼠抑郁焦虑... 目的探讨黄连素侧脑室注射对β淀粉样蛋白引起大鼠的抑郁焦虑行为的缓解作用及其可能机制。方法 60只大鼠随机分为对照组、Aβ组、低剂量黄连素治疗组、高剂量黄连素治疗组和氟西汀阳性对照组,每组12只,行为学试验检测各组大鼠抑郁焦虑行为,ELISA测定血浆皮质醇和促肾上腺皮质素含量。体外培养的原代星形胶质细胞分为对照组、Aβ组、低剂量黄连素组、高剂量黄连素组和氟西汀阳性对照组,检测各组细胞上清液脑源性神经营养因子,神经生长因子及胶质源性神经营养因子的含量。结果悬尾实验与强制游泳实验显示,Aβ组比对照组大鼠的活动时间显著减少(P<0.001),高剂量黄连素治疗组比Aβ组活动时间显著延长(P<0.05),低剂量组与Aβ组差异并无统计学意义。应激状况下Aβ组血浆皮质醇与促肾上腺皮质激素相较于对照组明显升高(P<0.01),而正常情况下两种激素在各组差异无统计学意义。与Aβ组相比,黄连素治疗组两种激素水平下降(P<0.01)。细胞上清液检测显示,与对照组相比,Aβ组的脑源性神经营养因子、神经生长因子及胶质源性神经营养因子的分泌水平明显减低(P<0.001),与Aβ组相比,高剂量黄连素治疗组中三种神经营养因子分泌水平均显著增加(P<0.05)。结论黄连素能够显著缓解β淀粉样蛋白引起的抑郁焦虑情绪,这种缓解作用可能与其对应激性激素的调节以及对胶质细胞神经营养因子分泌的促进作用有关。 展开更多

关键词 黄连素 β淀粉样蛋白 抑郁焦虑行为 脑源性神经营养因子 神经生长因子 胶质源性神经营养因子 阿尔兹海默病

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Necrostatin-1对大鼠脑缺血再灌注损伤后小胶质细胞和炎症因子的影响 被引量：6

5

作者 支中文 杨龙 +3 位作者 杜波 周延龙 耿德勤 程言博 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期757-763,共7页

目的探讨干预程序性坏死途径对大鼠脑缺血再灌注损伤后小胶质细胞活化及相关炎症因子的影响及意义。方法采用改良线栓法构建大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型。（1）SD大鼠按随机数字表法分为脑缺血再灌注6h组、脑缺血再灌注12h组、脑... 目的探讨干预程序性坏死途径对大鼠脑缺血再灌注损伤后小胶质细胞活化及相关炎症因子的影响及意义。方法采用改良线栓法构建大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型。（1）SD大鼠按随机数字表法分为脑缺血再灌注6h组、脑缺血再灌注12h组、脑缺血再灌注24h组、脑缺血再灌注72h组，每组6只。免疫组化染色检测不同时间点小胶质细胞激活标志离子型钙接头蛋白-1（iba-1）的表达，根据实验结果选取iba-1表达相对明显的时间点。（2）SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脑缺血再灌注组、Necrostatin-1（Nec-1）（80nm01）干预组、Nec-1（160nmol）干预组．每组6只，并于脑缺血后2h给予Nec-1干预。采用Longa法进行神经功能损伤评分、TTC法检测梗死体积，根据实验结果选取Nec-1干预的适宜给药剂量。（3）SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脑缺血再灌注组、溶剂组、Nec-1干预组，每组6只，并于脑缺血后2h给予Nec．1或DMS0溶剂干预。HE染色观察梗死周围组织神经元存活情况，免疫组化染色检测梗死周围组织iba-l的表达．免疫组化染色及Westernblotting分别检测炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、胶质源性神经营养因子（GDNF）免疫阳性细胞及蛋白的表达。结果（1）iba-1表达在脑缺血再灌注24h后升高明显，与其他各时间点比较差异有统计学意义（（P〈0．05）。（2）与脑缺血再灌注组相比，两Nec．1干预组神经功能损伤评分明显降低、梗死体积明显减小，差异均有统计学意义（P〈0．05）；与Nec-1（80nmoll干预组相比，Nec-1（160nmol）干预组神经功能损伤及梗死体积的改善效果更为明显，差异均有统计学意义（氏0．05）。（3）HE染色显示脑缺血再灌注组梗死周围组织炎症细胞浸润、神经元减少、胞体皱缩、细胞核固缩；与脑缺血再灌注组相比， 展开更多

关键词 程序性坏死 Necrostatin-1 脑缺血再灌注损伤 小胶质细胞 肿瘤坏死因子-α 白介素-1Β 胶质源性神经营养因子

原文传递

胶质细胞源性神经营养因子诱导骨髓基质细胞向多巴胺能神经元分化的观察 被引量：3

6

作者 束汉生 朱成 +4 位作者 郭之通 张弋 王淮 王昊 闫秀琴 《中国临床神经外科杂志》 2007年第9期548-551,共4页

目的探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在体外能否诱导骨髓基质细胞(BMSCs)向多巴胺(DA)能神经元分化及可能机制。方法无菌条件下,抽取成年SD大鼠胫骨内骨髓组织,分离制备成单细胞悬液进行培养。将增殖传代至第5代的BMSCs随机分为GDN... 目的探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在体外能否诱导骨髓基质细胞(BMSCs)向多巴胺(DA)能神经元分化及可能机制。方法无菌条件下,抽取成年SD大鼠胫骨内骨髓组织,分离制备成单细胞悬液进行培养。将增殖传代至第5代的BMSCs随机分为GDNF诱导组和对照组。继续培养7 d后,应用BrdU/GFAP、BrdU/NeuN和TH免疫荧光单标和双标技术检测BMSCs增殖和分化情况。结果两组BMSCs继续培养7 d后,增殖仍然活跃,有部分细胞向神经元和胶质样细胞分化,呈BrdU/GFAP、BrdU/NeuN和TH阳性表达,但GDNF组的增殖力更强,向神经元和TH神经元分化的数量明显多于对照组(P<0.05)。结论GDNF能促进BMSCs的增殖和诱导BMSCs分化成神经元和胶质样细胞,其中少部分可分化为TH神经元(即DA能神经元)。 展开更多

关键词 骨髓基质细胞 胶质细胞源性神经营养因子 细胞培养 分化 神经元 大鼠

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嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠脊髓损伤的治疗作用 被引量：5

7

作者 曹莉 叶俊丽 +5 位作者 刘丽 陈菲 陈哲宇 李建红 路长林 何成 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期593-597,F004,共6页

目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法 :建立成年 SD大鼠脊髓 T8半横断损伤模型 ,将体外培养纯化的 OECs植入脊髓损伤处 ,同时局部应用 GDNF。采用斜板试验和 ... 目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法 :建立成年 SD大鼠脊髓 T8半横断损伤模型 ,将体外培养纯化的 OECs植入脊髓损伤处 ,同时局部应用 GDNF。采用斜板试验和 BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况 ,并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价 OECs和 GDNF对神经元存活和纤维再生的影响。结果 :(1) OECs和 GDNF联合应用时对皮质和红核神经元有逆行性保护作用 ,可促进脊髓下行传导束再生 ,肢体运动功能恢复。 (2 ) OECs和 GDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强 ,高于 GDNF或 OECs单用组。结论 :联合应用 GDNF和 OECs在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。 展开更多

关键词 嗅鞘细胞移植 GDNF 大鼠 脊髓损伤 治疗作用 胶质细胞源性神经营养因子 红核脊髓束 皮质脊髓束

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GDNF重组腺病毒的构建及促进多巴胺能神经元存活的研究 被引量：6

8

作者 徐国恒 凌雁 +2 位作者 万有 王晓民 韩济生 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期42-47,共6页

利用体内同源重组原理，构建了能介导ＧＤＮＦ基因转移和表达的复制缺陷型重组腺病毒ＡｄＣＭＶｇｄｎｆ，其中ＧＤＮＦｃＤＮＡ插入腺病毒基因组的Ｅ１区并由ＣＭＶ启动子控制在人２９３细胞内通过同源重组包装生成重组腺病毒后，用形... 利用体内同源重组原理，构建了能介导ＧＤＮＦ基因转移和表达的复制缺陷型重组腺病毒ＡｄＣＭＶｇｄｎｆ，其中ＧＤＮＦｃＤＮＡ插入腺病毒基因组的Ｅ１区并由ＣＭＶ启动子控制在人２９３细胞内通过同源重组包装生成重组腺病毒后，用形态学方法、病毒ＤＮＡ酶切分析、ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法进行鉴定正确．经测定病毒滴度达到１０１０ｐｆｕ／ｍｌ．用免疫沉淀方法从重组腺病毒感染的２９３细胞及其培养基上清中均检测到大量ＧＤＮＦ蛋白．用重组腺病毒直接感染或者用其条件培养基处理，分别使胚胎大鼠中脑原代多巴胺能神经元的数目增加８８．２％和９６．４％，明显增加多巴胺能神经元存活。 展开更多

关键词 GDNF 重组腺病毒 基因治疗 帕金森氏病

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GDNF重组腺病毒增加MN9D细胞多巴胺合成与释放 被引量：3

9

作者 凌雁 徐国恒 +2 位作者 万有 王晓民 韩济生 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期128-131,共4页

有表达ＧＤＮＦ的重组腺病毒直接感染中脑多巴胺能神经元来源的ＭＮ９Ｄ细胞并经神经毒素ＭＰＰ＋处理．感染３６ｈ分别收获细胞及其培养基，用反相高效液相色谱方法测定多巴胺含量．结果显示，经ＧＤＮＦ重组腺病毒感染的ＭＮ９Ｄ细胞... 有表达ＧＤＮＦ的重组腺病毒直接感染中脑多巴胺能神经元来源的ＭＮ９Ｄ细胞并经神经毒素ＭＰＰ＋处理．感染３６ｈ分别收获细胞及其培养基，用反相高效液相色谱方法测定多巴胺含量．结果显示，经ＧＤＮＦ重组腺病毒感染的ＭＮ９Ｄ细胞内及其培养基中的多巴胺水平分别增加５０．７％和５３．５％．给予神经毒素ＭＰＰ＋损伤后，细胞内多巴胺含量降低５３．５％，但同时给予ＧＤＮＦ腺病毒则可抑制这种降低，并使多巴胺水平增加１４１．３％．以上结果提示ＧＤＮＦ腺病毒可提高细胞内的多巴胺水平并促进其释放，同时还具有对抗神经毒素ＭＰＰ＋损伤作用，表明ＧＤＮＦ重组腺病毒用于帕金森氏病基因治疗具有良好的前景． 展开更多

关键词 GONF 重组腺病毒 多巴胺 帕金森氏病 基因治疗

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超顺磁氧化铁、绿色荧光蛋白双标胶质细胞源性神经营养因子基因修饰中脑神经前体细胞的建立 被引量：2

10

作者 刘如恩 邓兴力 +5 位作者 郭京 冯忠堂 王武 雷德强 李红艳 陈志华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期964-966,1089,共4页

目的建立超顺磁氧化铁（SPIO）、绿色荧光蛋白（EGFP）双标胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰中脑神经干细胞。方法以质粒pEGFPN1-GDNF转染大鼠胚胎中脑神经干细胞，SPIO标记细胞。荧光显微镜、免疫细胞化学和Western blot鉴定E... 目的建立超顺磁氧化铁（SPIO）、绿色荧光蛋白（EGFP）双标胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰中脑神经干细胞。方法以质粒pEGFPN1-GDNF转染大鼠胚胎中脑神经干细胞，SPIO标记细胞。荧光显微镜、免疫细胞化学和Western blot鉴定EGFP、GDNF表达；普鲁土蓝染色、透射电镜鉴定SPIO标记率；诱导分化后免疫细胞化学鉴定其分化能力。结果基因转染12h后EGFP开始表达；免疫细胞化学、Western blot表明GDNF能正确表达；普鲁土蓝染色示SPIO标记率达100％，透射电镜示SPIO颗粒位于吞饮小泡和胞质内；体外诱导分化研究表明SPIO、EGFP双标记不影响其分化。结论成功建立SPIO、EGFP双标GDNF基因修饰中脑神经干细胞。 展开更多

关键词 超顺磁氧化铁 增强型绿色荧光蛋白基因 胶质细胞源性神经营养因子 中脑神经干细胞

原文传递

重组胶质细胞源性神经营养因子腺病毒保护培养的原代脊髓运动神经元 被引量：2

11

作者 尚铁燕 万有 +1 位作者 姚磊 韩济生 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期15-19,共5页

目的 :观察胶质细胞源性神经营养因子 (gliacellline derivedneurotrophicfactor ,GDNF)重组腺病毒 (Ad CMVgdnf)对培养的原代脊髓运动神经元的保护作用。 方法 :原代培养的脊髓运动神经元转染不同滴度Ad CMVgdnf不同时间后计数 ,并计... 目的 :观察胶质细胞源性神经营养因子 (gliacellline derivedneurotrophicfactor ,GDNF)重组腺病毒 (Ad CMVgdnf)对培养的原代脊髓运动神经元的保护作用。 方法 :原代培养的脊髓运动神经元转染不同滴度Ad CMVgdnf不同时间后计数 ,并计算凋亡的运动神经元的百分率。 结果 :1 0 4 ～ 1 0 7pfu·ml 1 (pfu ,plaqueformunit)AdCMVgdnf的保护作用中 ,以 1 0 7pfu·ml 1 作用最显著 ,腺病毒的滴度过大或过小 ,保护作用都减弱 ;观察 1～ 9d不同转染时间的效果时 ,在第 3～ 9天均可观察到保护作用 ,以第 9天最明显 ,存活的运动神经元数比对照组增多2 80 % ,同时凋亡神经元的百分比较对照组减少 1 2 .9%。结论 :在一定的时间 (9天 )和合适的腺病毒滴度 (1 0 7pfu·ml 1 )条件下 ,腺病毒介导的GDNF对体外培养的脊髓运动神经元起到了保护作用。 展开更多

关键词 脊髓损伤 脊髓运动神经元 腺病毒 重组胶质细胞源性神经营养因子 培养 基因治疗

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GDNF基因修饰大鼠胚胎中脑神经干细胞的建立 被引量：1

12

作者 邓兴力 刘如恩 +5 位作者 郭京 冯忠堂 王武 雷德强 李红艳 陈志华 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期260-264,共5页

目的建立脑源性神经营养因子(GDNF)基因修饰大鼠胚胎中脑神经干细胞。方法以RT-PCR扩增GDNF基因编码序列,将其克隆至质粒pEGFPN1构建重组质粒pEGFPN1-GDNF,经酶切鉴定及序列分析后,以FuGENE HD转染试剂介导转染大鼠胚胎中脑神经干细胞... 目的建立脑源性神经营养因子(GDNF)基因修饰大鼠胚胎中脑神经干细胞。方法以RT-PCR扩增GDNF基因编码序列,将其克隆至质粒pEGFPN1构建重组质粒pEGFPN1-GDNF,经酶切鉴定及序列分析后,以FuGENE HD转染试剂介导转染大鼠胚胎中脑神经干细胞。免疫细胞化学、western blot鉴定GDNF的表达,诱导分化后免疫细胞化学鉴定其分化能力。结果RT-PCR产物为650bp的特异片段,重组质粒pEGFPN1-GDNF经酶切产生650bp和4.7kb的片段,序列分析结果与文献报道一致。免疫细胞化学、western blot表明GDNF基因修饰细胞能正确表达GDNF且基因修饰不影响其增殖与分化。结论建立GDNF基因修饰大鼠胚胎中脑神经干细胞,为进一步应用其开展帕金森病的细胞移植治疗研究奠定基础。 展开更多

关键词 脑源性神经营养因子基因 重组质粒 中脑神经干细胞 基因转染

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胶质细胞源性神经营养因子体外对脊髓运动神经元的作用 被引量：1

13

作者 宋学琴 吴淑玉 +2 位作者 李春岩 王丽琴 王晓娟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期490-492,共3页

目的 :观察不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF) ,对大鼠胚胎脊髓运动神经元生长活性的作用。方法 :取大鼠胚胎脊髓腹侧组织体外分离 ,进行原代细胞培养 ,应用抗神经微丝单克隆抗体 (mAb)SMI32进行运动神经元的免疫细胞化学染色 ... 目的 :观察不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF) ,对大鼠胚胎脊髓运动神经元生长活性的作用。方法 :取大鼠胚胎脊髓腹侧组织体外分离 ,进行原代细胞培养 ,应用抗神经微丝单克隆抗体 (mAb)SMI32进行运动神经元的免疫细胞化学染色 ,从细胞形态学及应用MTT比色法 ,研究GDNF对大鼠脊髓运动神经元的影响。结果 :GDNF能明显促进体外培养的大鼠脊髓运动神经元存活及突起的生长 (P <0 .0 5 ) ,且具有剂量依赖的趋势。结论 :不同浓度的GDNF对体外培养的大鼠胚胎脊髓运动神经元 。 展开更多

关键词 胶质细胞源性神经营养因子 脊髓运动神经元 体外培养 抗神经微丝单克隆抗体

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pEGFPN1-GDNF真核表达载体的构建及其表达

14

作者 邓兴力 刘如恩 +5 位作者 杨智勇 冯忠堂 郭京 雷德强 李红艳 陈志华 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2008年第8期628-631,共4页

目的构建人胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因真核表达载体并观察其在COS-7细胞内的表达。方法应用RT—PCR从U251细胞总RNA中扩增GDNF cDNA，将其克隆至真核表达载体pEGFPN1，经酶切鉴定及序列分析后，以FugeneHD介导转染COS-7细胞... 目的构建人胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因真核表达载体并观察其在COS-7细胞内的表达。方法应用RT—PCR从U251细胞总RNA中扩增GDNF cDNA，将其克隆至真核表达载体pEGFPN1，经酶切鉴定及序列分析后，以FugeneHD介导转染COS-7细胞，应用免疫细胞化学和Western blot鉴定其在细胞内的表达。结果RT—PCR产物为650bp的特异片段，重组质粒pEGFPN1-GDNF经双酶切产生650bp和4．7kb的片段，测序分析结果与文献报道结果完全一致。将其转染COS-7细胞后，免疫细胞化学、Western blot结果表明GDNF蛋白能在COS-7细胞中正确表达。结论成功构建了pEGFPN1-GDNF真核表达载体，为进一步开展帕金森病的基因治疗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 胶质细胞源性神经营养因子 真核表达 重组质粒 转染

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