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传染性法氏囊病病毒DNA疫苗的免疫原性研究 被引量:6
1
作者 于涟 李建荣 +2 位作者 黄耀伟 孟松树 宋厚辉 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期995-1001,共7页
将传染性法氏囊病病毒弱毒株 (IBDV JD1)和强毒株 (IBDV ZJ2 0 0 0 )的基因组A节段全长cDNA、多聚蛋白 (VP2 /VP4/VP3)和主要宿主保护性抗原 (VP2 )基因 ,分别克隆入两种真核表达载体pCI和 pcDNA3,构建成 12种真核表达质粒。将制备的DN... 将传染性法氏囊病病毒弱毒株 (IBDV JD1)和强毒株 (IBDV ZJ2 0 0 0 )的基因组A节段全长cDNA、多聚蛋白 (VP2 /VP4/VP3)和主要宿主保护性抗原 (VP2 )基因 ,分别克隆入两种真核表达载体pCI和 pcDNA3,构建成 12种真核表达质粒。将制备的DNA疫苗以 2 0 0 μg的剂量经腿肌和皮下结合途径首免 14日龄SPF鸡 ,2 8日龄以相同的剂量二免 ,二免后 14d攻击IBDV标准强毒BC6 / 85株。结果表明 ,含A节段或多聚蛋白基因的表达载体均能诱导较高水平的中和抗体并能提供对强毒的免疫保护 ,多聚蛋白基因构建成的DNA疫苗与弱毒苗B87的免疫效果相当 ;编码VP2基因的DNA疫苗仅能诱导很低水平的中和抗体 ,几乎不能提供免疫保护 ;以 pCI为表达载体的免疫效果优于pcDNA3;源于ZJ2 0 0 0株基因构建成的DNA疫苗诱导的免疫反应优于JD1株 ,提示DNA疫苗的免疫效果与VP2蛋白的构象、表达载体的调控元件和毒株差异等因素有关。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 DNA疫苗 免疫原性 A节段全长cDNA 多聚蛋白 VP2
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传染性法氏囊病毒的抗原及分子特征(英文) 被引量:2
2
作者 周继勇 叶菊秀 +3 位作者 叶伟成 陈庆新 郑肖娟 郭军庆 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期37-45,共9页
用鸡胚成纤维细胞对来自野外的5个传染性法氏囊病毒株(IBDV-JD1、JD2、NB、HZ1、HZ2)进行分离,测定理化特性、致病性,同时进行血清亚型测定及A片段基因组的克隆分析.试验所用5个法氏囊组织悬液在鸡胚成纤维细胞盲传2~14代后适应细胞并... 用鸡胚成纤维细胞对来自野外的5个传染性法氏囊病毒株(IBDV-JD1、JD2、NB、HZ1、HZ2)进行分离,测定理化特性、致病性,同时进行血清亚型测定及A片段基因组的克隆分析.试验所用5个法氏囊组织悬液在鸡胚成纤维细胞盲传2~14代后适应细胞并产生细胞病变.细胞适应的IBDV毒株的理化和形态特征与经典传染性法氏囊病毒株一致.除IBDV-HZ1、HZ2属经典IBDV血清型外,IBDV-JD1、JD2和NB毒株分属不同的血清亚型.人工感染实验结果显示,分离的IBDV毒株产生与野外病例相似的临床症状和病变,出现法氏囊滤泡髓质的淋巴细胞变性、坏死和消失.基因组序列分析显示,IBDV-NB毒株A片段由3 264个核苷酸组成,编码由145个氨基酸残基组成的VP5和由1 012个氨基酸残基组成的多聚蛋白.与来自GenBank的IBDV Ⅰ型毒株比较,NB毒株A片段编码的多聚蛋白与JD1毒株的同源性最高,达99.5%,VP2与JD1、CEF94、D78的同源性为99.8%,VP3与JD1的同源性为99.2%,VP4与JD1的同源性为100%,VP5与JD1,HZ2,P2,CEF94,CT,Cu-1和D78毒株的同源性为99.3%.NB毒株VP2蛋白的第253、280、284位氨基酸残基与IBDV变异毒株和经典毒株一致,但不同于IBDV超强毒株.这些结果暗示IBDV的抗原表位是构象依赖性表位,IBDV血清亚型的形成与IBDV弱毒疫苗病毒株密切相关. 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 理化特性 血清亚型 基因组A片段
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传染性法氏囊病病毒中国超强毒株Harbin-1基因组A节段全长cDNA的连接 被引量:1
3
作者 黄广明 姜丽琼 +1 位作者 孙安赛 袁克湖 《动物医学进展》 CSCD 2002年第3期51-52,共2页
本研究利用单酶切位点 Sal消化传染性法氏囊病病毒中国超强毒株 Harbin-1基因组 A节段的上段和下段克隆 p GEM-T-P1 2和p GEM-T-P3 4,经过去磷酸化以后 ,再用连接酶将上下段连接起来。酶切和测序鉴定结果表明 ,我们得到了全长的 IBDV基... 本研究利用单酶切位点 Sal消化传染性法氏囊病病毒中国超强毒株 Harbin-1基因组 A节段的上段和下段克隆 p GEM-T-P1 2和p GEM-T-P3 4,经过去磷酸化以后 ,再用连接酶将上下段连接起来。酶切和测序鉴定结果表明 ,我们得到了全长的 IBDV基因组 A节段编码区c DNA克隆。本研究结果为以后的工作奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 中国超强毒株 Harbin-1基因组 A节段 全长CDNA 连接
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从云南蚕区分离BmCPV病毒株的全基因组克隆与系统发育分析 被引量:1
4
作者 张永红 唐芬芬 +2 位作者 邵榆岚 朱峰 白兴荣 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1036-1043,共8页
家蚕质型多角体病毒(BmCPV)是家蚕中肠型脓病的病原物。从云南蚕区的病蚕样品中分离到一株BmCPV病毒分离株,提取纯化该病毒粒子的总RNA并合成cDNA,克隆病毒全基因组序列,研究该病毒分离株的基因组结构与系统进化。克隆得到该病毒10条d... 家蚕质型多角体病毒(BmCPV)是家蚕中肠型脓病的病原物。从云南蚕区的病蚕样品中分离到一株BmCPV病毒分离株,提取纯化该病毒粒子的总RNA并合成cDNA,克隆病毒全基因组序列,研究该病毒分离株的基因组结构与系统进化。克隆得到该病毒10条dsRNA序列(S1~S10)并提交至NCBI数据库中。序列分析表明该病毒基因组序列全长24810bp,S1~S10片段序列都具有完整的ORF。BLAST比对发现克隆的该病毒基因组各片段编码区序列与已报道的1型BmCPV片段的相似度达88%以上,氨基酸序列相似度达90%以上;10条dsRNA基因组片段末端均有保守帽子结构5'-AGUAA……GUUAGCC-3'。基于S2片段RdRp基因的系统进化分析发现,该病毒与其他3个1型BmCPV分离株BmCPV1-Suzhou、BmCPV1-China、BmCPV1-Ⅰ聚为一支,基于S10片段polh基因的系统进化分析也表明该病毒为1型BmCPV新的分离株系。根据上述研究结果将该病毒定名为BmCPV1-Yunnan。 展开更多
关键词 家蚕质型多角体病毒 分离株 基因组片段 系统进化 RNA聚合酶基因 多角体蛋白基因
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水稻黑条矮缩病毒基因组片段6编码一种非结构蛋白 被引量:11
5
作者 方守国 王朝辉 +2 位作者 韩成贵 李大伟 于嘉林 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期5-8,共4页
水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)是引起我国水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病的病原。引起玉米粗缩病的RBSDV湖北分离物10条基因组dsRNA全序列已被确定,其中基因组片段6(S6)全长序列为2645bp,只含有一个阅... 水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)是引起我国水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病的病原。引起玉米粗缩病的RBSDV湖北分离物10条基因组dsRNA全序列已被确定,其中基因组片段6(S6)全长序列为2645bp,只含有一个阅码框(82—2460nt),编码一个分子量约为89.6kDa的蛋白(P6)。为进一步研究该蛋白的生物学功能,在大肠杆菌中表达了RBSDV基因组片段6编码的P6蛋白并制备了相应的抗血清。Western blotting分析显示,P6抗血清不与纯化的RBSDV粒子蛋白发生反应,而在被RBSDV感染的玉米叶片和带毒的传播介体——灰飞虱中可检测到P6。此结果表明,RBSDV—S6编码的蛋白是一种非结构蛋白。 展开更多
关键词 水稻黑条矮缩病毒 基因组片段6 原核表达 非结构蛋白
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鸡传染性法氏囊病病毒超强毒上海株SH95基因组B片段的克隆与分子系统进化树分析 被引量:6
6
作者 孙建和 陆苹 +1 位作者 蒋静 赵渝 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期138-143,共6页
分离、纯化了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)上海株(SH95)的病毒核酸dsRNA,应用随机引物将RNA反转录成cDNA,以此为模板一步扩增出全长基因组B片段,将其克隆入pGEM-T载体,并进行序列分析。克隆的B片段全长2827个核苷酸,其编码的氨... 分离、纯化了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)上海株(SH95)的病毒核酸dsRNA,应用随机引物将RNA反转录成cDNA,以此为模板一步扩增出全长基因组B片段,将其克隆入pGEM-T载体,并进行序列分析。克隆的B片段全长2827个核苷酸,其编码的氨基酸与超强毒株HK46的同源性达98 18%(863/879)。分子系统进化树分析表明,SH95超强毒株与美国变异株E的亲缘关系最近,但与基于基因组A片段的系统进化分析完全不同,表明该毒株在发生过程中基因重配比基因重组发挥了更重要的作用。通过对14株IBDV编码氨基酸序列的分析、比较,推测B片段上11个独特的氨基酸位点可能与毒力相关。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 基因组 克隆 分子系统进化树 序列分析
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家蚕质型多角体病毒基因组片段1中的假定重叠基因检测
7
作者 张仰齐 曹广力 +2 位作者 何蕾 薛仁宇 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期45-51,共7页
生物信息学分析结果显示家蚕质型多角体病毒(BmCPV)基因组s1片段中含有-个假定的重叠基因ORFX。为了检测该重叠基因ORFX是否在RNA和蛋白质水平有相应的表达产物,用大肠杆菌表达的重组ORFX蛋白制备多克隆抗体,对感染BmCPV的家蚕中肠... 生物信息学分析结果显示家蚕质型多角体病毒(BmCPV)基因组s1片段中含有-个假定的重叠基因ORFX。为了检测该重叠基因ORFX是否在RNA和蛋白质水平有相应的表达产物,用大肠杆菌表达的重组ORFX蛋白制备多克隆抗体,对感染BmCPV的家蚕中肠后部组织进行Westernblotting和免疫组化检测,结果在感染BmCPV第1~7天的家蚕中肠组织中没有检测到假定的ORFX蛋白。进一步基于假定重叠基因ORFX区域及其下游序列设计定量检测ORFX基因和s1片段转录本RNA总水平的引物RECPV-1/RECPV-2,以及定量检测S1片段转录本RNA水平的引物RECPV.3/RECPV-4,用引物Oligo(dT)/RECPV-2和Oligo(dT)/RECPV-4的反转录产物作为模板,对感染BmCPV的家蚕中肠组织中的S1片段转录本和假定的ORFX转录本进行定量PCR检测,结果在感染BmCPV第5~7天的中肠组织中均没有检测到假定的ORFX转录本。由此表明,BmCPV基因组S1片段中可能不存在假定的ORFX重叠基因。 展开更多
关键词 家蚕质型多角体病毒 基因组S1片段 重叠基因 免疫组化 定量PCR
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在我国发现普马拉病毒新亚型 被引量:7
8
作者 唐丽华 张全福 +5 位作者 修梅红 扈光伟 沈博 杨显达 梁米芳 李德新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期320-325,共6页
对我国东北地区捕获的157份棕背鼠平的肺组织进行普马拉病毒检测。其中免疫荧光检测出阳性标本1份,PCR检测出核苷酸阳性标本7份。对PCR产物进行测序后发现,其核苷酸的序列与报道的普马拉病毒核苷酸序列存在着差异。系统进化分析表明,我... 对我国东北地区捕获的157份棕背鼠平的肺组织进行普马拉病毒检测。其中免疫荧光检测出阳性标本1份,PCR检测出核苷酸阳性标本7份。对PCR产物进行测序后发现,其核苷酸的序列与报道的普马拉病毒核苷酸序列存在着差异。系统进化分析表明,我国发现的这株普马拉病毒,在进化树上形成了一个新的分支,为一新亚型。并且与在韩国和日本发现的普马拉病毒亲缘关系最为接近。 展开更多
关键词 普马拉病毒 S片段 M片段 核苷酸序列分析
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水稻黑条矮缩病毒基因组片段S10的cDNA克隆及全序列分析 被引量:8
9
作者 张恒木 陈剑平 +1 位作者 薛庆中 雷娟利 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期24-28,共5页
基于 RT- PCR策略克隆了水稻黑条矮缩病毒 (rice black- streaked dwarf virus,RBSDV)浙江分离株基因组 S10 ,并测定了它的全序列。结果表明 ,水稻黑条矮缩病毒浙江分离物 (RBSDV- Zj)基因组片段 S10全长 180 1nt(EMBL登录号为AJ2 97433... 基于 RT- PCR策略克隆了水稻黑条矮缩病毒 (rice black- streaked dwarf virus,RBSDV)浙江分离株基因组 S10 ,并测定了它的全序列。结果表明 ,水稻黑条矮缩病毒浙江分离物 (RBSDV- Zj)基因组片段 S10全长 180 1nt(EMBL登录号为AJ2 97433) ,仅含有一个大的开放阅读框 (open reading frame,ORF) ,编码一个 6 3.1k D的多肽 ,与日本的水稻黑条矮缩病毒基因组片段 S10在核苷酸和氨基酸水平上同源性分别为 93.8%和 96 .2 %;与意大利玉米粗缩病毒 (maize rough dwarfvirus,MRDV)的基因组片段 S10在核苷酸和氨基酸水平上的同源性分别为 87.7%和 92 .0 %,推测它们是同一病毒的不同地理小种。 展开更多
关键词 水稻黑条矮缩病毒 基因线片段 序列分析 CDNA克隆
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利用叶绿体基因组高变片段对7个软枣猕猴桃居群遗传多样性的研究 被引量:7
10
作者 刘虹 刘锡红 +2 位作者 刘秋宇 李刚 覃瑞 《植物学研究》 2014年第6期238-248,共11页
软枣猕猴桃是猕猴桃属内倍性最复杂的物种之一,本研究针对分布在国内4个省份具有代表性的7个野生软枣猕猴桃居群,选用21对叶绿体基因组高变片段对7个居群的软枣猕猴桃进行序列比对、系统构建和多态性分析。研究发现,21对引物中有7对引物... 软枣猕猴桃是猕猴桃属内倍性最复杂的物种之一,本研究针对分布在国内4个省份具有代表性的7个野生软枣猕猴桃居群,选用21对叶绿体基因组高变片段对7个居群的软枣猕猴桃进行序列比对、系统构建和多态性分析。研究发现,21对引物中有7对引物在7个软枣猕猴桃居群样本中均能扩增成功,第13号片段rpl32-trnL的分辨率最好。利用片段rpl32-trnL对7个软枣猕猴桃居群分别采用MP算法和NJ法构建的系统进化树表明,来自长白山的2个居群位于系统树最基部,来自大别山的3个居群并未处于同一支中,21个片段的平均多态位点数达到27.16。本研究为猕猴桃属叶绿体基因组的开发和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 软枣猕猴桃 叶绿体基因组 高变片段 系统进化树
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浙江新分离汉坦病毒ZT71株S基因片段的克隆及序列分析 被引量:2
11
作者 谢荣辉 翁景清 +6 位作者 姚苹苹 李婵 徐芳 朱函坪 赵芝雅 茅海燕 朱智勇 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第7期570-573,共4页
目的为了获得浙江省汉坦病毒基因组更为详尽的资料,研究汉坦病毒的进化状况及变异程度,为疫苗病毒株的选择使用提供科学依据。方法本实验室利用RT-PCR方法扩增ZT71株S基因片段并克隆入质粒载体,进行核苷酸序列测定及分析。结果ZT71株S... 目的为了获得浙江省汉坦病毒基因组更为详尽的资料,研究汉坦病毒的进化状况及变异程度,为疫苗病毒株的选择使用提供科学依据。方法本实验室利用RT-PCR方法扩增ZT71株S基因片段并克隆入质粒载体,进行核苷酸序列测定及分析。结果ZT71株S基因由1754个核苷酸组成,只有一个开放读码框架,共编码429个氨基酸。与HTN型病毒(76-118)的核苷酸和氨基酸同源性分别为72.0%和82.6%,与SEO型病毒(SR-11、R22、Guo3、8610)核苷酸和氨基酸同源性分别为88.4%—96.5%和98.1%—99.0%,与其它型汉坦病毒的同源都很低。结论表明此分离的病毒为SEO型汉坦病毒,为进一步研究其进化和变异提供了有利条件。 展开更多
关键词 汉坦病毒 ZTT1株 S片段 序列分析
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汉坦病毒Q32株L和M片段全基因序列分析 被引量:1
12
作者 代晓霞 张全福 +6 位作者 王世文 楚雍列 郝永华 王芹 修梅红 张颖 李德新 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期56-59,共4页
目的测定汉坦病毒Q32株L、M片段的全长序列,了解其分子基础。方法设计特异的PCR引物,用RT-PCR技术分段扩增Q32株全长L、M片段,PCR产物纯化后直接测序,或用T-A克隆方法进行PCR产物克隆,然后进行遗传进化分析。结果Q32株L片段的全基因序列... 目的测定汉坦病毒Q32株L、M片段的全长序列,了解其分子基础。方法设计特异的PCR引物,用RT-PCR技术分段扩增Q32株全长L、M片段,PCR产物纯化后直接测序,或用T-A克隆方法进行PCR产物克隆,然后进行遗传进化分析。结果Q32株L片段的全基因序列共6533个核苷酸,GC含量为37·38%,AT含量为62·62%,包含一个单一的开放读码框架(ORF),该读码框架从38到6493,由6456个核苷酸组成,编码2151个氨基酸,可以合成相对分子质量为2·46×105的蛋白。M片段全基因序列共3616个核苷酸,GC含量为39·44%,AT含量为60·56%,包含一个单一的开放读码框架(ORF),其读码框架从41到3448,由3408个核苷酸组成,编码1135个氨基酸,可以合成相对分子质量为1·26×105的蛋白。Q32编码的RNA聚合酶也有6个比较保守的区域。结论汉坦病毒Q32株M和L片段具有和其他汉坦病毒糖蛋白和RNA聚合酶相似的核苷酸一级结构,核苷酸序列虽有差异,但在氨基酸水平上的同源性仍很高。 展开更多
关键词 汉坦病毒 M基因片段 L基因片段 核苷酸序列分析
原文传递
汉坦病毒A9株M基因片段核苷酸序列的测定及分析 被引量:1
13
作者 邱建明 石晓宏 +2 位作者 杭长寿 R.M.ELLIot 宋干 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第6期390-394,共5页
采用反转录-PCR方法,分节段扩增汉坦病毒A9株M基因片段cDNA,并克隆入pGEMT载体中,用双脱氧末端终止法直接测定序列。结果表明,A9株M片段cDNA由3618个碱基组成,编码1135个氨基酸,  核苷酸序列及... 采用反转录-PCR方法,分节段扩增汉坦病毒A9株M基因片段cDNA,并克隆入pGEMT载体中,用双脱氧末端终止法直接测定序列。结果表明,A9株M片段cDNA由3618个碱基组成,编码1135个氨基酸,  核苷酸序列及由其推导的氨基酸序列同76/118株的同源性分别为94.33%和97.80%,说明汉坦病毒A9株与76/118株在糖蛋白的结构上高度保守。同76/118株比较,在3'末端非编码区变异极大,变异率为20%,且多了2个核苷酸。A9株M基因片段核苷酸序列的获得,为利用该cDNA进行基因工程疫苗的研制创造了条件。 展开更多
关键词 汉坦病毒 M基因片段 序列分析 核苷酸
原文传递
IBDV中国超强毒株Harbin-1基因组B节段的克隆和序列分析 被引量:1
14
作者 黄广明 张曼夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期256-259,共4页
给SPF鸡人工接种鸡传染性法氏囊病病毒中国超强毒株Harbin_1,用LiCl分级沉淀方法从法氏囊组织纯化病毒基因组dsRNA ,通过RT_PCR分两段扩增获得B节段的cDNA片段Ph12与pb34。将pb12与pb34分别克隆到pGEM_T载体上测序 ,然后进行序列分析。... 给SPF鸡人工接种鸡传染性法氏囊病病毒中国超强毒株Harbin_1,用LiCl分级沉淀方法从法氏囊组织纯化病毒基因组dsRNA ,通过RT_PCR分两段扩增获得B节段的cDNA片段Ph12与pb34。将pb12与pb34分别克隆到pGEM_T载体上测序 ,然后进行序列分析。对各毒株VP1序列进行同源性分析而得出的系统树表明Harbin_1与超强毒株IL3、HK4 6、UK6 6 1和OKYM之间的亲缘关系较其它毒株更近 ,但强弱毒株之间没有明显的界限。在Harbin_1B节段序列中没有发现上述超强毒株所独有的 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 基因组 B节段 克隆 序列分析
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Genome sequence of Gossypium anomalum facilitates interspecific introgression breeding 被引量:1
15
作者 Zhenzhen Xu Jiedan Chen +24 位作者 Shan Meng Peng Xu Caijiao Zhai Fang Huang Qi Guo Liang Zhao Yonggang Quan Yixin Shangguan Zhuang Meng Tian Wen Ya Zhang Xianggui Zhang Jun Zhao Jianwen Xu Jianguang Liu Jin Gao Wanchao Ni Xianglong Chen Wei Ji Nanyi Wang Xiaoxi Lu Shihong Wang Kai Wang Tianzhen Zhang Xinlian Shen 《Plant Communications》 SCIE 2022年第5期199-213,共15页
Crop wild relatives are an important reservoir of natural biodiversity. However, incorporating wild geneticdiversity into breeding programs is often hampered by reproductive barriers and a lack of accurate genomicinfo... Crop wild relatives are an important reservoir of natural biodiversity. However, incorporating wild geneticdiversity into breeding programs is often hampered by reproductive barriers and a lack of accurate genomicinformation. We assembled a high-quality, accurately centromere-anchored genome of Gossypium anomalum, a stress-tolerant wild cotton species. We provided a strategy to discover and transfer agronomicallyvaluable genes from wild diploid species to tetraploid cotton cultivars. With a (Gossypium hirsutum 3 G.anomalum)2 hexaploid as a bridge parent, we developed a set of 74 diploid chromosome segment substitution lines (CSSLs) of the wild cotton species G. anomalum in the G. hirsutum background. This set of CSSLsincluded 70 homozygous substitutions and four heterozygous substitutions, and it collectively containedabout 72.22% of the G. anomalum genome. Twenty-four quantitative trait loci associated with plant height,yield, and fiber qualities were detected on 15 substitution segments. Integrating the reference genome withagronomic trait evaluation of the CSSLs enabled location and cloning of two G. anomalum genes thatencode peroxiredoxin and putative callose synthase 8, respectively, conferring drought tolerance andimproving fiber strength. We have demonstrated the power of a high-quality wild-species reference genomefor identifying agronomically valuable alleles to facilitate interspecific introgression breeding in crops. 展开更多
关键词 wild diploid species Gossypium anomalum genome chromosome segment substitution lines drought tolerance fiber strength
原文传递
汉坦病毒S基因的分段表达及其表达产物的鉴定 被引量:20
16
作者 尹文 徐志凯 +2 位作者 阎岩 薛小平 王海涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期23-25,32,共4页
用含PRPL启动子的原核表达载体PGEX4T系统,构建了含汉坦病毒76118株S基因全长片段(1.3kb)及部分片段(1.1kb和0.7kb)的表达载体pGEX4THanS,并在大肠杆菌中分别进行了表达。用1... 用含PRPL启动子的原核表达载体PGEX4T系统,构建了含汉坦病毒76118株S基因全长片段(1.3kb)及部分片段(1.1kb和0.7kb)的表达载体pGEX4THanS,并在大肠杆菌中分别进行了表达。用18株具有不同特异性的抗汉坦病毒mAb,以ELISA夹心法对上述表达产物进行了检测。结果表明,重组基因全长片段的表达产物(NP)与其中13株抗汉坦病毒组特异性和Ⅰ型特异性NP的mAb均可发生反应;1.1kb基因片段的表达产物与上述mAb都不起反应;0.7kb基因片段的表达产物只与上述部分mAb发生反应。 展开更多
关键词 汉坦病毒 S基因 原核表达 核蛋白 单克隆抗体
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簇毛麦基因组特异性PCR标记的建立和应用 被引量:9
17
作者 刘守斌 唐朝晖 +3 位作者 尤明山 李保云 宋建民 刘广田 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期350-356,共7页
以普通小麦中国春、簇毛麦、中国春 簇毛麦二体附加系和代换系为材料进行RAPD分析 ,筛选出一个簇毛麦基因组特异性RAPD片段OPF0 2 757,该片段分布于簇毛麦所有染色体上。在对OPF0 2 757进行克隆、测序的基础上 ,设计一对PCR引物 ,建立... 以普通小麦中国春、簇毛麦、中国春 簇毛麦二体附加系和代换系为材料进行RAPD分析 ,筛选出一个簇毛麦基因组特异性RAPD片段OPF0 2 757,该片段分布于簇毛麦所有染色体上。在对OPF0 2 757进行克隆、测序的基础上 ,设计一对PCR引物 ,建立了簇毛麦基因组特异性PCR标记。用这对PCR引物对不同普通小麦品种、不同硬粒小麦品种、不同居群的簇毛麦、中国春 簇毛麦二体附加系、中国春 簇毛麦二体代换系、普通小麦 簇毛麦双二倍体、硬粒小麦 簇毛麦双二倍体等材料进行扩增 ,凡具有簇毛麦染色体的材料都能扩增出一条长为 6 77bp的DNA片段 ,而不具簇毛麦染色体的材料包括大麦、黑麦、长穗偃麦草、中间偃麦草等不能扩增出该片段。所以 ,该特异性PCR标记可用于快速跟踪检测小麦背景中的簇毛麦染色体。 展开更多
关键词 簇毛麦 PCR 基因组特异性RAPD片段 基因组特异性PCR标记
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非洲马瘟病毒分型RT-PCR检测方法的研究 被引量:7
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作者 赵文华 杨仕标 +1 位作者 王金萍 李富祥 《中国农学通报》 CSCD 2012年第2期43-47,共5页
为验证所引进9个血清型的非洲马瘟病毒,并同时对其分型鉴定方法有所探索,根据参考文献设计位于AHSV基因组L2片段的型特异性分型引物,用RT-PCR及测序方法进行实验研究。抽提所引进9种血清型的RNA,经RT-PCR扩增,各引物均有特异性扩增,经... 为验证所引进9个血清型的非洲马瘟病毒,并同时对其分型鉴定方法有所探索,根据参考文献设计位于AHSV基因组L2片段的型特异性分型引物,用RT-PCR及测序方法进行实验研究。抽提所引进9种血清型的RNA,经RT-PCR扩增,各引物均有特异性扩增,经进一步的核苷酸序列测定及分析,证实所扩增片段均为非洲马瘟病毒L2基因相应位置片段;同时对AHSV分型RT-PCR检测方法进行了改进优化研究。实验证实分型引物对各RNA均有特异扩增,所引进9个血清型为正确血清型,并建立了适合实验室条件的AHSV分型鉴定方法。 展开更多
关键词 非洲马瘟病毒 L2基因组片段 血清型 RT-PCR
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水稻黑条矮缩病毒基因组片段S7的cDNA克隆及全序列分析 被引量:4
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作者 张恒木 陈剑平 +2 位作者 雷娟利 程晔 薛庆中 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期200-207,共8页
应用RT PCR技术克隆了 2个水稻黑条矮缩病毒 (riceblack streakeddwarfvirus,RBS DV)中国分离物 ,即浙江分离物和河北分离物的基因组片段S7,并测定了他们的全序列。结果表明 :RBSDV浙江分离物 (RBSDV Zj)基因组片段S7全长 2 1 93nts(EMB... 应用RT PCR技术克隆了 2个水稻黑条矮缩病毒 (riceblack streakeddwarfvirus,RBS DV)中国分离物 ,即浙江分离物和河北分离物的基因组片段S7,并测定了他们的全序列。结果表明 :RBSDV浙江分离物 (RBSDV Zj)基因组片段S7全长 2 1 93nts(EMBL登录号为AJ2 9742 7) ,RBSDV河北分离物基因组片段S7全长 2 1 90nts(EMBL登录号为AJ2 9742 8) ,二者均含有两个开放阅读框 (openreadingframe,ORF) ,分别编码约 41kD和 3 6kD多肽 ,2个中国分离物核苷酸同源性高达 99% ,相应的ORF编码的多肽同源性分别为 1 0 0 %和 94 4% ,与日本RBSDV基因组片段S7核苷酸同源性为 93 4%和 93 8% ,相应ORF编码的多肽同源性分别为98 1 % (ORF1 )、96 5 %和 97 8% (ORF2 ) ,与意大利MRDVS6核苷酸同源性为 85 1 %和85 3 % ,相应多肽同源性分别为 92 3 % (ORF1 )、85 5 %和 86 8% (ORF2 )。 展开更多
关键词 水稻黑条矮缩病毒 基因组片段S7 序列分析 CDNA克隆
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辽西李属坏死环斑病毒检测及其多样性分析 被引量:2
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作者 李正男 董雅凤 +4 位作者 张双纳 张尊平 范旭东 任芳 胡国君 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期15-25,共11页
采用RT-PCR对辽西地区采集的45份核果叶片样品进行了李属坏死环斑病毒(PNRSV)的鉴定,其中9份样品为阳性。以阳性样品总RNA为模板,克隆了PNRSV基因组RNA3近全长序列。序列长度在1 612~1 619 bp之间,一致性为93.8%~100%。以本研究获得的9... 采用RT-PCR对辽西地区采集的45份核果叶片样品进行了李属坏死环斑病毒(PNRSV)的鉴定,其中9份样品为阳性。以阳性样品总RNA为模板,克隆了PNRSV基因组RNA3近全长序列。序列长度在1 612~1 619 bp之间,一致性为93.8%~100%。以本研究获得的9个和Gen Bank登录的42个PNRSV近全长RNA3序列为基础,截取cp基因、mp基因和近全长RNA3序列分别构建系统发育树,三者结果一致:均可将51个PNRSV分离物分为4个组,即PV32、PV96、PE5和本文报道的一个新的PNRSV组,9个辽西分离物分别属于PV32组或PV96组。本研究明确了我国辽西地区PNRSV的遗传多样性,证明了PNRSV基因组RNA3在研究PNRSV遗传多样性中的适用性,同时发现了一个新的PNRSV组,对于PNRSV遗传多样性研究意义重大。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒 基因组RNA3 CP基因 mp基因 遗传多样性
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