大豆遗传转化研究进展 被引量：57

1

作者 刘海坤 卫志明 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期126-134,共9页

近年来大豆的遗传转化取得了较大的进展。文章结合作者实验室的工作介绍了几种主要的大豆遗传转化系统及其操作方法,并探讨了影响农杆菌介导大豆遗传转化的因素。

关键词 大豆 根癌农杆菌 遗传转化

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硝酸银对桑树遗传转化的作用(简报) 被引量：11

2

作者 钟名其 楼程富 +2 位作者 谈建中 周金妹 张有做 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期74-76,共3页

调查了硝酸银对农杆菌介导的桑(MorusalbaL.)品种“新一之濑”遗传转化的作用。在抗性筛选培养基中添加2mgL-1硝酸银,桑叶盘褐化死亡率减少7.2%,抗性芽分化率增加3.9%,外源基因转化频率增加9.6%,“假阳性”转化体减少42.5%。感染农杆菌... 调查了硝酸银对农杆菌介导的桑(MorusalbaL.)品种“新一之濑”遗传转化的作用。在抗性筛选培养基中添加2mgL-1硝酸银,桑叶盘褐化死亡率减少7.2%,抗性芽分化率增加3.9%,外源基因转化频率增加9.6%,“假阳性”转化体减少42.5%。感染农杆菌的桑叶盘经MS培养基培养、农杆菌液体培养和固体培养基上划线培养等实验证实,硝酸银对工程农杆菌LBA4404的生长具有抑制作用,这可能是提高桑树转化频率的原因之一。 展开更多

关键词 桑树 遗传转化 根癌农杆菌 硝酸银

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二穗短柄草幼胚再生体系及农杆菌介导转化的初步研究 被引量：11

3

作者 吴雪莉 刘金星 +2 位作者 Klaus K Nielsen 杨志民 高彩霞 《草业学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期9-16,共8页

以二穗短柄草3个品系BDR018,BD21,BD21-3的幼胚为外植体,研究了幼胚大小对胚性愈伤组织诱导和再生的影响。采用携带gus和bar基因双元表达载体(pDM805)的根癌农杆菌菌株AGL1对BDR018品系的幼胚愈伤组织进行了遗传转化。本实验探讨了影响... 以二穗短柄草3个品系BDR018,BD21,BD21-3的幼胚为外植体,研究了幼胚大小对胚性愈伤组织诱导和再生的影响。采用携带gus和bar基因双元表达载体(pDM805)的根癌农杆菌菌株AGL1对BDR018品系的幼胚愈伤组织进行了遗传转化。本实验探讨了影响幼胚愈伤组织诱导再生及遗传转化的几个因素。结果发现,幼胚大小介于0.5～1.0mm之间的愈伤组织诱导率最高。随愈伤组织年龄的增加,BDR018,BD21,BD21-3愈伤组织的再生率下降,白化率上升。愈伤组织年龄在5～8周范围内转化效率较高,平均转化效率为38.5%。真空处理5min和0.01%的Silwet L-77处理均可提高转化效率。对转化植株进行GUS基因化学组织检测和PCR鉴定,初步证明外源基因已整合再生植株基因组中。 展开更多

关键词 二穗短柄草 幼胚 愈伤组织 农杆菌 遗传转化

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刺五加愈伤组织的遗传转化 被引量：5

4

作者 李学宝 金波 陈光荣 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1995年第4期494-497,共4页

刺五加（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ）胚性愈伤组织经根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）Ｃ５８Ｃ１（ｐＢＺ６１１１）感染后，共培养４８～７２ｈ，再转移到含氯霉素５０ｍｇ／Ｌ的... 刺五加（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ）胚性愈伤组织经根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）Ｃ５８Ｃ１（ｐＢＺ６１１１）感染后，共培养４８～７２ｈ，再转移到含氯霉素５０ｍｇ／Ｌ的ＭＳ选择培养基（附加２，４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ０．２ｍｇ／ｌ）上继代培养５０～６０ｄ，筛选得到氯霉素抗性愈伤组织．该愈伤组织能在无激素的ＭＳ培养基上增殖，并检测到胭脂碱合成酶活性，表明是转化愈伤组织．转化愈伤组织可诱导形成胚状体，但胚状体分化形成的苗不能生根，可能是由于转化细胞内源细胞分裂素含量过高，抑制了根的分化． 展开更多

关键词 刺五加 愈伤组织 根癌农杆菌 遗传转化 中药

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农杆菌介导小麦花药遗传转化影响因素的研究 被引量：5

5

作者 赵爱菊 刘玉平 +4 位作者 李亚军 程孟恩 李辉 王江浩 陈希勇 《河北农业科学》 2011年第2期85-87,91,共4页

采用农杆菌介导法对小麦花药愈伤组织进行转化,并探讨了影响其转化的因素。结果表明:不同基因型的花药培养力存在显著差异,抗性愈伤组织诱导率、抗性芽分化率、抗性植株获得率在不同的基因型之间也存在着很大差异;除小麦品种石4185外,冀... 采用农杆菌介导法对小麦花药愈伤组织进行转化,并探讨了影响其转化的因素。结果表明:不同基因型的花药培养力存在显著差异,抗性愈伤组织诱导率、抗性芽分化率、抗性植株获得率在不同的基因型之间也存在着很大差异;除小麦品种石4185外,冀5265也是小麦花药农杆菌转化的良好受体基因型;侵染后的愈伤组织在无菌滤纸上共培养2 d,效果最好。 展开更多

关键词 农杆菌 农杆菌介导法 小麦 花药 愈伤组织 遗传转化

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茶花CjAPL1基因干扰表达载体的构建与遗传转化 被引量：3

6

作者 孙迎坤 李纪元 殷恒福 《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2013年第2期114-117,123,共5页

茶花CjAPL1基因是MADS-box基因家族的AP1同源基因,AP1基因对于植物花器官的发育具有重要调控功能。本实验选取CjAPL1基因中长度为292bp的基因干扰片段,采用双酶切方法构建了有反向重复序列的RNA干扰中间载体pUCC-CjAPL1。分别用Pst I单... 茶花CjAPL1基因是MADS-box基因家族的AP1同源基因,AP1基因对于植物花器官的发育具有重要调控功能。本实验选取CjAPL1基因中长度为292bp的基因干扰片段,采用双酶切方法构建了有反向重复序列的RNA干扰中间载体pUCC-CjAPL1。分别用Pst I单酶切pUCC-CjAPL1中间载体和pCAMBIA1300植物表达载体,将有反向重复序列的小片段与pCAMBIA1300大片段连接,得到最终植物干扰表达载体pCAMRNAi-CjAPL1。采用热激法转化农杆菌GV3101,花序浸染法转化野生型拟南芥植株。利用潮霉素筛选阳性植株,进一步进行PCR扩增验证和表型观察统计。结果表明,pCAMRNAi-CjAPL1表达载体构建完整,且干扰载体成功地导入拟南芥基因组中。转基因植株表现出雄蕊缺失1～2枚的花型变化,证明CjAPL1基因对于雄蕊等花器官的发育起到了调控作用。 展开更多

关键词 茶花 CjAPL1基因 干扰表达 载体构建 遗传转化

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毛白杨糖基转移酶基因PtGT3的克隆与遗传转化 被引量：2

7

作者 于惠敏 王艳文 +1 位作者 任天莹 侯丙凯 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期682-688,共7页

通过RT-PCR从毛白杨克隆了一个木质素单体糖基转移酶候选基因PtGT3。该基因编码由465个氨基酸组成的蛋白质,在其C-端含有一个保守PSPG框,并与拟南芥木质素单体糖基转移酶具有较高的序列相似性,推测此酶在杨树中负责木质素单体的糖基化... 通过RT-PCR从毛白杨克隆了一个木质素单体糖基转移酶候选基因PtGT3。该基因编码由465个氨基酸组成的蛋白质,在其C-端含有一个保守PSPG框,并与拟南芥木质素单体糖基转移酶具有较高的序列相似性,推测此酶在杨树中负责木质素单体的糖基化修饰。利用组成型CaMV35S启动子,构建了PtGT3基因的植物表达载体。建立毛白杨高效组织培养再生体系,发现叶柄分化再生率最高,其次是茎段和叶片。采用农杆菌介导法进行遗传转化,获得了高表达PtGT3基因的转基因杨树。获得的糖基转移酶转基因杨树为在木本植物中研究木质素单体的糖基化修饰与木质素合成的关系奠定了基础。 展开更多

关键词 毛白杨 糖基转移酶 糖基化修饰 木质素 遗传转化

原文传递

农杆菌介导油菜黑胫病菌遗传转化 被引量：2

8

作者 宋培玲 皇甫海燕 +7 位作者 史志丹 燕孟娇 郝丽芬 皇甫九茹 贾晓清 郭晨 杨永青 李子钦 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期293-299,共7页

为优化建立农杆菌介导的油菜黑胫病菌遗传转化技术体系,以携带潮霉素磷酸转移酶基因的pCH-sGFP为载体,农杆菌LBA4404为介体,对油菜黑胫病菌的分生孢子进行转化。油菜黑胫病菌的最佳转化体系为:分生孢子浓度10^(6)个/mL,农杆菌OD600值0.6... 为优化建立农杆菌介导的油菜黑胫病菌遗传转化技术体系,以携带潮霉素磷酸转移酶基因的pCH-sGFP为载体,农杆菌LBA4404为介体,对油菜黑胫病菌的分生孢子进行转化。油菜黑胫病菌的最佳转化体系为:分生孢子浓度10^(6)个/mL,农杆菌OD600值0.6,乙酰丁香酮浓度200μmol/mL,pH 5.8,25℃,共培养4 d,获得120~161个转化子。随机选取26个转化子连续培养5代能够稳定遗传,绿色荧光蛋白基因gfp表达的菌丝和孢子可见绿色荧光。PCR鉴定发现T-DNA已整合进油菜黑胫病菌基因组中,Southern blot鉴定发现T-DNA以单拷贝的形式插入黑胫病菌中,转化子均能够稳定遗传。建立油菜黑胫病菌遗传转化体系为该病菌的致病机制研究和功能基因分析奠定了基础。 展开更多

关键词 油菜黑胫病菌 遗传转化 转化子

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AGPase反义基因转化番茄研究 被引量：1

9

作者 杨正安 张应华 +2 位作者 丁玉梅 许彬 张兴国 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期158-161,共4页

将含有魔芋AGPase反义基因的质粒pBAGP通过冻融法转化到根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株LBA4404中,再采用叶盘法将其转化进番茄(Lycopersicon esculentumMill.)栽培品种"合作908"中,获得含AGPase基因的番茄抗性植... 将含有魔芋AGPase反义基因的质粒pBAGP通过冻融法转化到根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株LBA4404中,再采用叶盘法将其转化进番茄(Lycopersicon esculentumMill.)栽培品种"合作908"中,获得含AGPase基因的番茄抗性植株。最后,经卡那抗性鉴定、NPTⅡ基因和AGPase基因PCR扩增和PCR-Southern杂交检测表明,反义AGPase基因成功整合到番茄基因组,为番茄改良品质育种奠定了材料基础。 展开更多

关键词 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 反义载体 遗传转化 番茄

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农杆菌介导AtAGPS基因转化玉米茎节的研究

10

作者 王舒 王帅 +6 位作者 苏胜忠 吴颖 李世鹏 单晓辉 刘宏魁 韩俊友 原亚萍 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1166-1170,共5页

本研究以优良玉米自交系昌7-2为受体材料,利用农杆菌介导的方法,将带有胚乳特异性表达启动子RP5和淀粉合成关键基因At AGPS的载体p CAMBIA3301-p RP5-At AGPS转入供试玉米材料的茎节中,并对获得的再生植株进行试纸条检测,PCR分子检测以... 本研究以优良玉米自交系昌7-2为受体材料,利用农杆菌介导的方法,将带有胚乳特异性表达启动子RP5和淀粉合成关键基因At AGPS的载体p CAMBIA3301-p RP5-At AGPS转入供试玉米材料的茎节中,并对获得的再生植株进行试纸条检测,PCR分子检测以及Southern blotting分析,证明At AGPS基因已经整合到玉米基因组中,转化率约为3.5%。本研究建立了一套优良的玉米遗传转化系统,为玉米分子育种摸索出了一条新的途径。 展开更多

关键词 农杆菌介导法 玉米茎节 淀粉合成关键酶基因(AGPS) 遗传转化

原文传递

野生毛桃叶片愈伤组织诱导及不定芽再生 被引量：11

11

作者 白芝兰 李果果 +1 位作者 吴晓冉 李国怀 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期814-819,F0004,共7页

【目的】为了初步建立野生‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生技术体系,【方法】以野生‘毛桃1号’试管苗幼嫩叶片为外植体,探讨了基本培养基、激素配比等一系列因素对‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导和保存的影响及TDZ浓度对... 【目的】为了初步建立野生‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生技术体系,【方法】以野生‘毛桃1号’试管苗幼嫩叶片为外植体,探讨了基本培养基、激素配比等一系列因素对‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导和保存的影响及TDZ浓度对愈伤组织不定芽再生的影响。【结果】结果表明,适合‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导的培养基为LP+6-BA 1.0 mg.L-1+2,4-D 3.0 mg.L-1+AgNO30.5 mg.L-1+蔗糖30.0 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1;保存的培养基为LP+2,4-D1.5 mg.L-1+CH 0.4 g.L-1+蔗糖30 g.L-1+CA 3.0 g.L-1或PVP 3.0 g.L-1+琼脂5.8 g.L-1,且采用持续暗培养保存,每28 d继代1次。愈伤组织在SH+TDZ 3.0 mg.L-1+NAA 0.3 mg.L-1+蔗糖30 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1的培养基上可再生不定芽,再生率为6.83%。【结论】初步建立了‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生体系,为桃愈伤组织再生和遗传转化的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 '毛桃1号’ 愈伤组织 植株再生

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