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黑曲霉作为细胞工厂:知识准备与技术基础 被引量：55
1
作者 郭艳梅 郑平 孙际宾 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1410-1418,共9页
黑曲霉是一种重要工业微生物,在酶制剂、异源蛋白、有机酸等领域应用广泛。2007年黑曲霉基因组的公布将黑曲霉的研究引入后基因组时代,各种组学数据如雨后春笋般涌现,人们对黑曲霉高效生产机制的理解上升到系统、分子层次;与此同时,黑... 黑曲霉是一种重要工业微生物,在酶制剂、异源蛋白、有机酸等领域应用广泛。2007年黑曲霉基因组的公布将黑曲霉的研究引入后基因组时代,各种组学数据如雨后春笋般涌现,人们对黑曲霉高效生产机制的理解上升到系统、分子层次;与此同时,黑曲霉遗传操作系统也不断成熟,为系统地研究和改造黑曲霉、将黑曲霉打造成通用细胞工厂奠定了基础。 展开更多
关键词 黑曲霉 细胞工厂 系统生物学 遗传操作系统
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产子囊霉素吸水链霉菌遗传操作系统的优化及调控基因的研究 被引量：2
2
作者 刘倩倩 余志拓 +2 位作者 吴远杰 张正玉 陈少欣 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1603-1608,共6页
吸水链霉菌所产的子囊霉素(1)在工业上具有重要的应用价值,但存在遗传操作效率低等问题。本研究以1生产菌株吸水链霉菌SFK-6-33为研究对象,考察了影响吸水链霉菌与大肠埃希菌ET12567接合转移效率的因素,优化了吸水链霉菌与大肠埃希菌的... 吸水链霉菌所产的子囊霉素(1)在工业上具有重要的应用价值,但存在遗传操作效率低等问题。本研究以1生产菌株吸水链霉菌SFK-6-33为研究对象,考察了影响吸水链霉菌与大肠埃希菌ET12567接合转移效率的因素,优化了吸水链霉菌与大肠埃希菌的接合转移遗传操作系统。结果表明,优化后的接合转移效率由最初的9.25×10^(–7)增加至4.33×10^(–5)。此外,在此基础上对吸水链霉菌生产1的相关调控基因(fkbN、fkbR1、shyT4和shyT10)进行研究,初步发现调控基因fkbN、shyT4能够促进1的合成,而调控基因fkbR1、shyT10对1的生物合成有抑制作用。 展开更多
关键词 吸水链霉菌 子囊霉素 接合转移效率 遗传操作系统 调控基因
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基于真核CMV启动子构建猪瘟病毒感染性cDNA克隆与病毒拯救
3
作者 关飞虎 王静 +6 位作者 宋亚芬 温立佳 田野 蒋颖 杨承槐 张辉 张乾义 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期561-567,607,共8页
为建立猪瘟病毒(CSFV)反向遗传操作系统,本研究将CSFV石门株(SM)全基因组克隆至pBAC11载体中,并采用重叠延伸PCR方法在病毒基因组5'端和3'端分别加入CMV真核启动子序列和RzBGH序列,并将其基因组nt2809的碱基C突变为T,将原有的Af... 为建立猪瘟病毒(CSFV)反向遗传操作系统,本研究将CSFV石门株(SM)全基因组克隆至pBAC11载体中,并采用重叠延伸PCR方法在病毒基因组5'端和3'端分别加入CMV真核启动子序列和RzBGH序列,并将其基因组nt2809的碱基C突变为T,将原有的AfeⅠ酶切位点突变消失作为拯救病毒的遗传标记。将构建的质粒转染PK-15细胞培养后,收集细胞上清盲传3代后通过RT-PCR扩增蛋白编码基因,并经间接免疫荧光试验(IFA)鉴定。RT-PCR鉴定结果显示扩增到CSFV特异性基因;IFA结果显示接种病毒的细胞出现绿色荧光。表明病毒拯救成功,将其命名为BAC-rSM。将BAC-rSM株在PK-15细胞中连续传18代,将第18代病毒经RT-PCR扩增E2基因,并对遗传标记的位点经Afe I酶切和鉴定,分析BAC-rSM病毒的遗传稳定性,结果显示第18代BAC-rSM株遗传标记稳定存在,表明拯救的病毒具有遗传稳定性。将BAC-rSM和SM株病毒分别以MOI 1感染PK-15细胞,在感染后不同时间点收获病毒并测定病毒滴度,结果显示BAC-rSM和SM株生长动力学特征基本一致。对第18代BAC-rSM株与SM株进行全基因组序列比对分析,利用在线软件npsa-prabi.ibcp.fr/对Erns和E2蛋白二级结构预测,采用荧光定量PCR(qPCR)对BAC-rSM和SM株感染PK-15细胞中IFN-βmRNA的转录水平。全基因测序比对分析结果显示,BAC-rSM株基因组共存在46个碱基突变,经预测其Erns和E2的突变导致各自的二级结构改变;qPCR检测结果显示,相对SM感染的PK-15细胞,BAC-rSM感染后8 h和24 h PK-15细胞中IFN-βmRNA的转录水平显著或极显著降低(P<0.05、P<0.01)。本研究建立了一种简单、操作方便的CSFV反向遗传操作系统的方法,为进一步开展CSFV的分子生物学、毒力决定因素、分子发病机制、疫苗开发和病毒与宿主相互作用的研究提供了新的技术方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 CMV启动子 感染性克隆 反向遗传操作系统
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