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重组人促甲状腺激素α亚基在大肠杆菌中的表达
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作者 熊蔚俐 孙蓓 +3 位作者 曹晓娜 马精彩 张镜宇 郭刚 《天津医药》 CAS 北大核心 2010年第3期167-169,共3页
目的:构建pGEX-3X/hTSHα大肠杆菌表达系统,制备重组人促甲状腺激素α(TSHα)亚基。方法:Trizol法提取新鲜人绒毛膜组织总RNA,将1μg总RNA逆转录合成cDNA并以之为模板进行PCR扩增hTSHα亚基的完全编码序列。EcoRI和BamHI双酶切将所扩增... 目的:构建pGEX-3X/hTSHα大肠杆菌表达系统,制备重组人促甲状腺激素α(TSHα)亚基。方法:Trizol法提取新鲜人绒毛膜组织总RNA,将1μg总RNA逆转录合成cDNA并以之为模板进行PCR扩增hTSHα亚基的完全编码序列。EcoRI和BamHI双酶切将所扩增的hTSHα基因定向克隆入表达载体pGEX-3X,转化感受态大肠杆菌Mach1-T1,IPTG诱导表达融合蛋白GST-rhTSHα。离心收集菌体,超声碎菌后获得包涵体。以梯度浓度降低的尿素溶液洗涤,8mol/L尿素溶液溶解包涵体。包涵体溶解液经透析后复性进行SDS-PAGE鉴定及竞争性ELISA抗原性分析。结果:DNA序列分析证实重组pGEX-3X/hTSHα质粒含有读码框正确的hTSHα基因。PAGE显示重组质粒可表达产生36ku大小的特异蛋白条带。ELISA结果表明,所表达的融合蛋白具有与抗人TSHα抗体相结合的能力。结论:成功构建了重组pGEX-3X/hTSHα表达载体,其产物具有hTSHα抗原性。 展开更多
关键词 糖蛋白激素类 α亚单位 克隆 分子 重组 遗传 基因表达 大肠杆菌
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