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甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因转化小麦及其表达 被引量:106
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作者 郭北海 张艳敏 +5 位作者 李洪杰 杜立群 李银心 张劲松 陈受宜 朱至清 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2000年第3期279-283,共5页
采用基因枪法将山菠菜甜菜碱醛脱氢酶 (BADH)基因导入小麦 (TriticumaestivumL .)品种 ,并且得以表达。该基因由玉米Ubi1启动子控制。在盐胁迫条件下 ,多数转基因植株叶片的BADH活性比受体亲本提高 1~ 3倍 ,部分植株相对电导率比亲本... 采用基因枪法将山菠菜甜菜碱醛脱氢酶 (BADH)基因导入小麦 (TriticumaestivumL .)品种 ,并且得以表达。该基因由玉米Ubi1启动子控制。在盐胁迫条件下 ,多数转基因植株叶片的BADH活性比受体亲本提高 1~ 3倍 ,部分植株相对电导率比亲本明显低 ,表明转基因植株的细胞膜在胁迫时有受损较轻倾向。PCR和Southern杂交分析证实外源BADH基因已插入小麦基因组 ,平均转化频率为 4.1%。 展开更多
关键词 BADH基因 转基因 基因枪 小麦
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农杆菌介导的植物基因转化研究进展 被引量:64
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作者 王景雪 孙毅 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第1期7-13,共7页
农杆菌介导的植物基因转化是当今植物基因转化的主要方法之一,因而深受关注。本文从农杆菌介导的基因转化机理,植物对农杆菌侵染的反应,转基因植物的遗传表达,以及农杆菌对单子叶植物的转化等方面论述了该领域的最新研究进展。
关键词 土壤农杆菌 基因转化 遗传表达 植物
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抗凋亡基因survivin促进细胞转化的作用机制 被引量:77
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作者 朱红霞 刘爽 +4 位作者 周翠琦 周晓波 张帆 全兰平 徐宁志 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期338-340,共3页
目的 探讨抗凋亡基因survivin在细胞转化中的作用机制。方法 利用RT PCR获得survivin编码区序列 ,双酶切后 ,将其定向克隆至原核和真核表达载体 ;生长曲线观察高表达survivin对细胞增殖的影响 ;软琼脂集落形成实验观察细胞的接触抑制... 目的 探讨抗凋亡基因survivin在细胞转化中的作用机制。方法 利用RT PCR获得survivin编码区序列 ,双酶切后 ,将其定向克隆至原核和真核表达载体 ;生长曲线观察高表达survivin对细胞增殖的影响 ;软琼脂集落形成实验观察细胞的接触抑制生长能力 ;WesternBlot检测survivin高表达引起的蛋白质分子改变。结果 通过分子克隆 ,构建survivin原核和真核表达载体 ,并可在大肠杆菌和真核细胞中表达。生长曲线表明 ,转染survivin的 2 93细胞的增殖速度略快于对照细胞 ,尤其在细胞生长至高密度时 ;Survivin可以明显提高 2 93细胞的软琼脂集落形成能力 ;Survivin的高表达可以引起癌基因cyclinD1和c myc的蛋白表达水平增高。结论 抗凋亡基因survivin具有促进细胞转化的作用 ,这种作用可能依赖于cyclinD1和c 展开更多
关键词 基因表达 细胞转化 肿瘤 抗凋亡基因 SURVIVIN
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导入β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶基因的转基因可育油菜及其抗菌核病的研究 被引量:67
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作者 蓝海燕 王长海 +4 位作者 张丽华 刘桂珍 王岚兰 陈正华 田颖川 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期142-146,共5页
利用农杆菌转化法,将组成型表达β1,3葡聚糖酶及几丁质酶基因的双价植物表达载体pBLGC转化优质甘蓝型油菜品种H165,并得到了抗卡那霉素(Kanamycin,Kan)的再生植株。我们对所得到的抗Kan的再生苗进行了初步分子生物学检测,结果表明,在K15... 利用农杆菌转化法,将组成型表达β1,3葡聚糖酶及几丁质酶基因的双价植物表达载体pBLGC转化优质甘蓝型油菜品种H165,并得到了抗卡那霉素(Kanamycin,Kan)的再生植株。我们对所得到的抗Kan的再生苗进行了初步分子生物学检测,结果表明,在K15(Kan15mg/L)培养基上的绿苗中有30%为PCR阳性植株,而在K25(Kan10mg/L)培养基上的绿苗有53%的阳性率。对部分PCR阳性的转基因植株进行了点杂交分析,结果均表现出较强的杂交信号,这初步说明外源基因已整合到油菜基因组中。转基因植株的活体接种油菜菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorium)试验表明,部分转基因植株比对照显示较强抗病性。 展开更多
关键词 几丁质酶基因 转基因油菜 抗菌核病 农杆菌介导
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杨树NL-80106转Bt基因植株的获得及抗虫性 被引量:53
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作者 饶红宇 陈英 +3 位作者 黄敏仁 王明庥 伍宁丰 范云六 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 2000年第2期1-5,共5页
通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导将苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis)毒蛋白基因Bt转入杨树NL 80 10 6 (美洲黑杨×小叶杨 ,Populusdeltoides×Populussimonii) ,获得了再生植株。PCR及PCR Southernblotting... 通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导将苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis)毒蛋白基因Bt转入杨树NL 80 10 6 (美洲黑杨×小叶杨 ,Populusdeltoides×Populussimonii) ,获得了再生植株。PCR及PCR Southernblotting的分析结果表明 ,Bt基因已整合到基因组中。部分转基因植株的杀虫实验表明 ,转基因植株B45和B6 4对一龄舞毒蛾 (LymantriadisparLinn .)幼虫有明显抗性 ,饲喂转基因杨树叶片的幼虫死亡率显著高于未转基因的对照植株。 展开更多
关键词 杨树 转基因 抗虫性 BT基因导入
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苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因转化美洲黑杨的研究 被引量:58
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作者 陈颖 韩一凡 +2 位作者 李铃 田颖川 聂绍基 《林业科学》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期97-103,共7页
本研究首先建立了美洲黑杨叶片外植体的再生系统,并利用Horsch等人1985年发明的叶盘法,将分别带有嵌合基因NPTII和1.8kb或2.1kbBt.基因的土壤杆菌LBA4404与美洲黑杨叶片共培养。采用30mg/l... 本研究首先建立了美洲黑杨叶片外植体的再生系统,并利用Horsch等人1985年发明的叶盘法,将分别带有嵌合基因NPTII和1.8kb或2.1kbBt.基因的土壤杆菌LBA4404与美洲黑杨叶片共培养。采用30mg/l和50mg/l两种浓度的卡那霉素筛选转化子,约28天左右的时间,有不定芽从外植体切口处形成。两种卡那霉素浓度下共形成275个伸长芽,存活了187株。这187株分别进入卡那霉素30mg/l,50mg/l的生根培养基后,生根率分别为9.62%和8.02%。PCR反应证明部分植株已成功地进行了转化。 展开更多
关键词 美洲黑杨 基因 转化 苏云金杆菌 聚合酶链反应
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木霉分子生物学研究进展 被引量:55
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作者 徐同 《真菌学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期143-148,共6页
木霉Trichoderma spp.是普遍存在并具有重要经济意义的一类真菌。本文试从木霉大分子;基因克隆;转化系统;外源基因表达;在工农业生产中的应用等方面对木霉分子生物学研究进展进行综述。
关键词 真菌 木霉 分子生物学
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耐盐基因Bet-A转化小黑杨的研究 被引量:53
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作者 杨传平 刘桂丰 +1 位作者 梁宏伟 张慧 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第6期34-38,共5页
本研究建立了小黑杨 (Populussimonii×P .nigra)组培再生体系 ,确定小黑杨芽分化最适宜培养基、生根培养基 ,然后进行卡那霉素敏感性试验。以小黑杨无菌苗叶片为转化受体材料 ,通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefacien)介导法将外... 本研究建立了小黑杨 (Populussimonii×P .nigra)组培再生体系 ,确定小黑杨芽分化最适宜培养基、生根培养基 ,然后进行卡那霉素敏感性试验。以小黑杨无菌苗叶片为转化受体材料 ,通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefacien)介导法将外源基因Bet A(编码胆碱脱氢酶 ,催化胆碱生成甘氨酸甜菜碱 )导入小黑杨(P .simonii×P .nigra)。对获得的 11株转化苗进行了PCR扩增检测和斑点杂交检测 ,其中 7株获得了 1 7Kb特异性扩增条带和杂交斑点 ,表现为阳性。从斑点杂交检测的转化苗中选取 3株杂交斑点明亮的转化子进行Southern印迹杂交分析 。 展开更多
关键词 甘氨酸甜菜碱 Bet-A基因 遗传转化 小黑杨 耐盐基因 盐碱地改良
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根癌农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转入苹果主栽品种 被引量:42
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作者 师校欣 王斌 +2 位作者 杜国强 翁曼丽 高仪 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期282-284,共3页
研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动子启动的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (CpTI)转入富士、乔纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中 ,经卡那霉素抗性、PCR、点杂交、Southern杂交检测证... 研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动子启动的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (CpTI)转入富士、乔纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中 ,经卡那霉素抗性、PCR、点杂交、Southern杂交检测证明了 4个品种均获得转化再生植株 。 展开更多
关键词 苹果 抗中性 遗传转化 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
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农杆菌介导的木本植物遗传转化 被引量:33
10
作者 王瑶 林木兰 +1 位作者 沈锡辉 柳晟 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第6期23-27,共5页
 木本植物由于本身的特殊性使其遗传转化较为困难,但根据植物类型及其生长特点,选取不同的受体系统,采用农杆菌介导进行转化,已在多种木本植物上获得成功。本文综述了农杆菌介导的木本植物在转化方法、受体系统和转化机理方面的研...  木本植物由于本身的特殊性使其遗传转化较为困难,但根据植物类型及其生长特点,选取不同的受体系统,采用农杆菌介导进行转化,已在多种木本植物上获得成功。本文综述了农杆菌介导的木本植物在转化方法、受体系统和转化机理方面的研究,对Vir 基因活化、外植体预培养、共培养方法等影响转化的一些因素及存在的问题进行了探讨。 展开更多
关键词 农杆菌 木本植物 基因转化
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植物蔗糖合成酶功能与分子生物学研究进展 被引量:59
11
作者 卢合全 沈法富 +1 位作者 刘凌霄 孙维方 《中国农学通报》 CSCD 2005年第7期34-37,57,共5页
蔗糖合成酶在植物生长发育过程中有着举足轻重的作用。叶片光合产物向“库”器官运输的主要形态是蔗糖,而蔗糖合成酶是蔗糖进入各种代谢途径所必需的关键酶之一。在此,综述了蔗糖合成酶(SuSy)在高等植物蔗糖代谢中的作用,SuSy基因的克... 蔗糖合成酶在植物生长发育过程中有着举足轻重的作用。叶片光合产物向“库”器官运输的主要形态是蔗糖,而蔗糖合成酶是蔗糖进入各种代谢途径所必需的关键酶之一。在此,综述了蔗糖合成酶(SuSy)在高等植物蔗糖代谢中的作用,SuSy基因的克隆、表达调控机理以及SuSy转基因植株的表现;并进一步对蔗糖合成酶的研究作出设想。 展开更多
关键词 蔗糖合成酶 分子生物学 研究进展 生长发育过程 SUSY 转基因植株 光合产物 代谢途径 蔗糖代谢 高等植物 调控机理 关键酶 器官
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黄瓜花叶病毒壳蛋白基因转化辣椒及其在转基因株后代的表达 被引量:35
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作者 张宗江 周钟信 +4 位作者 刘艳军 江倩云 尤明 刘国民 米景九 《华北农学报》 CSCD 北大核心 1994年第3期67-71,共5页
借助二元Ti载体系统,用农杆菌(A.tumefaciens)与子叶外植体共培养,进行黄瓜花叶病毒壳蛋白(CMVcp)基因转化三个辣椒品种的工作。经过抗卡那霉素的筛选和再生培养,得到转基因株。转基因株叶的切片在含卡那霉... 借助二元Ti载体系统,用农杆菌(A.tumefaciens)与子叶外植体共培养,进行黄瓜花叶病毒壳蛋白(CMVcp)基因转化三个辣椒品种的工作。经过抗卡那霉素的筛选和再生培养,得到转基因株。转基因株叶的切片在含卡那霉素的培养基上表现明显的抗性。经过对后代植株的DNA和RNA分子杂交以及蛋白质ELISA检测表明转基因株后代染色体上带有CMVcp基因,后者在叶片中表达出CMVcp。经过对表达植株叶面接种CMV病毒,表现出明显的抗CMV病毒的性能。 展开更多
关键词 辣椒 基因转移 黄瓜花叶病毒
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黑核桃体细胞胚状体发生及其基因转化系统的建立 被引量:31
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作者 方宏筠 王关林 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期406-411,共6页
以我国种植的优良品种黑核桃 (JuglansnigiaL .)幼胚和幼叶为外植体诱导出体细胞胚状体 ,通过根癌农杆菌介导将nptⅡ和gus基因导入体细胞胚 ,同时研究了激素、体细胞胚的发育时期及预培养等对转化率的影响 ,建立了黑核桃体细胞胚基因转... 以我国种植的优良品种黑核桃 (JuglansnigiaL .)幼胚和幼叶为外植体诱导出体细胞胚状体 ,通过根癌农杆菌介导将nptⅡ和gus基因导入体细胞胚 ,同时研究了激素、体细胞胚的发育时期及预培养等对转化率的影响 ,建立了黑核桃体细胞胚基因转化系统 ,还分析了体细胞胚胎转化系统的特点和潜力。 展开更多
关键词 黑核桃 体细胞胚 GUS基因 基因转化
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影响农杆菌介导的大豆基因转化因素的研究 被引量:35
14
作者 赵桂兰 刘艳芝 +3 位作者 李俊波 徐洪志 刘莉 尹爱平 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期84-88,共5页
通过农杆菌介导法用含NPT -Ⅱ和Barnase基因导入到大豆幼胚 ,大豆子叶节中 ,然后经过含Kan的筛选培养基中连续筛选 ,获得一批Barnase转基因植株。经PCR扩增结果 ,证实此基因已整合到大豆中 ,在当代植株中生物学特性观察。花粉粒不育率在... 通过农杆菌介导法用含NPT -Ⅱ和Barnase基因导入到大豆幼胚 ,大豆子叶节中 ,然后经过含Kan的筛选培养基中连续筛选 ,获得一批Barnase转基因植株。经PCR扩增结果 ,证实此基因已整合到大豆中 ,在当代植株中生物学特性观察。花粉粒不育率在 98%。 展开更多
关键词 大豆 农杆菌介导法 Barnase基因 基因转化 雄性不育 基因型 选择压
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超强表达豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)转化苹果的研究 被引量:27
15
作者 达克东 崔德才 +3 位作者 张松 金德敏 王斌 束怀瑞 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期57-58,I001,共3页
通过农杆菌介导法将超强表达载体PECp中的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI转入了苹果品种‘嘎拉’。
关键词 苹果 CPTI 超强启动子 基因转化
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苏云金芽孢杆菌(Bt)晶体毒蛋白基因在烟草叶绿体中的表达 被引量:27
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作者 张中林 任延国 +5 位作者 沈燕新 山松 范国昌 吴祥甫 钱凯先 沈桂芳 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第3期270-277,共8页
将全长3.5kb的Bt基因3'端缺失,得到长为2.1kb、1.8kb的基因。分别将这3个长度 (1.8kb2.1kb、3.5kb)的基因置于水稻叶绿体psbA基因的启动于和终止子调控之下,并与选择 标记基因aadA... 将全长3.5kb的Bt基因3'端缺失,得到长为2.1kb、1.8kb的基因。分别将这3个长度 (1.8kb2.1kb、3.5kb)的基因置于水稻叶绿体psbA基因的启动于和终止子调控之下,并与选择 标记基因aadA(编码氨基糖苷-3'-腺苷酸转移酶,具壮观霉素抗性)表达盒相连5以烟草叶绿 体基因trnH-psbA-trnK为同源片段,构建成叶绿体转化载体pBT3、pBT8和pBT22。用基因枪 把Bt基因导入烟草叶绿体中,以壮观霉素筛选,获得转化再生植株。经Southern、Western检测 分析证明Bt基因已整合进入烟草叶绿体基因组中并得到表达。且子代呈现壮观霉素抗性,即 外源基因得到稳定的遗传。利用转基因植株叶片对棉铃虫进行杀虫实验,有些转化植株表现 出较强的抗虫性。总体上来说,转Bt全长基因的烟草植株,其杀虫效果最好,其余两种差异不 大。首次报道将Bt基因成功转入高等植物叶绿体并获得表达。 展开更多
关键词 BT基因 叶绿体 烟草 表达 苏云金芽孢杆菌
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拟南芥基因转移新方法一真空渗入法的研究 被引量:25
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作者 巩振辉 何玉科 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期277-283,共7页
以拟南芥(Arabidopsisthaliana)生态型Landsbengerecta为试材,在含有所构建的CaMVBari-1株系基因VI的质粒(pJO530Bari-1GVI)的根癌农杆菌(Agrobacteri... 以拟南芥(Arabidopsisthaliana)生态型Landsbengerecta为试材,在含有所构建的CaMVBari-1株系基因VI的质粒(pJO530Bari-1GVI)的根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)菌种GV3101的介导下,研究了基因转移的新方法一真空渗入法。这种方法简便、快速、可靠且无需经过组织培养阶段即可获得大量转化植株。适宜的转化条件是将生长健壮,除去主苔后4-8d的成株连同营养钵倒置浸入被渗入培养基稀释的农杆菌孢子悬浮液,其光密度为0.8,在吸力为1.7m2/h的真空泵下断续处理2min/30s,置于24h连续光照下的气候室培养,待种子收获后在含有潮霉素的选择培养基选择转化植株.PCR分析及ELISA检测,该方法的转化效果高达0.71%。 展开更多
关键词 拟南芥 基因转移 真空渗入法 方法技术
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玉米基因转化的离体子房注射及其转基因植株的鉴定 被引量:27
18
作者 沈世华 张秀君 +1 位作者 郭奕明 荆玉祥 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第10期1055-1057,共3页
用微量注射法对玉米 (ZeamaysL .)进行基因转化已获得成功 ,但这种方法是在田间进行的 ,污染较大 ,操作时劳动强度大 ,转化率低 ,而且受气温影响 ,气温下降则种子不能成熟。采用离体注射培养法 ,取下授粉 2 4h后的玉米雌穗 ,剥去苞叶 ,... 用微量注射法对玉米 (ZeamaysL .)进行基因转化已获得成功 ,但这种方法是在田间进行的 ,污染较大 ,操作时劳动强度大 ,转化率低 ,而且受气温影响 ,气温下降则种子不能成熟。采用离体注射培养法 ,取下授粉 2 4h后的玉米雌穗 ,剥去苞叶 ,在超净工作台进行微量注射 ,然后切成小块放在培养瓶中 ,在光照培养箱内培养 ,3~ 4周可直接获得种子。这种方法克服了非离体培养的缺点 ,提高了转化效率。种子萌发后进行植株抗性筛选和分子检测 ,得到了具抗性的、PCR和Southern杂交结果均为阳性的转基因植株。 展开更多
关键词 玉米 基因转化 离体子房注射 基因鉴定
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柑桔基因转化新方法的研究 被引量:24
19
作者 李卫 陈亮 +1 位作者 蔡得田 杨官品 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1997年第8期782-784,共3页
尽管应用基因转化进行果树品种改良已日益引起重视,但是在受体的应用和转化方法上还存在着诸多困难。一方面,大多数果树尚不能从细胞或原生质体再生成完整植株,即使少数已可以再生的果树树种,也并非众多品种都能再生成功,而是存在着明... 尽管应用基因转化进行果树品种改良已日益引起重视,但是在受体的应用和转化方法上还存在着诸多困难。一方面,大多数果树尚不能从细胞或原生质体再生成完整植株,即使少数已可以再生的果树树种,也并非众多品种都能再生成功,而是存在着明显的基因型差异性。同时,还有再生植株童期过长的问题。另一方面,目前在植物基因转化中常用的两种方法即DNA直接吸入法和农杆菌介导的载体法,若以细胞或原生质体为受体,不仅存在再生困难的问题,而且再生过程费时长;若以叶盘、愈伤组织或珠心组织等为受体,既需要在转化后除去农杆菌,又需要排除转化与非转化组织的嵌合性。这些因素都大大地限制了基因转化在果树中的应用。因此,根据多年生果树的生长特点,建立一种适用的基因转化技术已成当务之急。本文采用农杆菌介导的附体腋芽转化-离体扩繁鉴定的方法,成功地将GUS基因转入沙田柚。结果证明这是一种简单、快速、高效的基因转化方法。 展开更多
关键词 柑桔 基因转化 基因工程
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头孢霉素类抗生素在转基因烟草中作用的初步研究 被引量:35
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作者 康杰芳 王喆之 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第1期60-63,共4页
研究了头孢曲松钠、头孢哌酮钠、头孢西林钠、头孢唑林钠、头孢拉定5种头孢霉素类抗生素对农杆菌EHA105的抑制作用和对烟草愈伤组织的诱导及丛生芽形成的影响,结果表明:5种头孢类抗生素在作为抑菌剂用于烟草遗传转化试验时,头孢曲松钠... 研究了头孢曲松钠、头孢哌酮钠、头孢西林钠、头孢唑林钠、头孢拉定5种头孢霉素类抗生素对农杆菌EHA105的抑制作用和对烟草愈伤组织的诱导及丛生芽形成的影响,结果表明:5种头孢类抗生素在作为抑菌剂用于烟草遗传转化试验时,头孢曲松钠的抑菌效果最好,浓度以200mg/L为宜,同时该抗生素在低浓度下能提高愈伤组织诱导率和丛生芽诱导率,在高浓度下则抑制愈伤组织和芽的形成,有类似植物激素的活性。 展开更多
关键词 头孢霉素类抗生素 转基因烟草 作用 农杆菌 基因转化
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