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我国云南德宏地区HIV感染者HIV毒株膜蛋白基因的序列测定和分析 被引量:51
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作者 邵一鸣 赵全壁 +6 位作者 王斌 陈筝 苏玲 曾毅 赵尚德 张家鹏 段一娟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期291-299,共9页
1990年和1993年,从云南瑞丽县感染HIV的静脉注射毒品者中采血,分离白细胞,用PCR方法扩增HIV1膜蛋白基因(env)并克隆。核苷酸序列分析由手工和ABI公司DNA序列分析仪进行。将云南瑞丽HIV毒株的env... 1990年和1993年,从云南瑞丽县感染HIV的静脉注射毒品者中采血,分离白细胞,用PCR方法扩增HIV1膜蛋白基因(env)并克隆。核苷酸序列分析由手工和ABI公司DNA序列分析仪进行。将云南瑞丽HIV毒株的envV3-V5区序列与国际各亚型同源序列作比较,90年和93年HIV毒株与B亚型的同源性均为最高。这表明云南瑞丽流行的HIV毒株属国际B亚型。经分析发现,在90年的10个毒株的序列中,有8个是典型的B亚型序列,即V3环顶端的四肽是GPGR,占80%;而在93年的毒株中,该型序列只见于21个样品中的12个,比例下降到57%。与此同时,V3环顶端四肽为GPGQ的B亚型中的泰国基因型序列,则由90年的10%(1/10)上升到93年的29%(6/21)。进一步分析编码GPGR最末一个精氨酸密码子发现,CGA与AGA比例由90年的1:7上升到93年的5:7。由于CGA比AGA更接近编码谷氨酰胺(Q)密码子CAA,这种以GPGQ为特征的泰国基因型B亚型毒株,在该地区还可能进一步增高。这些数据提示,当地流行的HIV毒株V3环顶端的四肽在过去几年中由GPGR向GPGQ漂移,其原因尚不清楚。 展开更多
关键词 艾滋病毒 感染 毒株 膜蛋白基因 序列测定
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中国耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变特点 被引量:44
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作者 黄海荣 金奇 +3 位作者 马玙 陈曦 李惠文 庄玉辉 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期231-235,共5页
目的 为了阐明中国结核分支杆菌耐利福平株rpoB基因突变特点。方法 对 2 42株结核分支杆菌临床分离株包括rpoB基因核心区域 81个碱基在内的 5 88个碱基进行序列测定 ,其中耐利福平株 193株 ,利福平敏感株 46株 ,人工诱导的耐利福平株 ... 目的 为了阐明中国结核分支杆菌耐利福平株rpoB基因突变特点。方法 对 2 42株结核分支杆菌临床分离株包括rpoB基因核心区域 81个碱基在内的 5 88个碱基进行序列测定 ,其中耐利福平株 193株 ,利福平敏感株 46株 ,人工诱导的耐利福平株 3株。结果  89 1% (172 / 193)的临床分离耐药株存在rpoB基因突变 ,而 46株敏感株无突变。 5 31位氨基酸突变率为 46 1% ;5 2 6位氨基酸突变率为 17 1% ;联合突变发生率为 12 4% ;还有 4株细菌发生同义突变 ;未检测到发生缺失或插入突变的菌株。高耐药组 (耐 2 5 0 μg/ml利福平 ) 5 31位氨基酸的突变率显著高于低耐药组 (耐 5 0 μg/ml利福平 ) ,P <0 0 5。结论 中国结核分支杆菌耐利福平株的rpoB基因突变的发生率约为 90 % ,其中最常见的突变位点是 5 31位丝氨酸和 5 2 6位组氨酸 ,两者突变率之和约为 6 3 % ;利福平高耐药组 5 31位氨基酸发生突变的几率高于低耐药组 ;受试菌株未发现插入或缺失突变 ; 展开更多
关键词 结核分支杆菌 利福利 药物耐受性 ropB基因 DNA序列分析
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绿色木霉纤维素酶CBHⅡ基因的结构研究 被引量:25
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作者 王建荣 张曼夫 黄涛 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1995年第1期74-80,共7页
实验经限制性酶切和双向Southern杂交将重组质粒pCBHII-14的14kb外源片段上的绿色木霉纤维素酶CBHII基因定位于4.4kb的EcoRI片段上,将该片段克隆于质粒pUC19,获得重组质粒pCBHII。通... 实验经限制性酶切和双向Southern杂交将重组质粒pCBHII-14的14kb外源片段上的绿色木霉纤维素酶CBHII基因定位于4.4kb的EcoRI片段上,将该片段克隆于质粒pUC19,获得重组质粒pCBHII。通过限制性分析构建了pCBHII上4.4kbEcoRI片段的物理图谱。在此基础上用质粒制作该片段的亚克隆,采用Sanger双脱氧链终止法测定了含绿色木霉纤维素酶CBHII基因的4074bp的DNA序列,由GT-AG规则和cDNA序列推知该结构基因由4个外显子和3个内含子组成,总长1613bp,5′端存在与一般真核基因类似的两个特征性调控序列,但3′端不存在真核基因通常具有的特征序列而存在功能未明的短重复序列和嘧啶富集区。并对纤维素酶基因间的同源性和可能的功能作了初步的探讨。 展开更多
关键词 纤维素酶 木霉 基因 序列分析
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禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)全基因克隆及序列分析 被引量:32
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作者 张建林 于康震 +2 位作者 陈化兰 唐秀英 田国斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第3期232-235,共4页
本研究用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) (GD1/96 ) ,提取病毒基因组总RNA ,运用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术分别扩增该病毒分离株的 8个基因片段的cDNA ,分别克隆后进行序列测定... 本研究用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) (GD1/96 ) ,提取病毒基因组总RNA ,运用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术分别扩增该病毒分离株的 8个基因片段的cDNA ,分别克隆后进行序列测定。序列分析结果表明 ,所扩增到的 8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架。GD1/96株与 1997年香港禽流感事件中的 4株香港流感病毒分离株 (分别来自人、鸡、鸭和鹅 )的HA基因的高度同源性说明它们可能起源于同一种系 ,但NS基因的差异说明它们分属于不同的基因群系。GD1/96株与香港流感病毒分离株的核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性较低 ( 6 3.9%~ 98.1%) ,而香港流感病毒分离株之间的核苷酸和氨基酸序列的同源性很高 ( 96 .5 %~ 10 0 %) ,且香港各流感病毒分离株的NA均缺失 5 7个核苷酸 ( 19个氨基酸 )残基。因此 ,内地H5N1分离株GD1/96与 展开更多
关键词 禽流感病毒 分离株 全基因克隆 序列分析
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三七及其伪品的DNA测序鉴别 被引量:38
5
作者 曹晖 刘玉萍 +1 位作者 伏见裕利 小松かつ子 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期398-402,共5页
目的:分析三七Panax notoginseng及其伪品竹节参P.japonicus、蓬莪术Curcuma phaeocaulis、温莪术C.wenyujin、桂莪术C.kwangsiensis的核基因和叶绿体基因序列,为三七的正品药材基原鉴定提供分子依据。方法:采用PCR直接测序技术测定三... 目的:分析三七Panax notoginseng及其伪品竹节参P.japonicus、蓬莪术Curcuma phaeocaulis、温莪术C.wenyujin、桂莪术C.kwangsiensis的核基因和叶绿体基因序列,为三七的正品药材基原鉴定提供分子依据。方法:采用PCR直接测序技术测定三七及其4种伪品的18S rRNA基因和matK基因核苷酸序列并作序列变异分析。结果:三七和竹节参的18S rRNA基因序列长度相同,均为1809 bp;matK基因长度亦相同,为1259 bp。蓬莪术、温莪术和桂莪术18S rRNA基因长度均为1811 bp、matK均为1548bp。根据排序比较,三七与4种伪品间的DNA序列存在很大差别。结论:通过序列差异比较分析,DNA测序技术可成为三七正品基原鉴定的准确、有效手段。 展开更多
关键词 三七 莪术 伪品 MATK基因 基原 RRNA基因 正品 竹节参 核基因 技术测定
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中日产川芎的matK、ITS基因序列及其物种间的亲缘关系 被引量:32
6
作者 刘玉萍 曹晖 +2 位作者 韩桂茹 伏见裕利 小松かつ子 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期63-68,共6页
目的 分析中国产川芎LigusticumchuanxiongHort.及日本产川芎CnidiumofficinaleMakino的核基因组ITS和叶绿体基因组matK序列 ,为探讨中日产川芎物种间的亲缘关系提供分子依据。方法 采用PCR直接测序技术测定川芎和日本川芎的ITS基因和... 目的 分析中国产川芎LigusticumchuanxiongHort.及日本产川芎CnidiumofficinaleMakino的核基因组ITS和叶绿体基因组matK序列 ,为探讨中日产川芎物种间的亲缘关系提供分子依据。方法 采用PCR直接测序技术测定川芎和日本川芎的ITS基因和matK基因核苷酸序列并作序列变异分析。结果 川芎和日本川芎的matK序列长度均为 12 68bp ,编码 4 2 2个氨基酸。ITS1 5 8S ITS2序列长度均为 699bp ,其中 18SrRNA基因 3′端序列 5 4bp ,ITS1序列 2 15bp ,5 8SrRNA基因序列 162bp ,ITS2序列 2 2 2bp ,2 6SrRNA基因 5′端序列 4 6bp。根据排序比较 ,川芎原植物与其商品药材间的matK基因和ITS基因序列完全相同 ,而川芎与日本川芎间matK基因则仅有 1个变异位点 ,即在上游 95 9nt处 1个转换替代 (T→C) ,反映在氨基酸序列则发生一个非同义取代V(GTG)→A(GCG) ;ITS基因也仅有 1个变异位点 ,即在ITS1上游 5 4nt处 1个转换替代 (T→C)。结论 通过进化速率较快的基因序列同源性分析 ,基本可以认为中日所产川芎基原一致 ,日本川芎学名似应改为LigusticumchuanxiongHort. 展开更多
关键词 川芎 日本川芎 MATK基因 ITS基因 核苷酸测序
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基因芯片及其在医学研究中的意义 被引量:26
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作者 张天宝 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期91-94,98,共5页
关键词 基因芯片 基因表达 DNA 测序
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2012-2013年新流行猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及其gE、TK、gD基因序列分析 被引量:37
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作者 余秋颖 常洪涛 +6 位作者 陈文定 陈陆 明星 郑关民 张玉娟 韩莎 王川庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1573-1578,1583,共7页
2012年伊始,猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)在河南省部分地区再次暴发。为探寻其中缘由,对2012年3月至2013年6月间采集的疑似PR病料接种Vero细胞并经PCR鉴定,分离到4株伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)。同时对该4株病毒的gE、TK和g... 2012年伊始,猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)在河南省部分地区再次暴发。为探寻其中缘由,对2012年3月至2013年6月间采集的疑似PR病料接种Vero细胞并经PCR鉴定,分离到4株伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)。同时对该4株病毒的gE、TK和gD基因进行PCR扩增、克隆、测序及分析。序列分析显示:4株PRV河南分离株的gE、TK、gD基因有些核苷酸及氨基酸发生变化,不同于参考毒株;遗传进化分析显示:4株PRV河南分离株形成单独1个小亚群,与中国其他地区分离株之间的亲缘关系较近,与欧洲、南美洲分离株之间的亲缘关系较远,推测此4株河南分离毒株是新型国内流行株。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 分离鉴定 gE、TK、gD基因 序列分析
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中国人群中Del表型分子背景研究 被引量:31
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作者 李勤 叶璐夷 +2 位作者 郭忠慧 钱旻 朱自严 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期486-491,共6页
目的研究Del表型的分子基础,并探寻新的Del等位基因。方法 515名经血清学方法确定的RhD阴性血样用吸收放散试验筛选并确认Del表型。Del的基因组DNA通过多重PCR(multiplex poly-merase chain reaction,MPX PCR)检测RHD基因;用序列特异性... 目的研究Del表型的分子基础,并探寻新的Del等位基因。方法 515名经血清学方法确定的RhD阴性血样用吸收放散试验筛选并确认Del表型。Del的基因组DNA通过多重PCR(multiplex poly-merase chain reaction,MPX PCR)检测RHD基因;用序列特异性引物PCR(sequence-specific primer-polymerase chainreaction,PCR-SSP)检测Del等位基因:RHD(K409K)和RHD(M295I)。经PCR-SSP筛选,结果为阴性的样品通过基因组DNA测序及cDNA测序分析其分子背景。结果吸收放散试验共检出Del 79名。经多重PCR检测,79份样品均带有RHD第3、4、5、6、7、9特异性外显子。PCR-SSP结果显示,75名Del具有RHD(K409K)等位基因,无Del样品带有RHD(M295I)等位基因。经测序发现4名新RHD等位基因:RHD3G→A(GenBank DQ310735) ,RHD28C→T,RHD53T→C(GenBank DQ451877、DQ451878) ,RHD251T→C(GenBank DQ310734)。结论 Rh血型系统非常复杂,新的D变异表型和新的RHD等位基因可能被不断发现。 展开更多
关键词 RHD基因 DEL表型 遗传多态性 等位基因 测序
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百合查尔酮合成酶(CHS)基因的克隆与分析 被引量:28
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作者 杨丽 刘雅莉 +1 位作者 王跃进 徐伟荣 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期933-936,共4页
以东方百合“索邦”基因组DNA为模板进行PCR扩增,将得到的目的片段克隆至pGEM-T easy载体后进行测序.结果表明,目的序列全长1 307 bp,经BLA ST分析,与鸢尾、玉米、水稻等植物的查尔酮合成酶(CHS)基因核苷酸同源性在70%以上;与已经克隆的... 以东方百合“索邦”基因组DNA为模板进行PCR扩增,将得到的目的片段克隆至pGEM-T easy载体后进行测序.结果表明,目的序列全长1 307 bp,经BLA ST分析,与鸢尾、玉米、水稻等植物的查尔酮合成酶(CHS)基因核苷酸同源性在70%以上;与已经克隆的CHS cDNA序列相比,CHS DNA序列中包含2个外显子和1个内含子,内含子全长82 bp,符合TG-AG特征.将得到的序列提交G enB ank,序列号为DQ 471951. 展开更多
关键词 百合 CHS 基因克隆 序列分析
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基因诊断中测序技术的应用及优缺点 被引量:32
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作者 郭奕斌 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1121-1130,共10页
基因突变是当今生命科学研究的热点之一,其检测方法和诊断技术发展迅猛.测序技术在基因病的确诊、分型等方面发挥着不可或缺的作用.文章重点围绕第一~三代测序技术的研究进展、优缺点及其在基因诊断中的应用进行评述,并对未来的发展趋... 基因突变是当今生命科学研究的热点之一,其检测方法和诊断技术发展迅猛.测序技术在基因病的确诊、分型等方面发挥着不可或缺的作用.文章重点围绕第一~三代测序技术的研究进展、优缺点及其在基因诊断中的应用进行评述,并对未来的发展趋势进行了预测和展望. 展开更多
关键词 基因病 基因诊断 测序技术 研究进展
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k-ras基因在中国结直肠癌患者中的突变状态 被引量:30
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作者 刘伟 王丽 +5 位作者 余英豪 王旭洲 武一曼 吴在增 欧阳学农 王烈 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2011年第13期1367-1374,共8页
目的:评价中国结直肠癌患者中k-ras基因突变状态及其与临床病理参数的关系.方法:收集2008-01/2009-12在中国人民解放军南京军区福州总医院手术切除的临床资料完整的结直肠癌石蜡包埋组织280例,分别应用实时荧光定量PCR和直接测序法检测... 目的:评价中国结直肠癌患者中k-ras基因突变状态及其与临床病理参数的关系.方法:收集2008-01/2009-12在中国人民解放军南京军区福州总医院手术切除的临床资料完整的结直肠癌石蜡包埋组织280例,分别应用实时荧光定量PCR和直接测序法检测结直肠癌中k-ras基因外显子2中第12、13编码子上最常见的7种突变类型,即第12编码子的35G>A、35G>T、35G>C、34G>A、34G>T、34G>C及第13编码子的38G>A,同时将两种检测结果进行比对分析.结果:(1)经直接基因测序,确认在280例结直肠癌中,k-ras基因测序阳性(基因突变型)94例,阳性率33.57%(94/280),其中第12编码子的35G>A、35G>T、35G>C、34G>A、34G>T及34G>C的突变率分别为14.64%(41/280)、4.29%(12/280)、0.36%(1/280)、2.86%(8/280)、3.57%(10/280)、0.36%(1/280),第13编码子的38G>A的突变率为7.5%(21/280);(2)94例k-ras基因测序阳性(基因突变型)病例中,实时荧光定量PCR阳性91例[灵敏度96.8%(91/94)],阴性3例;186例基因测序阴性(野生型)中,实时荧光定量PCR阴性184例[特异性98.9%(184/186)],阳性2例;实时荧光定量PCR法与直接基因测序法符合率为98.2%[(91+184)/280];(3)k-ras基因突变与患者性别、年龄相关(均P<0.05),而与肿瘤部位、分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移无相关性(均P>0.05).结论:(1)中国结直肠癌患者中存在较大比例的k-ras基因突变(33.57%),在临床选取表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR单抗靶向药物治疗结直肠癌患者之前均应常规检测k-ras基因突变状态,从而为靶向治疗提供可靠的参考依据;(2)实时荧光定量PCR检测结果与基因测序检测结果高度一致,实时荧光定量PCR能够准确、快速、简便的检测出结直肠癌k-ras基因突变位点,可用于结直肠癌k-ras基因突变的检测;(3)k-ras基因突变与结直肠癌的生物学行为无明显相关性,但在≥60岁的女性人群中k-ras基因突变率较高 展开更多
关键词 结直肠癌 K-RAS基因 基因突变 直接基因测序法 实时荧光定量PCR 靶向治疗 临床病理参数
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禽流感病毒KMI/99(H9N2)HA和NA基因的序列分析 被引量:22
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作者 郭霄峰 廖明 辛朝安 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期486-491,共6页
研究分别以自行设计的一对简并引物和另一对普通引物 ,经RT PCR ,一次性成功地扩增禽流感病毒A/Chicken/Guangxi/KMI/99(H9N2 )HA全长基因cDNA和NA全长基因cDNA ,并将它们克隆于 pGEM TEasy的T T窗口。首次报道了该毒株的HA全基因和NA... 研究分别以自行设计的一对简并引物和另一对普通引物 ,经RT PCR ,一次性成功地扩增禽流感病毒A/Chicken/Guangxi/KMI/99(H9N2 )HA全长基因cDNA和NA全长基因cDNA ,并将它们克隆于 pGEM TEasy的T T窗口。首次报道了该毒株的HA全基因和NA全基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列。测序结果显示 ,该毒株的HA基因全长为 16 83bp ,编码 5 6 0个氨基酸。NA全长为 1398bp ,编码 46 6个氨基酸残基。研究发现其HAI羧基端的分子特征是 :R S S R。从分子水平推论 :A/Chicken/Guangxi/KMI/99(H9N2 )属于非高致病力毒株。研究还发现NA蛋白于 6 3— 6 5位缺失了T、E、I三个氨基酸。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 HA基因 NA基因 序列分析
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产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因的克隆与核苷酸序列分析 被引量:25
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作者 许崇波 朱平 +4 位作者 姚湘燕 王卓 冯书章 马从林 孟锐奇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期140-143,共4页
将含产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒pKMA100用限制性核酸内切酶BamHI和HindⅢ双酶切,经1.5%琼脂糖凝胶电泳分离、透析袋电洗脱法回收0.95kbα毒素基因片段,再将载体pET-28b(+)用BamHI和Hi... 将含产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒pKMA100用限制性核酸内切酶BamHI和HindⅢ双酶切,经1.5%琼脂糖凝胶电泳分离、透析袋电洗脱法回收0.95kbα毒素基因片段,再将载体pET-28b(+)用BamHI和HindⅢ双酶切,然后将处理好的pET-28b(+)与0.95kb的α毒素基因片段通过T4DNA连接酶进行粘性末端连接,转化至受体菌BL21(DE3)中。经BamHI和HindⅢ双酶切分析和核苷酸序列分析,证明重组质粒pXETA1含有产气荚膜梭菌α毒素基因。确定了α毒素基因的全部核苷酸序列,并证明其具有正确的阅读框架。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素基因 基因克隆 核苷酸序列
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中国人群中发现的主要弱D型——弱D15个体的分子背景研究 被引量:27
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作者 孙国栋 段现民 +5 位作者 张彦平 尹志柱 牛小利 李艳凤 赵有良 牛海江 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期1024-1028,共5页
为了探讨中国汉族人群弱D15型个体的Rh血型系统血型血清学表型及分子背景,采用常规血型血清学技术检测RhD抗原弱阳性个体RhD、C、c、E、e抗原表型;采用序列特异性引物-聚合酶链反应(SSP-PCR)方法同时检测RHD基因和RHCE基因;标本测序分析... 为了探讨中国汉族人群弱D15型个体的Rh血型系统血型血清学表型及分子背景,采用常规血型血清学技术检测RhD抗原弱阳性个体RhD、C、c、E、e抗原表型;采用序列特异性引物-聚合酶链反应(SSP-PCR)方法同时检测RHD基因和RHCE基因;标本测序分析RHD基因全长编码区序列;同时通过特异性PCR技术测定RHD合子型或RHD基因数目。结果表明,血型血清学试验证实为D抗原弱阳性表型的人群中,有18例为弱D15型(占D抗原弱阳性表型56%),RHD基因全长编码区序列分析发现其第6外显子有一处碱基突变:845G>A,编码区序列其它部分与正常RHD序列相同;检测Rh小因子有3种表型CcEe(2例)、CcEe(2例)、ccEe(14例),分别占弱D15型的11%、11%、78%,血清学检测结果与分子生物学检测结果一致。RHD杂合性试验鉴定显示仅表型为CcEe的2例标本为纯合型RHD+/RHD+,提示基因型为DCe/DcE;其余为杂合型RHD+/RHD-,提示基因型分别是DCe/dce和DcE/dce。结论:弱D15型是中国人群中最主要的弱D型,其中大部分为杂合型。 展开更多
关键词 弱D型 弱D15 RHD基因 RHCE基因 基因突变 序列分析
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稻纵卷叶螟肠道细菌群落结构与多样性分析 被引量:30
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作者 刘小改 杨亚军 +3 位作者 廖秋菊 徐红星 刘映红 吕仲贤 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期965-976,共12页
【目的】为明确水稻主要害虫稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis(Guenée)幼虫肠道细菌的群落结构和多样性。【方法】利用Illumina Mi Seq技术对稻纵卷叶螟4龄幼虫肠道细菌的16S r DNA V3-V4变异区序列进行测序,应用USEARCH和QI... 【目的】为明确水稻主要害虫稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis(Guenée)幼虫肠道细菌的群落结构和多样性。【方法】利用Illumina Mi Seq技术对稻纵卷叶螟4龄幼虫肠道细菌的16S r DNA V3-V4变异区序列进行测序,应用USEARCH和QIIME软件整理和统计样品序列数和操作分类单元(operational taxonomic unit,OTU)数量,分析4龄幼虫肠道细菌的物种组成、丰度和多样性。【结果】稻纵卷叶螟4个数量不同的4龄幼虫样本(1,2,3和5头)共得165 386条reads,在97%相似度下可将其聚类为604个OTUs。总共注释到22个门,43个纲,82个目,142个科,204个属,244个种。其中在门水平上,主要优势菌为变形菌门(Proteobacteria)(相对丰度26%~34%)和放线菌门(Actinobacteria)(23%~32%);在纲水平上,主要优势菌为放线菌纲(Actinobacteria)(相对丰度23%~32%)、酸杆菌纲(Acidobacteria)(9%~11%)、α-变形菌纲(Alphaproteobacteria)(10%~13%)、β-变形菌纲(Betaproteobacteria)(6%~8%)和γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria)(6%~12%);在科水平上,共有优势菌为类诺卡氏菌科(Nocardioidaceae)、丛毛单胞菌科(Comamonadaceae)、黄单胞菌科(Xanthomonadaceae)、鞘脂单胞菌科(Sphingomonadaceae)和芽单胞菌科(Gemmatimonadaceae)等。在属水平上,4个样本前5位优势属中,类诺卡氏属Nocardioides和鞘脂单胞菌Sphingomonas为共有优势属。稻纵卷叶螟肠道细菌Simpson指数、Shannon指数、Ace指数和Chao指数分别为0.16~0.65,0.94~3.22,212~488和210~490。【结论】稻纵卷叶螟幼虫肠道细菌多样性比较丰富,个体间微生物群落结构和多样性有差异。不同数量样本数据与总体数据有助于综合反映稻纵卷叶螟种群肠道微生物状况。本研究结果为进一步研究稻纵卷叶螟肠道微生物的功能及其在防治中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 稻纵卷叶螟 肠道细菌 多样性 16S RDNA 基因测序
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PCR-SSCP-DNA sequencing method in detecting PTEN gene mutation and its signifi cance in human gastric cancer 被引量:26
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作者 Chuan-Yong Guo Xuan-Fu Xu Jian-Ye Wu Shu-Fang Liu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第24期3804-3811,共8页
AIM: To discuss the possible effect of PTEN gene mutations on occurrence and development of gastric cancer. METHODS: Fifty-three gastric cancer specimens were selected to probe PTEN gene mutations in genome of gastric... AIM: To discuss the possible effect of PTEN gene mutations on occurrence and development of gastric cancer. METHODS: Fifty-three gastric cancer specimens were selected to probe PTEN gene mutations in genome of gastric cancer and paracancerous tissues using PCR-SSCP-DNA sequencing method based on microdissection and to observe the protein expression by immunohistochemistry technique. RESULTS: PCR-SSCP-DNA sequencing indicated that 4 kinds of mutation sites were found in 5 of 53 gastric cancer specimens. One kind of mutation was found in exons. AA-TCC mutation was located at 40bp upstream of 3’ lateral exon 7 (115946 AA-TCC). Such mutations led to terminator formation in the 297th codon of the PTEN gene. The other 3 kinds of mutation were found in introns,including a G-C point mutation at 91 bp upstream of 5’ lateral exon 5(90896 G-C),a T-G point mutation at 24 bp upstream of 5’ lateral exon 5 (90963 T-G),and a single base A mutation at 7 bp upstream of 5’ lateral exon 5 (90980 A del). The PTEN protein expression in gastric cancer and paracancerous tissues detected using immunohistochemistry technique indicated that the total positive rate of PTEN protein expression was 66% in gastric cancer tissue,which was significantly lower than that (100%) in paracancerous tissues (P < 0.005). CONCLUSION: PTEN gene mutation and expression may play an important role in the occurrence and development of gastric cancer. 展开更多
关键词 Gastric cancer PTEN gene PCR-SSCP DNA sequencing MUTATION
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鹅α和γ干扰素基因的克隆及序列分析 被引量:18
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作者 秘晶玮 王君伟 +1 位作者 许丽娜 李洪涛 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期359-362,共4页
从植物血凝素(PHA)刺激的鹅外周血白细胞提取总RNA,采用RT_PCR方法扩增鹅IFN基因,将其克隆到pMD18_T载体中,进行序列分析。克隆到的鹅IFN_α和IFN_γ基因与GeneBank上已公布的鸭IFN核苷酸序列进行比较,其同源性分别为IFN_α96.70%I、FN_... 从植物血凝素(PHA)刺激的鹅外周血白细胞提取总RNA,采用RT_PCR方法扩增鹅IFN基因,将其克隆到pMD18_T载体中,进行序列分析。克隆到的鹅IFN_α和IFN_γ基因与GeneBank上已公布的鸭IFN核苷酸序列进行比较,其同源性分别为IFN_α96.70%I、FN_γ94.95%;氨基酸序列同源性分别为IFN_α93.72%I、FN_γ93.29%。这为进一步研究鹅干扰素的生物学特性和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 干扰素(IFN) 基因-克隆 序列分析
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枯草芽孢杆菌渗透压调节基因proB的克隆和表达 被引量:20
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作者 张小青 曹军卫 +1 位作者 翟超 陈建军 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期163-168,共6页
用PCR扩增的方法从耐盐的枯草杆菌中克隆出一个 1 3kb长的DNA片段 ,经功能检测 ,证明正向插入片段与大肠杆菌的脯氨酸营养缺陷特性 (proB- )能够营养互补。含有该重组质粒的大肠杆菌DH5α在基本培养基上的耐盐能力从 2 %提高至 4%。通... 用PCR扩增的方法从耐盐的枯草杆菌中克隆出一个 1 3kb长的DNA片段 ,经功能检测 ,证明正向插入片段与大肠杆菌的脯氨酸营养缺陷特性 (proB- )能够营养互补。含有该重组质粒的大肠杆菌DH5α在基本培养基上的耐盐能力从 2 %提高至 4%。通过引物步行法测定了该插入片段的核苷酸序列。利用DNAsis软件进行序列分析发现 ,该片段第 1 2 2~ 1 2 3 5bp核苷酸编码一个由 3 70个氨基酸组成的蛋白质分子 ,其上游存在非典型的 - 1 0区 ,典型的 -3 5区和核糖体结合位点 ,起始密码子处有最佳翻译起始效率的侧翼核苷酸序列。将其与Genebank中的已知基因的序列和编码的氨基酸序列进行同源性比较 ,结果表明该片段与枯草杆菌 1 6 8的核苷酸序列、氨基酸序列的同源性分别为 81 %和 90 %。证明该基因确实是一个proB基因。通过与三十个不同种属微芽生物proB基因的氨基酸序列比较 。 展开更多
关键词 耐盐枯草芽孢杆菌 proB基因 克隆 序列分析 表达 渗透压调节基因
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转录组平台技术及其在代谢工程中的应用 被引量:23
20
作者 史硕博 陈涛 赵学明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1187-1198,共12页
组学技术在系统水平上对细胞代谢进行全面的分析,极大地促进了代谢工程的发展和应用。全基因组水平的转录分析可以使研究者更加精确地评估细胞表型,加深对细胞代谢的理解。而且转录组分析也有助于研究者鉴定菌种改良的目标基因,加速对... 组学技术在系统水平上对细胞代谢进行全面的分析,极大地促进了代谢工程的发展和应用。全基因组水平的转录分析可以使研究者更加精确地评估细胞表型,加深对细胞代谢的理解。而且转录组分析也有助于研究者鉴定菌种改良的目标基因,加速对微生物细胞工厂的合理设计及构建。文中介绍了3种主要转录组平台技术的原理,并总结了转录组学在代谢工程领域中应用的最新进展和未来发展趋势。 展开更多
关键词 转录组 代谢工程 基因芯片 SERIAL analysis of gene expression(SAGE) massively parallel signature sequencing(MPSS) RNA-seq
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