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人类基因研究和应用的伦理分析 被引量：3
1
作者 陶钧 胡维新 《长沙电力学院学报（社会科学版）》 2003年第2期25-27,共3页
人类基因组研究已取得突破性的成就,即将进入后基因组时代,由此带来的伦理学问题应引起我们的关注。对基因隐私保护、基因歧视、基因殖民主义及基因设计、社会老龄化等伦理问题,我们应用法律和伦理手段予以控制,达到趋利避害的目的,使... 人类基因组研究已取得突破性的成就,即将进入后基因组时代,由此带来的伦理学问题应引起我们的关注。对基因隐私保护、基因歧视、基因殖民主义及基因设计、社会老龄化等伦理问题,我们应用法律和伦理手段予以控制,达到趋利避害的目的,使人类基因研究和应用给人类带来福祉而不是灾难。 展开更多
关键词 人类基因 伦理 基因隐私 歧视 法律
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菌物生物技术:外源蛋白在米曲霉中的表达及分泌(英文)
2
作者 Hahm Young tae (Department of Biotechnology,Chung Ang University,Ahnsung City, Kyunggi Do,Korea,456 756) 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 1999年第3期92-102,共11页
米曲霉是与工业用酶及食品发酵相关的重要微生物，其分泌蛋白的能力有望将其用于外源蛋白表达的遗传工程研究。为了构建米曲霉的转化系统，首先由紫外照射，分离获ａｒｇＢ－突变株，再通过ＣａＣｌ２调节的化学方法和电穿孔技术将携带... 米曲霉是与工业用酶及食品发酵相关的重要微生物，其分泌蛋白的能力有望将其用于外源蛋白表达的遗传工程研究。为了构建米曲霉的转化系统，首先由紫外照射，分离获ａｒｇＢ－突变株，再通过ＣａＣｌ２调节的化学方法和电穿孔技术将携带构巢曲霉ａｒｇＢ基因的质粒导入米曲酶受体细胞，经筛选获得多拷贝及遗传稳定的转化子，转化频率为１０～５０转化子／μｇＤＮＡ。虽然构巢曲霉与米曲霉ａｒｇＢ基因的同源性不高，但前者对后者ａｒｇＢ－突变能起到补偿作用。在电场调节的转化中—电穿孔，适宜条件为６．３ｋＶ／ｃｍ和１５４０ｏｈｍ。电场中，原生质体相对于非原生质体在１．３ｋＶ／ｃｍ条件成活率为８０％，而６．３ｋＶ／ｃｍ下为５０％。为了实现外源基因在米曲霉中的表达，天然植物源的蜜饯—奇甜蛋白基因及构巢曲霉中作为营养选择标记的ａｒｇＢ通过共转化被引入受体细胞中，然后从培养基中获得与纯化的奇甜蛋白相似的具免疫活性的２２ｋＤａ分子量的蛋白质，这说明植物中的信号序列同样可在米曲霉中起作用，调节奇甜蛋白分泌到细胞外。 展开更多
关键词 米曲霉 转化 奇甜蛋白基因 分泌作用
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枯草杆菌α-淀粉酶基因克隆及其在毕赤酵母中表达的初步研究 被引量：6
3
作者 柳辉 杨江科 闫云君 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期104-108,112,共6页
以B.subtilis XL-15基因组为模板,运用PCR法成功克隆了α-淀粉酶基因,其开放式阅读框(ORF)为1980bp,编码659个氨基酸残基。分别将该基因转入大肠杆菌BL21(DE3)和毕赤酵母GS115中,进行诱导表达。结果表明,大肠杆菌破碎上清液中未检出酶活... 以B.subtilis XL-15基因组为模板,运用PCR法成功克隆了α-淀粉酶基因,其开放式阅读框(ORF)为1980bp,编码659个氨基酸残基。分别将该基因转入大肠杆菌BL21(DE3)和毕赤酵母GS115中,进行诱导表达。结果表明,大肠杆菌破碎上清液中未检出酶活,SDS-PAGE电泳分析显示表达产物均以无活性包涵体存在;而毕赤酵母在α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,经高密度培养,表达产物分泌至胞外,发酵液酶活力为4.3U/ml,实现了B.subtilis α-淀粉酶基因的分泌表达。 展开更多
关键词 Α-淀粉酶 巴斯德毕赤酵母 基因克隆 分泌表达
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人血管抑制素在酿酒酵母中的分泌表达和活性鉴定 被引量：1
4
作者 卢文菊 罗进贤 +1 位作者 张晓实 李文清 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期156-160,共5页
将酵母交配因子 (MF)α1信号肽编码序列和人血管抑制素 (hAGN)cDNA融合序列插入穿梭载体pYADE4 ,构建得到分泌型重组表达质粒pYADEMA18.转化酿酒酵母JG110 7后 ,用 2 %乙醇和2 %甘油联合诱导表达 .ELISA分析表明 ,在诱导 14h～ 30h期间 ... 将酵母交配因子 (MF)α1信号肽编码序列和人血管抑制素 (hAGN)cDNA融合序列插入穿梭载体pYADE4 ,构建得到分泌型重组表达质粒pYADEMA18.转化酿酒酵母JG110 7后 ,用 2 %乙醇和2 %甘油联合诱导表达 .ELISA分析表明 ,在诱导 14h～ 30h期间 ,hAGN获得了表达并分泌至细胞外 .发酵上清液经 75 %饱和度硫酸铵沉淀、CM 5 2纤维素离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析纯化 .SDS PAGE分析显示 ,表达产物重组人血管抑制素 (rhAGN)相对分子质量约 5 0kD ,电泳纯度达到 94 %.生物活性分析证明 ,rhAGN在 0 0 1mg L～ 3 0mg L浓度范围内能够抑制人真皮内皮细胞株HDMEC增殖 ,抑制作用随剂量的增加而增强 . 展开更多
关键词 人血管抑制素 酿酒酵母 分泌表达 活性鉴定
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eEF1A1基因克隆、原核分泌表达及融合蛋白纯化 被引量：2
5
作者 郭艳荣 常晓月 +2 位作者 崔晓君 魏勋斌 朱乃硕 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期127-133,共7页
eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用。以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性。为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白... eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用。以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性。为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白分子,克隆了人eEF1A1蛋白编码序列(约1 300 bp),并成功构建pET22b-A原核分泌表达重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,0.4 mmol/L终浓度IPTG诱导,经不同温度下包涵体与胞浆蛋白组分分析,快速明确蛋白表达情况,即诱导4 h后,37℃表达于包涵体组分,在30℃分泌表达至胞浆组分。通过His-Trap亲和层析纯化柱进行线性洗脱,Bradford法测定蛋白浓度高达620 mg/mL,SDS-PAGE分析纯度约为95%,蛋白大小符合50 kD,Western blotting显示目的蛋白能被eEF1A1抗体识别;质谱分析证实重组蛋白为人eEF1A1蛋白分子。为进一步研究其与重要功能性蛋白的相互作用及在细胞凋亡和蛋白降解中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 eEF1A1 基因克隆 分泌表达 融合蛋白 蛋白纯化
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植物对线虫的反应和抵制作用研究 被引量：2
6
作者 张铁峰 张俊国 魏胜利 《林业勘查设计》 2008年第2期51-53,共3页
从分子水平上解释了植物与线虫的相互作用。线虫通过分泌特有的食道腺分泌物作用于植物根尖的1至数个细胞,改变植物正常基因表达,从而诱导寄主植物一系列复杂的基因表达,包括线虫造成的伤口反应、亲和反应、抗性反应等。经过基因表达后... 从分子水平上解释了植物与线虫的相互作用。线虫通过分泌特有的食道腺分泌物作用于植物根尖的1至数个细胞,改变植物正常基因表达,从而诱导寄主植物一系列复杂的基因表达,包括线虫造成的伤口反应、亲和反应、抗性反应等。经过基因表达后植物会产生一些抵制线虫的化合物,包括聚噻吩、异硫氰酸酯、硫代葡萄糖甙、氰苷、多炔类化合物、生物碱、脂肪酸和其衍生物、类异戊二烯化合物、倍半萜类化合物、苦木素萜、类固醇、三萜类化合物和酚类化合物等。 展开更多
关键词 线虫 抗性基因 分子互作 分泌物
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热稳定α-半乳糖苷酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究 被引量：1
7
作者 李荷 游娟 +1 位作者 顾取良 杨红 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期18-23,共6页
克隆前期筛得分枝犁头霉Absidia ramosa WL511的热稳定α-半乳糖苷酶cDNA基因aga(GenBank No.DQ234280),将aga基因插入表达载体pPICZαA并电转化整合到毕赤酵母P.pastoris GS115的染色体上。30℃、甲醇流加量0.5%(V/V)时,酵母发酵上清... 克隆前期筛得分枝犁头霉Absidia ramosa WL511的热稳定α-半乳糖苷酶cDNA基因aga(GenBank No.DQ234280),将aga基因插入表达载体pPICZαA并电转化整合到毕赤酵母P.pastoris GS115的染色体上。30℃、甲醇流加量0.5%(V/V)时,酵母发酵上清液中酶活达32U/ml。纯化后酶的比活力为137U/mg,SDS-PAGE显示单一条带,凝胶过滤和SDS-PAGE估算其分子量分别为348kDa和87kDa,该酶为四聚体结构,糖基化导致重组蛋白的分子量比原酶大6kDa。该酶等电点为5.2,最适反应温度73℃,最适pH6.8,60℃以下及pH5.5～9.0范围内活性稳定。75℃时保温2小时保留54%的酶活,85℃时酶活完全消失。以对硝基苯酚-α-D-半乳糖苷为底物,该酶Km值为0.42mmol/Lol/L;Vmax为413U/mg;kcat为64531/min。 展开更多
关键词 热稳定α-半乳糖苷酶基因 毕赤酵母 分泌表达
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