猪伪狂犬病病毒gE蛋白在野毒诊断中的应用进展 被引量：19

1

作者 马力 杨丽梅 +6 位作者 徐倩倩 王艳 张颖 张志美 郭时金 沈志强 王艳萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期249-253,共5页

猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因缺失弱毒疫苗在中国的大规模免疫应用,对预防和控制猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)起到了重要作用,同时亟需建立与gE基因缺失弱毒疫苗配套的鉴别诊断技术,淘汰净化野毒感染猪,减少免疫猪被... 猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因缺失弱毒疫苗在中国的大规模免疫应用,对预防和控制猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)起到了重要作用,同时亟需建立与gE基因缺失弱毒疫苗配套的鉴别诊断技术,淘汰净化野毒感染猪,减少免疫猪被误杀的可能,逐步实现PRV的净化。随着分子生物学与免疫学技术的日臻进步,基于PRV gE蛋白的分子生物学和血清学诊断方法不断发展与完善。文章就近年来基于gE蛋白的各种分子生物学和血清学诊断方法的最新研究现状及发展前景进行综述,以期为中国PRV的诊断与防控提供科学依据。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 ge蛋白 野毒 诊断

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猪伪狂犬病病毒gE蛋白原核表达及野毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量：3

2

作者 郭忠欣 王天奇 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期126-132,共7页

为了建立一种简单、快速的猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒抗体检测方法,试验采用原核表达技术对PRV流行毒株的gE蛋白进行了原核表达,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了检测PRV野毒抗体的间接ELISA检测方法。结果表明:获得了以包涵体形式表... 为了建立一种简单、快速的猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒抗体检测方法,试验采用原核表达技术对PRV流行毒株的gE蛋白进行了原核表达,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了检测PRV野毒抗体的间接ELISA检测方法。结果表明:获得了以包涵体形式表达的重组gE蛋白,经Western blot鉴定表明重组gE蛋白具有良好的免疫学活性,以该蛋白作为包被抗原建立的检测PRV野毒抗体的间接ELISA方法检测PRV疫苗免疫血清、CSFV、PRRSV、PCV-2、PPV、PEDV、FMDV阳性血清均为阴性,检测PRV野毒阳性血清的最低检出效价为1∶10240,批内和批间重复性试验的变异系数分别为2.19%~3.33%和3.01%~4.40%,与国外商品化gE-ELISA试剂盒的符合率达98.72%,应用该ELISA检测河南省部分地区采集的1128份猪血清样品,PRV野毒抗体阳性率为8.07%。说明建立的PRV野毒抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,为PRV野毒抗体的流行病学监测和净化提供了技术支持。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 ge蛋白 原核表达 野毒抗体 间接ELISA

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添加外源锗对猪肚菇子实体蛋白质营养价值的影响 被引量：7

3

作者 江枝和 雷锦桂 +3 位作者 翁伯琦 肖淑霞 王义祥 唐翔虬 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期906-909,共4页

采用国际通用评价方法,研究了不同浓度锗(Ge)对猪肚菇子实体蛋白质营养价值的影响,结果表明:以Ge浓度为40 mg/kg处理的培养料栽培的猪肚菇子实体蛋白质营养价值评价的6项指标中,氨基酸比值系数分、必需氨基酸指数、氨基酸评分、生物价... 采用国际通用评价方法,研究了不同浓度锗(Ge)对猪肚菇子实体蛋白质营养价值的影响,结果表明:以Ge浓度为40 mg/kg处理的培养料栽培的猪肚菇子实体蛋白质营养价值评价的6项指标中,氨基酸比值系数分、必需氨基酸指数、氨基酸评分、生物价和营养指数分别为:95.49、98.34、99.09、95.46和29.22,均居6种Ge浓度处理之首;而化学评分为77.12,居第5位。综合评价的结果显示,以Ge浓度为40 mg/kg处理的培养料栽培的猪肚菇子实体的蛋白质营养价值最高。 展开更多

关键词 猪肚菇 锗 营养价值 蛋白质营养

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基于gE蛋白的羊伪狂犬病病毒间接ELISA的建立与应用

4

作者 刘广阔 吴发兴 +4 位作者 于皓同 王凯茸 张锐铮 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期28-33,共6页

为建立羊源伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)抗体的检测方法,从PRV中对gE基因进行克隆,并构建重组载体对gE蛋白进行原核表达,以重组gE蛋白为包被抗原,建立PRV抗体间接ELISA检测方法,并进行临床样本检测。结果显示,重组gE蛋白大小为... 为建立羊源伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)抗体的检测方法,从PRV中对gE基因进行克隆,并构建重组载体对gE蛋白进行原核表达,以重组gE蛋白为包被抗原,建立PRV抗体间接ELISA检测方法,并进行临床样本检测。结果显示,重组gE蛋白大小为42 ku,以包涵体形式表达;Western blot检测表明重组蛋白具有良好的反应原性;重组蛋白作为包被抗原的最佳工作浓度为1μg/mL,待检血清100倍稀释,以HRP标记的兔抗山羊IgG 10000倍稀释作为二抗;检测临床样本时判定阴阳性的临界值为0.284;灵敏性试验结果显示,羊PRV阳性血清稀释2048倍时检测结果仍为阳性;批内变异系数(2.45%~5.00%)与批间变异系数(2.55%~7.41%)均小于10%;采用建立的方法检测其他常见羊源病毒阳性血清结果均为阴性;对收集的376份临床羊血清进行检测,PRV阳性率为10.6%。建立的间接ELISA检测方法可用于羊源样本中伪狂犬病病毒抗体的检测,该方法的建立为羊场PRV抗体检测提供了技术支持。 展开更多

关键词 羊伪狂犬病 伪狂犬病病毒 ge蛋白 间接ELISA

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伪狂犬病病毒gE基因的表达及gE蛋白单克隆抗体的制备 被引量：5

5

作者 王淑杰 蔡雪辉 +6 位作者 刘永刚 吴国军 刘狄萩 张琦 马平 李成君 石文达 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期679-683,共5页

以猪伪狂犬病病毒(PRV)Min-A株pMD-gE质粒为模板,利用所合成的特异性引物进行PCR扩增,获得了1 000 bp的DNA片段,并将其克隆至表达载体pET-30a中,转化到大肠杆菌中进行了原核表达,对表达产物进行了抗原性分析;在此基础上,用纯化的gE蛋白... 以猪伪狂犬病病毒(PRV)Min-A株pMD-gE质粒为模板,利用所合成的特异性引物进行PCR扩增,获得了1 000 bp的DNA片段,并将其克隆至表达载体pET-30a中,转化到大肠杆菌中进行了原核表达,对表达产物进行了抗原性分析;在此基础上,用纯化的gE蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选和鉴定了分泌抗gE蛋白单抗的杂交瘤细胞株。结果显示,原核表达的gE蛋白具有良好的抗原性,其分子质量为46 ku。筛选获得3株分泌抗gE蛋白单抗的杂交瘤细胞株,Western-blot和间接免疫荧光试验证实,所获得的3株单抗具有良好的特异免疫反应原性。3株单抗均为IgG1亚类,且轻链均为κ链。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 ge蛋白 原核表达 单克隆抗体

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咖啡酸锗对小鼠U14瘤的抑制作用及其诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究 被引量：5

6

作者 黄越燕 肖纯 +3 位作者 吴铭娟 余扬帆 刘春花 徐优慧 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1490-1495,共6页

目的:研究咖啡酸锗对荷瘤U14小鼠的体内抑瘤作用及体外抗肿瘤活性,探讨其抗肿瘤作用机制。方法:观察咖啡酸锗对小鼠U14宫颈癌的抑制率;用MG-P染色和透射电镜的方法观察肿瘤细胞的凋亡情况;流式细胞术(FCM)观察瘤组织的细胞凋亡率并分析... 目的:研究咖啡酸锗对荷瘤U14小鼠的体内抑瘤作用及体外抗肿瘤活性,探讨其抗肿瘤作用机制。方法:观察咖啡酸锗对小鼠U14宫颈癌的抑制率;用MG-P染色和透射电镜的方法观察肿瘤细胞的凋亡情况;流式细胞术(FCM)观察瘤组织的细胞凋亡率并分析细胞周期;免疫组化方法观察肿瘤组织中Bax和Bcl-2蛋白表达情况;MTT法评价咖啡酸锗体外抑制U14肿瘤细胞活性。结果:咖啡酸锗低、中、高剂量组对宫颈癌U14的抑瘤率分别为38.50%、47.17%和64.04%(P<0.01)。MG-P染色及电镜观察可见,咖啡酸锗治疗组出现较多的凋亡细胞(P<0.05),可见典型的细胞凋亡的形态学特征。流式细胞术检测表明咖啡酸锗能诱导U14肿瘤细胞凋亡,在G0-G1前出现1个明显的凋亡峰,细胞被阻滞在S期。咖啡酸锗处理后肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调。咖啡酸锗对体外培养的U14细胞增殖均有一定程度的抑制作用,48h的IC50值为48.57mg/L。结论:咖啡酸锗在体内、外均能有效抑制小鼠U14瘤细胞的增殖,并诱导肿瘤细胞凋亡。咖啡酸锗上调U14细胞中Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达,进而促进肿瘤细胞凋亡,这可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。 展开更多

关键词 咖啡酸类 锗 U14细胞 细胞凋亡 基因 bax 基因 bcl-2 蛋白质BAX 蛋白质BCL-2

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牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测胶体金免疫层析试纸的研制

7

作者 卞宇晨 田广原 +7 位作者 王宇琛 于佳梁 周雅坪 郭婷 赵红梅 赵逢淼 孙雅婕 周雨霞 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2221-2227,2250,共8页

将gD蛋白用胶体金标记并包被于结合垫作为检测探针,未标记的gD蛋白包被NC膜作为检测线,以金标记鼠IgG与羊抗鼠IgG作为独立质控系统,利用双抗原夹心法建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)抗体... 将gD蛋白用胶体金标记并包被于结合垫作为检测探针,未标记的gD蛋白包被NC膜作为检测线,以金标记鼠IgG与羊抗鼠IgG作为独立质控系统,利用双抗原夹心法建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)抗体的胶体金免疫层析试纸,并对该试纸进行了性能评价。结果显示,该试纸在检测副结核分枝杆菌(MAP)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛支原体(M.bovis)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、口蹄疫病毒(FMDV)的标准阳性血清时均为阴性反应;该试纸在检测IBRV标准阳性血清时敏感性为1∶16;将该试纸与进口商品化ELISA试剂盒共同检测60份待检牛血清,两者的阳性符合率为93.3%,阴性符合率为100%,总符合率为96.7%。结果表明,本试验建立的胶体金免疫层析试纸可在10~15 min完成检测,具有快速、准确、简便等特点,为临床定性检测及现场诊断牛传染性鼻气管炎提供了有效工具。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒抗体 gD蛋白 ge蛋白 胶体金免疫层析试纸

原文传递

猪伪狂犬病病毒变异株HN1201 gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

8

作者 牛欣蕊 付朋飞 +4 位作者 鲁维飞 张超 褚贝贝 王江 曾磊 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1604-1611,1617,共9页

旨在获得用于伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)实验室检测和临床诊断所需的PRV gE单克隆抗体,用灭活的PRV变异株PRV HN1201免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术将免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,经免疫过氧化物酶单层细胞试验(immune ... 旨在获得用于伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)实验室检测和临床诊断所需的PRV gE单克隆抗体,用灭活的PRV变异株PRV HN1201免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术将免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,经免疫过氧化物酶单层细胞试验(immune peroxidase monolayer assay,IPMA)和免疫印迹试验(Western blot)筛选,获得2株分泌PRV gE抗体的杂交瘤细胞(1-F11-3、3-E11-3),抗体亚类分别为IgG2a和IgM,轻链均为Kappa链。间接免疫荧光试验(IFA)检测结果显示单克隆抗体可与不同PRV毒株反应,而不与PRV Bartha K61反应;Western blot、IPMA、IFA试验结果显示2株单克隆抗体均能特异性识别PRV gE蛋白,与其他病毒无交叉反应。Western blot试验鉴定2株抗体的抗原识别序列分别为^(64)GDDRRAGFGSALASLR^(79)和^(156)PPEVPRLRRGPPIVTPERWS^(175)。腹水纯化后的1-F11-3、3-E11-3抗体用于Western blot检测的最高稀释比分别为1∶14000和1∶12000,1-F11-3的IFA效价为2^(-14),3-E11-3不可用于IFA检测。结果表明,本研究制备的PRV gE抗体特异性强、灵敏度高,为建立快速、高效的PRV免疫学检测方法奠定了基础。 展开更多

关键词 PRV HN1201 ge蛋白 单克隆抗体 IGG2A IGM

原文传递

猪伪狂犬病病毒gE蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：4

9

作者 寇晓晶 高峰 +1 位作者 郭慧琳 刘剑锋 《中国动物检疫》 CAS 2018年第5期91-94,共4页

以原核表达的猪伪狂犬病毒gE蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法并进行相应优化,研制出了猪伪狂犬病毒间接ELISA抗体检测试剂盒,并与国内市场标杆产品进行比较,发现阳性符合率为88.03%,阴性符合率为91.47%,总体符合率达到89.84%。同时,... 以原核表达的猪伪狂犬病毒gE蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法并进行相应优化,研制出了猪伪狂犬病毒间接ELISA抗体检测试剂盒,并与国内市场标杆产品进行比较,发现阳性符合率为88.03%,阴性符合率为91.47%,总体符合率达到89.84%。同时,该试剂盒批间、批内变异系数均小于10%,具有较好的重复性。该检测试剂盒的研制,可为猪场猪伪狂犬病毒野毒感染的检测提供技术支撑。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 ge蛋白 间接ELISA试剂盒 符合率

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牛疱疹病毒1型糖蛋白E(gE)可溶性表达及其反应原性分析

10

作者 杨晨 孙续 +1 位作者 丁学智 杨峰 《中兽医医药杂志》 CAS 2023年第3期17-21,共5页

为探索牛传染性鼻气管炎诊断新技术,本研究以GenBank公布的牛疱疹病毒1型(BHV1,NC_001847.1)基因序列为参考,预测并优化了BHV1的gE蛋白胞外区密码子序列。优化后的序列长度为1 275 bp,5’端和3’端分别添加限制性酶切位点SacⅠ和HindⅢ... 为探索牛传染性鼻气管炎诊断新技术,本研究以GenBank公布的牛疱疹病毒1型(BHV1,NC_001847.1)基因序列为参考,预测并优化了BHV1的gE蛋白胞外区密码子序列。优化后的序列长度为1 275 bp,5’端和3’端分别添加限制性酶切位点SacⅠ和HindⅢ后克隆至载体pUC19,进而构建原核表达载体pET-SUMO-gE,将其转入大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中表达重组蛋白,使用NiNTA亲和柱纯化重组蛋白。SDS-PAGE和Western blot检测结果证明,获得的牛疱疹病毒1型gE胞外区重组蛋白大小约为70 kDa,有良好的水溶性和反应原性。该研究结果为gE特异性单克隆抗体的制备及后续诊断试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎 牛疱疹病毒1型 ge蛋白 原核表达 载体构建

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猪伪狂犬病病毒gE蛋白的真核表达及其活性鉴定

11

作者 王清龙 王瑞宁 +6 位作者 王勋 李青梅 李鸽 张真真 杨苏珍 郭军庆 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2023年第3期127-134,共8页

为制备猪伪狂犬病病毒(PRV)gE重组蛋白并评估其抗原活性,将优化的PRV gE基因胞外区插入真核表达载体pCMV并在其C端加入Hexa-His标签,构建真核表达质粒pCMV-gE;将重组质粒转染HEK293F细胞,Dot blot鉴定转染细胞中gE重组蛋白的分泌表达;... 为制备猪伪狂犬病病毒(PRV)gE重组蛋白并评估其抗原活性,将优化的PRV gE基因胞外区插入真核表达载体pCMV并在其C端加入Hexa-His标签,构建真核表达质粒pCMV-gE;将重组质粒转染HEK293F细胞,Dot blot鉴定转染细胞中gE重组蛋白的分泌表达;利用镍亲和层析和凝胶过滤层析从转染细胞培养上清中纯化gE表达蛋白;以SDS-PAGE和Western blot鉴定gE重组蛋白,利用PRV阳性血清以ELISA分析gE重组蛋白的抗原活性,通过去糖基化酶PNGase F鉴定其糖基化修饰及其对抗原活性的影响。Dot blot结果显示,gE重组蛋白通过自身信号肽实现在细胞培养上清的分泌表达,其表达量在转染96 h达到峰值。SDS-PAGE和Western blot结果显示,从细胞培养上清中纯化获得gE重组蛋白纯度约为90%,经去糖基化酶PNGase F处理的gE重组蛋白分子质量显著降低。间接ELISA结果显示,gE重组蛋白检测PRV阳性血清的抗体效价为1∶12800;PRV阳性血清对gE蛋白的检出限为31.25 ng/mL,其抗原活性是原核表达的4倍。对临床血清的检测结果显示,基于gE重组蛋白的ELISA与IDEXX抗体检测试剂盒的符合率为96.5%。综上,在真核细胞中分泌表达了具有高表达量、高纯度、高活性和糖基化修饰的gE重组蛋白,在PRV感染鉴别检测中具有良好的应用潜力。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 ge蛋白 分泌表达 糖基化修饰 抗原活性

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猪伪狂犬病毒gE蛋白单克隆抗体制备与鉴定 被引量：4

12

作者 雷有玲 李国泰 +2 位作者 鲍玉林 刘秀清 张文 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第1期109-112,共4页

为获得猪伪狂犬病毒（PRV）gE蛋白单克隆抗体,选择原核表达的重组gE蛋白免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,将其脾细胞与SP2/0进行融合,经间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,结果获得了2株能稳定分泌抗PRV gE蛋白的杂交瘤细胞,命名为E3B8和E5C11。间接... 为获得猪伪狂犬病毒（PRV）gE蛋白单克隆抗体,选择原核表达的重组gE蛋白免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,将其脾细胞与SP2/0进行融合,经间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,结果获得了2株能稳定分泌抗PRV gE蛋白的杂交瘤细胞,命名为E3B8和E5C11。间接ELISA检测2株杂交瘤细胞的培养上清液抗体效价为1∶6.4×10~3,腹水的抗体效价分别达到1∶3.28×10~6和1∶6.55×10~6。2株杂交瘤细胞的染色体数分别为105和108。E3B8亚类鉴定重链为IgG1,轻链为κ链;E5C11亚类鉴定重链为IgG2b,轻链为κ链。Western blot检测显示2株单克隆抗体腹水均能与PRV重组gE蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光试验（IFA）检测显示2株单克隆抗体均能与PRV分离毒株感染的BHK-21细胞发生特异性反应,交叉反应性检测显示2株单克隆抗体与常见病毒不发生交叉反应。表明制备的2株gE蛋白单克隆抗体效价高、特异性强,为gE蛋白结构与功能分析以及PRV免疫诊断试剂盒的开发奠定了基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 ge蛋白 单克隆抗体 制备 鉴定

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牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：4

13

作者 赵微 毕莹 +1 位作者 闻晓波 倪宏波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第2期155-159,共5页

目的制备牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheities virus,IBRV)g E蛋白的单克隆抗体,并进行鉴定。方法将扩增的IBRV gE基因插入至载体p ET-32a(+),转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白IBRV gE,通过Ni-N... 目的制备牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheities virus,IBRV)g E蛋白的单克隆抗体,并进行鉴定。方法将扩增的IBRV gE基因插入至载体p ET-32a(+),转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白IBRV gE,通过Ni-NTA Agarous Kit纯化后,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,间接免疫荧光法筛选阳性杂交瘤细胞。经小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,3×10~6个/只,待小鼠腹腔膨大后,采集腹水,硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,并进行亚类、浓度、染色体数目、Western blot及间接免疫荧光检测。结果重组蛋白IBRV gE相对分子质量约35 000,纯化后浓度为1.2 mg/mL。小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后,筛选出1株稳定分泌IBRV单抗的杂交瘤细胞(命名为3G9),获得相应抗体浓度为1.46 mg/m L;为IgG1亚类,轻链为kappa链;染色体数目为95~105;可与IBRV发生特异性反应;可与接种IBRV毒株的MDBK细胞发生特异性结合,产生特异性荧光。结论采用原核表达系统表达并纯化了IBRV gE蛋白,成功制备了抗IBRV gE的单克隆抗体,为建立特异性的IBRV诊断方法及致病机理的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 ge蛋白 单克隆抗体

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伪狂犬病病毒gB和gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：3

14

作者 孙海凤 顾真庆 +3 位作者 董静 孙涛 白娟 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期247-252,共6页

采用大肠杆菌表达系统表达获得了伪狂犬病病毒(PRV)超强毒株ZJ01的gB和gE重组蛋白,用其免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、克隆和间接ELISA筛选,获得了4株能稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞培养上清的ELISA抗体效价在1∶1 600~1∶... 采用大肠杆菌表达系统表达获得了伪狂犬病病毒(PRV)超强毒株ZJ01的gB和gE重组蛋白,用其免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、克隆和间接ELISA筛选,获得了4株能稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞培养上清的ELISA抗体效价在1∶1 600~1∶6 400之间,腹水抗体效价达1∶4×105;连续培养20代,抗体效价基本一致。抗gB单克隆抗体B1B6和B3D7属于IgG2b,抗gE单克隆抗体E1B11和E5C10属于IgG1,轻链均为κ型。Western-blot和IFA结果显示,4株单克隆抗体均能与PRV流行毒株ZJ01、HZ、SD、NJ、LA发生特异性反应,B1B6和B3D7还能与PRV gE基因缺失疫苗毒株Bartha-K61发生反应,但E1B11和E5C10不能与Bartha-K61发生反应。 展开更多

关键词 猪 伪狂犬病病毒 gB蛋白 ge蛋白 单克隆抗体

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伪狂犬病病毒gB和gE蛋白重组表达及抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：2

15

作者 张洪亮 郝占武 +5 位作者 解倩倩 王凤雪 张志 韩先杰 单虎 温永俊 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第1期98-105,共8页

本研究利用PCR扩增伪狂犬病病毒(PRV)Bartha-K61株gB基因核心抗原区和闵A株gE基因核心抗原区,构建了重组质粒pET-32a-gB和pET-32a-gE,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导进行表达。SDS-PAGE分析表明,pET32a-gB蛋白分子... 本研究利用PCR扩增伪狂犬病病毒(PRV)Bartha-K61株gB基因核心抗原区和闵A株gE基因核心抗原区,构建了重组质粒pET-32a-gB和pET-32a-gE,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导进行表达。SDS-PAGE分析表明,pET32a-gB蛋白分子量约为44 kDa,pET32a-gE蛋白分子量约为41 kDa。分别以gB和gE重组蛋白作为包被抗原,建立了PRV抗体间接ELISA检测方法。该方法中重组蛋白仅与PRV阳性血清发生特异性反应,检测敏感性可达到1∶1600,批内重复性和批间重复性变异系数均小于10%。本研究建立的间接ELISA方法可用于PRV抗体的监测,鉴别疫苗免疫抗体和野毒感染抗体,有利于猪伪狂犬病净化工作。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 GB基因 ge基因 蛋白表达 间接ELISA

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猪伪狂犬病病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析检测方法的建立 被引量：3

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作者 郭力伟 程亚辉 +3 位作者 徐大伟 何雷 陈永林 朱雪敏 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第20期82-87,共6页

为了建立一种简单、快速检测猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒株的方法,试验原核表达gE蛋白,鉴定并纯化后免疫Balb/c小鼠,采集免疫Balb/c小鼠的脾脏进行细胞融合,筛选单克隆杂交瘤细胞株扩大培养。将阳性杂交瘤细胞免疫Balb/c雌性小鼠,小鼠腹部... 为了建立一种简单、快速检测猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒株的方法,试验原核表达gE蛋白,鉴定并纯化后免疫Balb/c小鼠,采集免疫Balb/c小鼠的脾脏进行细胞融合,筛选单克隆杂交瘤细胞株扩大培养。将阳性杂交瘤细胞免疫Balb/c雌性小鼠,小鼠腹部明显膨大后采集腹水,利用间接ELISA方法测定抗体效价;采用秋水仙素法对筛选到的阳性杂交瘤细胞进行染色体数目测定;利用SBAClonotyping^(TM)System/HRP亚类鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体亚类;利用Western-blot方法鉴定单克隆抗体活性;利用得到的单克隆抗体制备胶体金免疫层析试纸条,考察胶体金免疫层析试纸条的特异性、敏感性、重复性,进行符合性试验、临床应用试验。结果表明:获得了以包涵体形式表达的重组gE蛋白,Western-blot检测具有良好的免疫学活性;以重组gE蛋白为免疫原制备了3株抗PRV gE蛋白单克隆抗体4C8、5D10、6E8,其注射小鼠后产生的腹水抗体效价分别为1∶512 000、1∶1 024 000、1∶512 000,Western-blot检测均具有良好的免疫学活性;杂交瘤细胞4C8、5D10、6E8的染色体数分别为1×10^(5)、1×10^(6)、1×10^(6),均接近脾细胞和骨髓瘤细胞染色体数的总和。分别以5D10和6E8为标记抗体和检测抗体,组装了检测PRV野毒株的胶体金免疫层析试纸条,用试纸条检测PRV疫苗株、PPV、PCV-2、CSFV、PRRSV、TGEV的结果均为阴性,对PRV野毒株的最低检出量为1×10^(2.83) TCID_(50),批内和批间重复检测的结果完全相同,与PCR方法的符合率达92.59%,检测157份临床病料样品的阳性率为17.83%。说明胶体金免疫层析试纸条具有良好的特异性、敏感性、重复性,适合基层养殖单位进行PRV野毒的快速鉴别诊断。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 ge蛋白 原核表达 单克隆抗体 胶体金试纸条

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Advances in Research and Application of gE Gene/Protein in Prevention and Control of Swine Pseudora-bies

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作者 Ma Li Yang Limei +6 位作者 Zhuang Jinqiu Xu Qianqian Wang Yan Guo Shijin Shen Zhiqiang Wang Yanping Zhang Ying 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2017年第2期93-95,100,共4页

Research and application progresses of gE gene and its encoding gE protein in PR vaccines, diagnostic technique and epidemiological investigation are summarized, which have certain reference value for comprehensive pr... Research and application progresses of gE gene and its encoding gE protein in PR vaccines, diagnostic technique and epidemiological investigation are summarized, which have certain reference value for comprehensive prevention and control of PR and gradual purification of PR in different regions. 展开更多

关键词 Pseudorabies virus （PRV） ge gene ge protein VACCINE DIAGNOSIS Epidemiological investigation Prevention and control

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VZV外膜蛋白E胞外区的原核表达及其免疫特性研究 被引量：2

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作者 郦钰超 李佳萌 +6 位作者 沈万鹏 吴帆 王弼君 李玉萍 宗利强 庄素素 李越希 《药物生物技术》 CAS 2020年第3期189-194,共6页

水痘-带状疱疹病毒(VZV)是一种可以引起水痘和带状疱疹(HZ)的病原体,通过呼吸道和密切接触在人群中传播,可以引发水痘和带状疱疹两种不同临床症状的疾病。人群对该病毒易感性强,主动免疫是减轻带状疱疹疾病负担的重要手段。g E蛋白是VZ... 水痘-带状疱疹病毒(VZV)是一种可以引起水痘和带状疱疹(HZ)的病原体,通过呼吸道和密切接触在人群中传播,可以引发水痘和带状疱疹两种不同临床症状的疾病。人群对该病毒易感性强,主动免疫是减轻带状疱疹疾病负担的重要手段。g E蛋白是VZV抗原性最强、含量最丰富的外膜蛋白,是目前制备带状疱疹亚单位疫苗重要的候选蛋白。该研究通过原核系统表达带状疱疹g E蛋白,筛选合适的佐剂为制备带状疱疹亚单位疫苗提供依据。构建大肠杆菌重组系统表达VZV外膜蛋白E胞外区,用镍离子螯合层析技术纯化目的蛋白,用铝佐剂和Poly I:C佐剂分别与重组蛋白混合后免疫小鼠,检测抗血清免疫效价及相关细胞因子含量来比较佐剂对小鼠免疫应答的影响。构建的大肠杆菌表达系统成功表达目的蛋白,其表达形式主要为包涵体,通过变性复性获得相对分子质量约为63 ku的目的蛋白。免疫后的小鼠产生高效价及高特异性的血清抗体,经检测铝佐剂和Poly I:C佐剂均有较强的的免疫增强效果,并有明显的剂量效应关系。铝佐剂对Th2型细胞因子(IL-5,IL-10)具有更强烈的刺激作用。而对于Th1型细胞因子IL-2的分泌促进,Poly I:C佐剂优于铝佐剂。应用该蛋白抗原加佐剂可以增强机体体液和细胞免疫,该研究为筛选带状疱疹病毒疫苗佐剂及研制亚单位疫苗奠定了基础。该研究为带状疱疹病毒g E蛋白的纯化及佐剂的筛选提供参考,为亚单位疫苗的制备奠定了基础。 展开更多

关键词 带状疱疹病毒 ge蛋白 原核表达 免疫原性 免疫佐剂 细胞免疫

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猪伪狂犬病毒Guizhou-DY株gE基因的克隆及生物信息学分析 被引量：2

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作者 郝飞 汤德元 +6 位作者 罗险峰 曾智勇 李春燕 甘振磊 王凤 刘建 王洪光 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第8期15-19,191,共6页

为了研究伪狂犬病毒gE蛋白的结构及其在免疫保护中的功能,试验根据GenBank中猪伪狂犬病毒(PRV)GDSH株(登录号为EF552427)gE全基因序列设计引物,对伪狂犬病病毒gE基因进行PCR扩增、克隆及生物信息学分析。结果表明:PCR扩增基因全长1 734 ... 为了研究伪狂犬病毒gE蛋白的结构及其在免疫保护中的功能,试验根据GenBank中猪伪狂犬病毒(PRV)GDSH株(登录号为EF552427)gE全基因序列设计引物,对伪狂犬病病毒gE基因进行PCR扩增、克隆及生物信息学分析。结果表明:PCR扩增基因全长1 734 bp,编码577个氨基酸,与Yangsan株对应序列同源性为99.4%,测序结果已提交GenBank,登录号为JX417716;Guizhou-DY株gE蛋白是一种不稳定的疏水性蛋白,柔性区域呈散在性分布,以T转角和无规则卷曲为主,具有2个疏水区,在100～400位氨基酸残基处抗原性指标较高,基因序列保守性强;经预测,gE全基因不能在大肠杆菌表达系统中得到高效表达。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒(PRV) ge蛋白 生物信息学分析

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猪伪狂犬病毒gE蛋白的酵母表达及其单克隆抗体的筛选 被引量：2

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作者 王垚 金前跃 +8 位作者 周稳 李旭锋 柴永笑 丁培阳 陈晓 邢云瑞 李艳华 郭军庆 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2019年第10期133-139,共7页

为获得具有生物学活性的猪伪狂犬病毒(PRV)gE蛋白及其特异性单克隆抗体,利用电转技术将pPICZαA-gE重组质粒转入毕赤酵母X-33并筛选出阳性克隆,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出PRV gE蛋白表达菌株。通过诱导表达获得gE分泌蛋白,... 为获得具有生物学活性的猪伪狂犬病毒(PRV)gE蛋白及其特异性单克隆抗体,利用电转技术将pPICZαA-gE重组质粒转入毕赤酵母X-33并筛选出阳性克隆,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出PRV gE蛋白表达菌株。通过诱导表达获得gE分泌蛋白,并利用Ni柱进行纯化,应用Western blot、Dot blot、ELISA方法对纯化蛋白进行活性鉴定。同时将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选单克隆抗体,并对单克隆抗体进行了反应性测定、效价测定及亚型鉴定。结果显示,PRV gE蛋白在毕赤酵母中成功表达,并获得了纯化蛋白,纯度达90%以上,且具有良好的生物学活性,与PRV阳性血清反应性良好;筛选到4株敏感性强、特异性良好的gE单克隆抗体,均可同时特异识别PRV gE蛋白及病毒,分别命名为2F10、4C10、9E1、10C3。综上,用酵母系统成功表达了PRV gE蛋白,并筛选到4株针对PRV gE蛋白的单克隆抗体。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒 ge蛋白 毕赤酵母 单克隆抗体

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