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α-synuclein-EGFP在体外培养SH-SY5Y细胞中过表达对包涵体形成及线粒体结构改变的影响 被引量：7
1
作者 张宇新 杨慧 +5 位作者 蔡青 珠帕尔 鲁强 苏月 赵春礼 徐群渊 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期251-256,共6页
为了观察 α-synuclein-p EGFP真核载体在 SH-SY5 Y细胞内表达状况及其对细胞的影响 ,本研究用 L ipofect AMINE法转染 SH-SY5 Y细胞 ,用荧光显微镜检测报告基因表达产物 EGFP,用荧光免疫细胞化学法检测α-synuclein蛋白表达以及用 H-E... 为了观察 α-synuclein-p EGFP真核载体在 SH-SY5 Y细胞内表达状况及其对细胞的影响 ,本研究用 L ipofect AMINE法转染 SH-SY5 Y细胞 ,用荧光显微镜检测报告基因表达产物 EGFP,用荧光免疫细胞化学法检测α-synuclein蛋白表达以及用 H-E染色、光学显微镜观察转基因表达产物在细胞内的积聚 ,电镜观察转基因细胞超微结构形态学变化 ,rhodamine12 3染色、荧光显微镜检测线粒体跨膜电位变化。结果证明 ,该载体转染 SH-SY5 Y细胞后 ,在细胞内同时表达报告基因和目的基因 ;外源基因的表达产物可在细胞内积聚形成包涵体并引起线粒体结构和功能改变。本研究结果提示 ,本实验获得的细胞模型可模拟 Parkinson病发生过程中一些基本的神经病理学特点 ,可为进一步探讨 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 荧光免疫细胞化学 线粒体 真核载体 细胞表达 包涵体
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α-synuclein-pEGFP真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达 被引量：4
2
作者 张宇新 赵焕英 +4 位作者 苏月 苏玉金 赵春礼 徐群渊 杨慧 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期124-128,共5页
为了构建 α-synuclein-p EGFP真核表达载体 ,检测其在 SH-SY5 Y细胞内的表达 ,本研究应用下述方法 :PCR扩增 α-synuclein基因并消除终止密码子 ;PCR产物连入 p GEM T-easy载体 ,经测序确认无误后 ,亚克隆入 p EGFP-N1,构建α-synucle-... 为了构建 α-synuclein-p EGFP真核表达载体 ,检测其在 SH-SY5 Y细胞内的表达 ,本研究应用下述方法 :PCR扩增 α-synuclein基因并消除终止密码子 ;PCR产物连入 p GEM T-easy载体 ,经测序确认无误后 ,亚克隆入 p EGFP-N1,构建α-synucle-in-p EGF P真核表达载体 ;Lipofect AMINE法转染 SH-SY5 Y细胞 ;荧光显微镜检测报告基因表达产物 EGFP,原位杂交和免疫荧光细胞化学法检测α-synuclein m RNA及其蛋白表达。结果显示 ,该载体转染 SH-SY5 Y细胞后 ,可在细胞内观察到报告基因和目的基因的表达产物。结论 :α-synuclein-p EGFP真核表达载体构建成功 ,并可在细胞内表达。本工作为今后动态观察研究α-synu-clein致 展开更多
关键词 Α-SYNUCLEIN PEGFP 原位杂交 真核表达载体 绿色荧光蛋白 荧光免疫细胞化学 SH—SY5Y细胞
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荧光逆行追踪结合离体固定脑片细胞内Lucifer Yellow染色和荧光免疫组化──共聚焦激光扫描显微镜观察 被引量：1
3
作者 李岩 高文军 郑则慧 《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 1997年第3期209-214,共6页
本文介绍一种由多种方法组合的技术，包括荧光素（FastBlae）逆行追踪．离体固定脑片细胞内LuciferYellow染色、荧光免疫组织化学染色和共聚焦激光扫描显微镜观察。通过这项组合技术．可以在1μm厚度的光学切片和连续光学切片三维重构... 本文介绍一种由多种方法组合的技术，包括荧光素（FastBlae）逆行追踪．离体固定脑片细胞内LuciferYellow染色、荧光免疫组织化学染色和共聚焦激光扫描显微镜观察。通过这项组合技术．可以在1μm厚度的光学切片和连续光学切片三维重构图象中同时显示传出神经元的结构和免疫阳性传入纤维及其终未．进而可判断两种成分之间的联系。在单细胞水平的突触学研究中．此项技术提供了一个简单、有效的定性和初步定量相结合的实验方法． 展开更多
关键词 荧光逆行追踪 离体固定脑片 细胞染色 扫描电镜
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