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FDA-PI双色荧光法检测蓝藻细胞活性的研究 被引量:24
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作者 谌丽斌 梁文艳 +3 位作者 曲久辉 解明曙 雷鹏举 刘会娟 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期554-557,共4页
对FDA-PI双色荧光法检测水华鱼腥藻和铜绿微囊藻的活性进行了研究,用荧光显微镜对染色结果进行测定.结果表明,在蓝色光激发下(495nm),活细胞被双醋酸荧光素FDA染成亮绿色,死亡细胞被碘化丙锭PI染成红色.染色效率与原植体类型和细胞密度... 对FDA-PI双色荧光法检测水华鱼腥藻和铜绿微囊藻的活性进行了研究,用荧光显微镜对染色结果进行测定.结果表明,在蓝色光激发下(495nm),活细胞被双醋酸荧光素FDA染成亮绿色,死亡细胞被碘化丙锭PI染成红色.染色效率与原植体类型和细胞密度有关.对细胞密度为6×107—7×109个·l-1的铜绿微囊藻,FDA染色效率可达94%以上.对细胞密度为4×107—5×108个·l-1的水华鱼腥藻,FDA染色效率可达91%以上,但细胞密度增大到5×109个·l-1时,由于藻丝体易卷曲在一起,FDA染色率下降到67%.对死亡细胞,PI染色率基本都可达到100%.因此,用FDA-PI检测活细胞和死亡细胞混合的细胞悬液,可根据细胞所发出的不同荧光而判断细胞活性. 展开更多
关键词 蓝藻细胞 活性 荧光染色 双醋酸荧光素 碘化丙锭 细胞活性 荧光法 检测 双色 铜绿微囊藻 水华鱼腥藻 细胞密度 染色效率 蓝藻
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滇重楼的花粉活力测定方法比较 被引量:18
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作者 王定康 孙桂芳 +2 位作者 郭志明 王荔芳 岑晓江 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第35期11451-11451,11453,共2页
[目的]为提高滇重楼的繁殖效率。[方法]将滇重楼开花植株裂开花药的花粉轻轻涂抹载玻片上,分别用碘-碘化钾(I2!KI)染色法、氯化三苯四氮唑(TTC)染色法、醋酸洋红染色法和略有改动的荧光素二醋酸酯法对滇重楼花粉活力进行测定。[结果]氯... [目的]为提高滇重楼的繁殖效率。[方法]将滇重楼开花植株裂开花药的花粉轻轻涂抹载玻片上,分别用碘-碘化钾(I2!KI)染色法、氯化三苯四氮唑(TTC)染色法、醋酸洋红染色法和略有改动的荧光素二醋酸酯法对滇重楼花粉活力进行测定。[结果]氯化三苯基四氮唑染色法的染色率较低,仅为27.51%;醋酸洋红染色法和荧光素二醋酸酯法的染色率较高,分别为91.30%和90.55%,而且所测数据较为接近;碘-碘化钾染色法虽然能将花粉染上色,染色率为94.80%,但染上色的花粉包含退化的花粉和失活的花粉。[结论]醋酸洋红染色法和荧光素二醋酸酯染色法的染色率较高,能较好地区分出有活力的花粉和失活的花粉,而且能较为准确地反映滇重楼花粉的生活力。 展开更多
关键词 滇重楼 花粉活力 荧光素二醋酸酯 染色率
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痛泻要方对肝气乘脾泄泻小鼠肠道微生物活度的影响 被引量:12
3
作者 唐圆 吴仪 +1 位作者 惠华英 谭周进 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2020年第1期17-20,共4页
目的探讨痛泻要方对肝气乘脾泄泻小鼠肠道微生物活度的影响,为痛泻要方通过调节肠道微生物治疗肝气乘脾泄泻提供实验基础和理论依据。方法将25只SPF级雄性昆明小鼠随机分为正常组10只和模型组15只,造模成功后,随机选取正常组和模型组动... 目的探讨痛泻要方对肝气乘脾泄泻小鼠肠道微生物活度的影响,为痛泻要方通过调节肠道微生物治疗肝气乘脾泄泻提供实验基础和理论依据。方法将25只SPF级雄性昆明小鼠随机分为正常组10只和模型组15只,造模成功后,随机选取正常组和模型组动物各5只,在无菌环境下提取肠道内容物和肠黏膜,剩余模型动物随机分为自然恢复组和治疗组各5只,治疗成功后处死各组动物提取肠道内容物和肠黏膜。用荧光素二乙酸法测定各样品中微生物活度。结果肝气乘脾泄泻造模小鼠肠道内容物微生物活度高于正常组,与正常组相比差异有统计学意义(P=0.01),而模型组小鼠肠黏膜微生物活度降低,与正常组相比差异有统计学意义(P=0.01)。痛泻要方治疗组和自然恢复组小鼠肠道内容物微生物活度均降低,与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05),治疗组和自然恢复组小鼠的肠黏膜前段和后段均与正常组差异有统计学意义(P=0.001),肠黏膜中段自然恢复组与正常组差异有统计学意义(P=0.043),而治疗组与正常组没有差异。结论肝气乘脾泄泻造模使肠道内容物微生物活度增加,而使肠黏膜微生物活度降低。痛泻要方能够使肝气乘脾泄泻小鼠肠道内容物中微生物活度降低,恢复至正常水平,增加肠黏膜中段微生物活度,对肠黏膜后段微生物活度增加作用更显著。 展开更多
关键词 痛泻要方 肝气乘脾泄泻 肠道微生物活度 荧光素二乙酸
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适合海洋微藻活体染色的方法评价 被引量:6
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作者 王帅 张波 +4 位作者 赵昔龙 程明娇 曹为 徐希媛 郑立 《海洋科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期321-330,共10页
为了评估一种快速简单用以确定海洋微藻细胞活性的技术,针对船舶压载水中常见的3个门类中11种10~50μm单细胞微藻用中性红(NR)、5-氯甲基荧光素二乙酸酯(CMFDA)、荧光素二乙酸酯(FDA)三种染料进行染色,通过光镜和荧光显微镜对染色结果... 为了评估一种快速简单用以确定海洋微藻细胞活性的技术,针对船舶压载水中常见的3个门类中11种10~50μm单细胞微藻用中性红(NR)、5-氯甲基荧光素二乙酸酯(CMFDA)、荧光素二乙酸酯(FDA)三种染料进行染色,通过光镜和荧光显微镜对染色结果进行测定。结果表明,NR(中性红)是检测本实验中全部海洋微藻藻株细胞活性的最佳染料,染色最佳浓度为1/10 000,染色时间为30min;5-氯甲基荧光素二乙酸酯(CMFDA)、荧光素二乙酸酯(FDA)和双荧光染色对海洋微藻藻株活细胞着色时间短,染色效果明显,但其应用具有局限性,适用于检测本实验中甲藻门(塔玛亚历山大藻、链状亚历山大藻、微小原甲藻、利玛原甲藻、东海原甲藻、米氏凯伦藻)和绿藻门(青岛大扁藻和杜氏盐藻)的活性,染色最佳浓度为5μmol/L FDA+2.5μmol/L CMFDA,染色时间为10min,但不适用于检测硅藻门的细胞活性。因此,中性红更适合检测船舶压载水中微藻活细胞,根据光镜下微藻细胞着色情况而判断细胞活性。 展开更多
关键词 海洋微藻 活体着色 中性红 5-氯甲基荧光素二乙酸酯 荧光素二乙酸酯 船舶压载水
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流式细胞术检测胞内重组耻垢分枝杆菌的活力研究 被引量:4
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作者 何子纯 李升锦 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2011年第8期689-691,695,共4页
目的建立一种快速检测胞内分枝杆菌活力的方法。方法将一定量培养至对数生长期的含pMV-eis的重组耻垢分枝杆菌感染U937巨噬细胞,以含空质粒的耻垢分枝杆菌为对照,吞噬作用2 h后洗去胞外细菌,再分别培养4、12、24和48 h后收集细胞并裂解... 目的建立一种快速检测胞内分枝杆菌活力的方法。方法将一定量培养至对数生长期的含pMV-eis的重组耻垢分枝杆菌感染U937巨噬细胞,以含空质粒的耻垢分枝杆菌为对照,吞噬作用2 h后洗去胞外细菌,再分别培养4、12、24和48 h后收集细胞并裂解之。获得的胞内细菌用FDA荧光染料染色后用流式细胞仪检测死亡率,并与平板菌落计数法进行比较。结果流式细胞仪检测出感染12 h后重组耻垢分枝杆菌胞内死亡率较对照组均有显著下降(P<0.05),流式细胞仪检测法与平板菌落计数法相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论流式细胞术与传统的平板计数法相比具有快速、敏感、方便的特点,可用于分枝杆菌活菌快速检测。 展开更多
关键词 重组耻垢分枝杆菌 eis基因 流式细胞仪 平板菌落计数法 乙酰乙酸荧光素
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Synergistic Effect of the Methanolic Extract of Lemongrass and Some Antibiotics to Treat Urinary Tract Bacteria 被引量:1
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作者 Samah Noor 《Journal of Biosciences and Medicines》 2016年第11期48-58,共12页
Some medicinal plants are used traditionally in Saudi Arabia to treat many bacterial infections. Three plants, lemongrass (Oymbopogon citrates), lantana (Lantana cama-ra), and wild olive leaves (Olea europaea) were co... Some medicinal plants are used traditionally in Saudi Arabia to treat many bacterial infections. Three plants, lemongrass (Oymbopogon citrates), lantana (Lantana cama-ra), and wild olive leaves (Olea europaea) were collected, identified, extracted with either hot water or organic solvents (methanol, diethyl ether, ethyl acetate and n-butanol) to investigate their antibacterial activities against E. coli. The methanol ex-tracts of lemongrass, lantana and olive showed the highest activities against Esherichia coil while aqueous extract exhibited the lowest activities. Thus, the antibacterial activities of the methanolic extract of the three tested plants were determined using agar well diffusion method against some bacterial pathogens, isolated from urine samples. The highest antibacterial activity was recorded for themethanolic extract of lemongrass against all tested bacteria, E. coli, K. pneumoniae, P. aeuroginosa, P. mirabilis, E. faecalis and S. aureus. The tested bacteria differed with regard to their susceptibility to plant extracts. Lemongrass was the most active extract followed by lantana and wild olive extracts. Minimal inhibitory concentrations (MICs) of the methanolic extract of Lemongrass and some used antibiotics, Erythromycin, Tetracycline, Amoxicillin, Ciprofloxacin and Chloramphenicol were determined usingfluorescein diacetate method. Synergistic effect of the methanolic extract of lemongrass with the previous antibiotics against the tested clinical bacterial isolates was determined and the Fractional inhibitory concentrations (FIC) of different combination of the extract and the antibiotics were determined. FIC index (FICI) was calculated and it was ranged from 0.08 - 0.98. The interaction between the tested plant extract and the tested antibiotics was either synergistic or additive effects and no antagonistic effect was recorded. In conclusion, methanolic extract of lemongrass singly or in combination with some antibiotics can be used to treat pathogenic bacteria that cause urinary tract infecti 展开更多
关键词 Antibacterial Activities fluorescein diacetate MIC METHANOL LEMONGRASS ANTIBIOTICS
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荧光素二乙酸酯荧光微孔板法在细胞活力测定中的应用 被引量:3
7
作者 陈熙 杨秀颖 +1 位作者 方莲花 杜冠华 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期710-714,共5页
目的评估荧光素二乙酸酯(FDA)微孔板检测法在细胞活力测定中的应用。方法培养板接种细胞,加入FDA孵育一定时间,多功能微板分析仪测定荧光值。评价FDA孵育时间、浓度及其他影响因素对检测精确度的影响,并与四甲基偶氮唑盐(MTT)方法在... 目的评估荧光素二乙酸酯(FDA)微孔板检测法在细胞活力测定中的应用。方法培养板接种细胞,加入FDA孵育一定时间,多功能微板分析仪测定荧光值。评价FDA孵育时间、浓度及其他影响因素对检测精确度的影响,并与四甲基偶氮唑盐(MTT)方法在H2O2损伤及细胞数量的检测方面进行比较。结果随着孵育时间的延长,荧光值与细胞数的相关系数随之增加,27-30 min时可达到0.99。FDA终浓度在10-30μg/ml时,荧光值与细胞数的相关系数较高。在H2O2损伤模型检测中,与四甲基偶氮唑盐相比,FDA在H2O2高浓度时相关性更强。结论 FDA法检测细胞活力稳定可靠,适用于多种条件下的细胞活力检测及药理学研究。 展开更多
关键词 荧光素二乙酸酯 荧光 微孔板检测 细胞活力 四甲基偶氮唑盐 细胞毒
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高纯度荧光素钠的制备工艺研究
8
作者 高乾善 高光杰 +1 位作者 胡建强 李福伟 《山东科学》 CAS 2009年第2期43-45,共3页
本文介绍了一种制备高纯度荧光素钠的新工艺。利用荧光素钠盐在DMF中与乙酰氯酰化,得到荧光素二乙酸酯。荧光素二乙酸酯的易结晶性可使杂质得以分离,再经过皂化、酸化、成盐的过程制得高纯度的荧光素钠。与常规工艺比较,该工艺具有产率... 本文介绍了一种制备高纯度荧光素钠的新工艺。利用荧光素钠盐在DMF中与乙酰氯酰化,得到荧光素二乙酸酯。荧光素二乙酸酯的易结晶性可使杂质得以分离,再经过皂化、酸化、成盐的过程制得高纯度的荧光素钠。与常规工艺比较,该工艺具有产率高、纯化效果好的特点。产品纯度大于99%,产率大于78%。 展开更多
关键词 纯化 制备 荧光素二乙酸酯 荧光素钠
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贝类精子质量检测与评价方法的研究Ⅲ:FDA-PI双荧光复染法检测马氏珠母贝精子的存活率 被引量:1
9
作者 豆伟 王梅芳 +1 位作者 郑娇 余祥勇 《广东海洋大学学报》 CAS 2012年第1期59-63,共5页
将马氏珠母贝新鲜精液和精子水浴致死精液配制含有不同精子死亡率(0%、20%、40%、60%、80%)的5浓度梯度检测样品,并作为理论精子死亡率,采用二乙酰荧光素(Fluorescein diacetate,FDA)-碘化丙啶(Propidium iodide,PI)双荧光复染法检测精... 将马氏珠母贝新鲜精液和精子水浴致死精液配制含有不同精子死亡率(0%、20%、40%、60%、80%)的5浓度梯度检测样品,并作为理论精子死亡率,采用二乙酰荧光素(Fluorescein diacetate,FDA)-碘化丙啶(Propidium iodide,PI)双荧光复染法检测精子存活率和质膜完整性。结果表明,FDA和PI能有效区分活精子和死精子,活精子发出绿色荧光,死精子发出红色荧光。各样品实测精子死亡率和理论死亡率之间呈极显著正相关,相关系数r=0.99(p<0.01)。FDA-PI双荧光复染法检测马氏珠母贝精子存活率,灵敏度高,重复性好,准确有效。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 精子 活精率 二乙酰荧光素 碘化丙锭
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离体胎大脑皮质细胞存活时间的观察 被引量:1
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作者 张峰 祁岩超 +4 位作者 卢发根 卜夏 张鹏远 王燕房 苏芳忠 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 1994年第3期98-99,共2页
取12例胎龄为16~26周的死胎大脑皮质,用机械分离法制成细胞悬液,二乙酸荧光素摄取试验和台盼蓝排斥试验检测细胞活度。结果显示,胎儿离体1小时时,胎龄为16~20周的胎脑皮质细胞活度为48.38%,21~24周的为3... 取12例胎龄为16~26周的死胎大脑皮质,用机械分离法制成细胞悬液,二乙酸荧光素摄取试验和台盼蓝排斥试验检测细胞活度。结果显示,胎儿离体1小时时,胎龄为16~20周的胎脑皮质细胞活度为48.38%,21~24周的为38.71%,25~26周的为29.92%。随离体时间延长,细胞活度逐渐下降,在保存温度为37℃时更明显。笔者建议,做胎脑皮质组织及细胞移植时,供体胎龄以16~20周为宜,供体离开母体至移植的时间应控制在2小时内,愈早愈好,胎脑保存温度以4℃为宜。 展开更多
关键词 胎脑移植 细胞活度 二乙酸荧光素 体外
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流式细胞术鉴定结核分枝杆菌利福平异质性耐药可行性分析
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作者 李华 王伟亮 +5 位作者 谢贝 杨瑜 孟繁荣 王楠 刘志辉 张言斌 《检验医学》 CAS 2022年第6期577-582,共6页
目的探讨流式细胞术(FCM)检测结核分枝杆菌(MTB)利福平(RFP)异质性耐药的可行性。方法将MTB临床分离株分别用12.5、25、50和100μg/mL RFP处理3、7和10 d后,用荧光素双醋酸酯(FDA)染色,采用FCM检测其平均荧光强度(MFI),计算敏感指数(实... 目的探讨流式细胞术(FCM)检测结核分枝杆菌(MTB)利福平(RFP)异质性耐药的可行性。方法将MTB临床分离株分别用12.5、25、50和100μg/mL RFP处理3、7和10 d后,用荧光素双醋酸酯(FDA)染色,采用FCM检测其平均荧光强度(MFI),计算敏感指数(实验管MFI/对照管MFI),并进行差异性分析。确定不影响RFP耐药MTB临床分离株生长、但抑制RFP敏感MTB临床分离株生长的RFP处理浓度和时间。将30株RFP敏感MTB临床分离株和30株RFP耐药MTB临床分离株菌液混合,得到RFP耐药MTB所占比例分别为0%、25%、50%、75%和100%的RFP异质性耐药MTB菌液,按照确定的RFP浓度和时间处理,计算FDA染色后的敏感指数。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估不同比例RFP异质性耐药MTB菌液的敏感指数界值和检测性能。结果基于FDA的FCM检测MTB RFP异质性耐药的较优RFP处理浓度为50μg/mL,作用时间为10 d;用50μg/mL RFP处理MTB 10 d时,基于FDA的FCM鉴别含0%、25%和100%的RFP异质性耐药MTB菌液样本的敏感指数界值分别为0.48和0.83,敏感性分别为96.2%和86.7%,特异性分别为96.7%和83.3%;处理14 d时,该方法鉴别含0%、25%和100%RFP异质性耐药MTB菌液样本的敏感指数界值分别为0.37和0.77,敏感性分别为96.7%和96.7%,特异性分别为93.3%和86.7%。结论FCM在MTB异质性耐药检测中具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 流式细胞术 结核分枝杆菌 利福平异质性耐药 荧光素双醋酸酯
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应用流式细胞术鉴定结核分枝杆菌利福平敏感性的研究 被引量:1
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作者 谢贝 孟繁荣 +9 位作者 李华 刘志辉 王伟亮 王楠 邓丽 吴玲 雷杰 杨瑜 牛群 张言斌 《国际医药卫生导报》 2019年第11期1692-1697,共6页
目的 探究流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)利福平(Rifampicin,RFP)药物敏感性的可行性。方法 对结核分枝杆菌临床分离全敏株与耐RFP株菌悬液用12.5μg/ml、25.0μg/ml、50.0μg/ml、10... 目的 探究流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)利福平(Rifampicin,RFP)药物敏感性的可行性。方法 对结核分枝杆菌临床分离全敏株与耐RFP株菌悬液用12.5μg/ml、25.0μg/ml、50.0μg/ml、100.0μg/ml的RFP液作用3 d、7 d或10 d后,经荧光素双醋酸酯(Fluorescein diacetae,FDA)染色;1.56μg/ml、6.25μg/ml、25.00μg/ml、100.00μg/ml的RFP液作用1 d、3 d、7 d后经碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色,采用FCM检测其平均荧光强度(Meanfluorescence intensity,MFI)值,并计算其敏感指数(实验管MFI/对照管MFI),依据受试者工作曲线(Receiveroperating characteristic curve,ROC)统计各药物浓度及处理时间下FCM FDA鉴定MTB RFP敏感性的诊断性能,选定基于FDA和PI的FCM法鉴别MTB RFP敏感性的最佳条件与区分MTB RFP敏感或耐药的敏感指数界值。分别对95株和78株MTB临床分离株进行基于FDA和PI的FCM药物敏感性测定并与比例法药敏实验进行比较。结果 基于FDA的FCM检测MTB RFP敏感性的最佳条件是12.5μg/ml的RFP处理7 d,敏感指数界值为0.75,检测结果准确度为88.4%,灵敏度为90.2%,特异度为87.0%,与比例法比较差异无统计学意义(χ^2=0.364,P=0.549)。基于PI的FCM检测,MTB RFP敏感性的最佳条件是1.56μg/ml的RFP处理1 d,敏感指数界值为1.12,检测结果准确度为84.6%,灵敏度为85.7%,特异度为83.7%,与比例法比较差异无统计学意义(χ^2=0.083,P=0.774 5)。结论 基于FDA或PI的FCM法均可应用于MTB临床分离株的RFP敏感性检测。 展开更多
关键词 流式细胞术 结核分枝杆菌 利福平 碘化丙啶 荧光素双醋酸酯
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荧光测定法体外快速筛选抗肿瘤活性物质的研究
13
作者 叶松华 王晓燕 +2 位作者 董晓丽 冯夏珍 杨莹莹 《山西中医学院学报》 2017年第6期31-33,36,共4页
目的:建立一种基于FDA荧光信号的体外快速筛选抗肿瘤活性物质的方法。方法:通过筛选合适的FDA浓度,建立了荧光测定法,并对该方法进行了线性范围和精密度的考察以及可靠性验证。应用本方法对两种药用植物的抗肿瘤活性部位进行了初筛。结... 目的:建立一种基于FDA荧光信号的体外快速筛选抗肿瘤活性物质的方法。方法:通过筛选合适的FDA浓度,建立了荧光测定法,并对该方法进行了线性范围和精密度的考察以及可靠性验证。应用本方法对两种药用植物的抗肿瘤活性部位进行了初筛。结果:该方法在68~1.5×10~4个/孔的范围内,荧光信号强度与细胞数之间具有良好的线性关系(R^2=0.996 7),板内精密度为10.9%。应用本方法检测得到盐酸阿霉素抑制MCF-7细胞增殖的IC_(50)值为3.04μg/mL,说明本方法用于抗肿瘤活性物质筛选是准确可靠的。经过本方法的筛选,获得了沙煲暗罗茎乙酸乙酯部位、沙煲暗罗茎石油醚部位和海南染木树石油醚部位抑制MCF-7细胞增殖的IC_(50)值分别为134.1μg/mL、78.46μg/mL和86.87μg/mL。结论:本方法快速、灵敏、细胞线性范围宽,可用于天然产物抗肿瘤活性物质的体外快速高通量筛选。 展开更多
关键词 荧光 抗肿瘤 二乙酸荧光素 天然产物
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陕北关中地区大豆胞囊线虫生理小种鉴定及植物寄生线虫染色方法改进
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作者 李爽 张明君 +5 位作者 杭程远 师瑜倩 杨倩 杜娟 张强 梁福琴 《陕西农业科学》 2021年第5期48-51,共4页
为了解陕北和关中地区大豆胞囊线虫分布情况以及生理小种类型,对该地区大豆田中的土壤进行取样调查。分别根据形态特征、大豆胞囊线虫鉴别寄主确定胞囊线虫种类以及生理小种类型。形态学鉴定,陕北和关中地区检测到的胞囊线虫均为大豆胞... 为了解陕北和关中地区大豆胞囊线虫分布情况以及生理小种类型,对该地区大豆田中的土壤进行取样调查。分别根据形态特征、大豆胞囊线虫鉴别寄主确定胞囊线虫种类以及生理小种类型。形态学鉴定,陕北和关中地区检测到的胞囊线虫均为大豆胞囊线虫;其生理小种为3号。此外,改进植物寄生线虫染色方法,利用荧光素二乙酸盐浸泡法对大豆胞囊线虫染色,在特定的情况下可以替代常用的酸性品红染色,减少样品制备次数,节省制备样品的时间,提高实验效率。 展开更多
关键词 大豆胞囊线虫 生理小种 染色 荧光素二乙酸盐
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鸡囊胚细胞冷冻损伤的评价方法
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作者 王坤 燕海峰 +3 位作者 曲湘勇 何俊 王庆桥 蒋隽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1065-1070,共6页
采用滤纸环法分离鸡囊胚细胞(blastodermal cells,BCs),冷冻复苏后使用二乙酰荧光素(fluorescein diacetate,FDA)测定细胞活率,以及培养24h测定细胞贴壁率简称"贴壁率法",探究2种方法在不同冷冻程序优化试验中对细胞冷冻损伤... 采用滤纸环法分离鸡囊胚细胞(blastodermal cells,BCs),冷冻复苏后使用二乙酰荧光素(fluorescein diacetate,FDA)测定细胞活率,以及培养24h测定细胞贴壁率简称"贴壁率法",探究2种方法在不同冷冻程序优化试验中对细胞冷冻损伤的评价效果。结果显示,FDA染色法与贴壁率法在冷冻保护剂浓度优化、冷冻及解冻速率优化试验中对细胞冷冻损伤的评价结果差异不显著(P>0.05),相关性很好,但也有一定差异;不同冷冻剂浓度优化试验中,5%DMSO冷冻保护液有细胞活率,但无贴壁现象;投入液氮温度对比试验中,-35℃以后,随着投入温度的降低,细胞活率略微升高,但贴壁率呈较明显的下降趋势。因此,2种方法均适合鸡BCs冷冻损伤评价,但贴壁率法能给出更多关于细胞状况的信息,评价结果更加真实可靠。 展开更多
关键词 囊胚细胞 冷冻损伤 FDA荧光染色 细胞贴壁率
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紫花苜蓿改良盐渍土对土壤微生物活性和养分含量的影响 被引量:24
16
作者 元炳成 《生态环境学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期415-419,共5页
为探讨干旱地区种植紫花苜蓿改良盐渍土对土壤微生物生物量及其活性和土壤养分的影响,选择河西走廊黑河流域国有临泽农场的草甸盐土荒地作为对照,研究了种植紫花苜蓿2、3、4年后的改土效果。结果表明:与CK相比,连续种植4年后,所测定的... 为探讨干旱地区种植紫花苜蓿改良盐渍土对土壤微生物生物量及其活性和土壤养分的影响,选择河西走廊黑河流域国有临泽农场的草甸盐土荒地作为对照,研究了种植紫花苜蓿2、3、4年后的改土效果。结果表明:与CK相比,连续种植4年后,所测定的土壤化学性质和微生物化学性质指标都发生了极显著(P<0.01)的有利变化,电导率下降5.96 mS.cm-1,pH下降0.25,有机碳增加1.50 g.kg-1,微生物生物量碳增加48.93 mg.kg-1,微生物熵上升0.43%,荧光素二乙酸酯水解率提高10.87μg.g-1.h-1,碱解氮增加17.37 mg.kg-1,速效磷增加2.87 mg.kg-1,速效钾增加44.93 mg.kg-1。相关分析表明,微生物生物量碳、微生物熵、荧光素二乙酸酯水解率、碱解氮、速效磷、速效钾与土壤有机碳之间极显著(P<0.01)正相关,相关系数分别为0.86、0.80、0.87、0.85、0.79、0.80,而与电导率之间极显著(P<0.01)负相关,相关系数分别为-0.83、-0.79、-0.84、-0.86、-0.88、-0.78。研究认为,种植紫花苜蓿对草甸盐土有显著的改良效果,电导率下降,有机碳含量提高,微生物活性增强,速效养分含量增加。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 电导率 微生物生物量碳 微生物熵 荧光素二乙酸酯水解率 速效养分
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长期施肥土壤的FDA水解酶活性 被引量:20
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作者 马星竹 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期451-455,共5页
以长期不同施肥处理土壤为研究对象,运用荧光素二乙酸酯(FDA)为底物,采用分光光度法测定土壤FDA水解酶活性.结果表明:在黑土和棕壤上有机肥配施化肥处理的FDA水解酶活性增幅较大,相对于不施肥处理分别增加68.8%和72.4%,也显著高于单施... 以长期不同施肥处理土壤为研究对象,运用荧光素二乙酸酯(FDA)为底物,采用分光光度法测定土壤FDA水解酶活性.结果表明:在黑土和棕壤上有机肥配施化肥处理的FDA水解酶活性增幅较大,相对于不施肥处理分别增加68.8%和72.4%,也显著高于单施化肥处理;土壤FDA水解酶活性与土壤微生物量碳具有极显著的正相关关系,在黑土和棕壤中相关系数分别为0.912**和0.871**;FDA水解酶活性能较好地反映微生物活性,可以作为评价土壤微生物量和活性的重要指标;同时,土壤FDA水解酶与参与C、N、P、S等重要养分循环的酶活性关系密切,均达到极显著水平. 展开更多
关键词 长期施肥 荧光素二乙酸酯(FDA) FDA水解酶 微生物量碳
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FDA-PI双色荧光分光光度法检测细胞活性变化 被引量:12
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作者 祁爱群 钱凯先 +2 位作者 邵健忠 严庆丰 施沁清 《细胞生物学杂志》 CSCD 2000年第1期50-52,F003,共4页
本文建立了FDA-PI双色荧光分光光度法来推测细胞活性的变化,通过图谱初步地观察,进一步测定荧光测值,可以定性和定量地进行分析,此方法简便易行,直观,为测量细胞活性的变化提供一种良好的新方法。
关键词 细胞活性 FDA-PI双色荧光分光光度法 测定
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基于FDA-PI双荧光复染法的茄病镰刀菌孢子活性检测 被引量:13
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作者 柴阿丽 韩云 +3 位作者 武军 石延霞 谢学文 李宝聚 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期2757-2766,共10页
【目的】茄病镰刀菌(Fusarium solani)孢子活性的检测是病害有效防控的基础。传统的孢子萌发法操作复杂,耗时费力,需要建立一种简便、快速的孢子活性检测方法。研究旨在建立基于荧光素二乙酸酯(fluorescein diacetate,FDA)-碘化丙啶(pro... 【目的】茄病镰刀菌(Fusarium solani)孢子活性的检测是病害有效防控的基础。传统的孢子萌发法操作复杂,耗时费力,需要建立一种简便、快速的孢子活性检测方法。研究旨在建立基于荧光素二乙酸酯(fluorescein diacetate,FDA)-碘化丙啶(propidium iodide,PI)双荧光复染法和流式细胞术(flow cytometry,FCM)的茄病镰刀菌孢子活性检测技术。【方法】通过测定FDA和PI的最佳染色时间和最佳工作浓度,建立茄病镰刀菌孢子活性检测的FDA-PI复染法。为评价该方法的准确性,一方面用FDA-PI法检测已知死孢子比例(0、25%、50%、75%、100%)的茄病镰刀菌样品,分析实测死亡率和理论死亡率的相关性;另一方面,经物理、化学和杀菌剂处理后,比较FDA-PI复染法和孢子萌发法的检测结果。【结果】确定了FDA和PI的最佳染色参数,其中PI的最佳工作浓度为3μg·m L-1,最佳染色时间为4℃处理10 min;FDA的最佳工作浓度为100μg·m L-1,最佳染色时间为25℃处理20 min。用该技术检测已知死孢子比例样品,各样品实测孢子死亡率和理论死亡率之间呈极显著正相关(R2=0.99,P<0.05)。经物理和化学处理后,FDA-PI复染法测得的孢子死亡率与孢子萌发法测得的孢子萌发率之间也呈显著负相关(R2=0.99,P<0.05)。经杀菌剂处理后,随着药剂浓度增高,对茄病镰刀菌杀灭效果增强。其中,氰胺化钙处理后,FDA-PI复染法和孢子萌发法检测孢子死亡率结果一致;而咯菌腈和多菌灵处理后,FDA-PI复染法检测孢子死亡率略低于孢子萌发法检测结果。【结论】建立了基于FDA-PI复染法和流式细胞术的茄病镰刀菌孢子活性检测技术,该技术可以替代传统的孢子萌发方法,大幅度缩减病原菌活性检测时间,提高检测效率,对植物病原真菌活性检测平台的建立具有重要的参考价值,将其应用于杀菌剂的筛选还需要进一步的深入研究。 展开更多
关键词 荧光素二乙酸酯 碘化丙啶 荧光染色 流式细胞术 茄病镰刀菌 活性分析
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三种漱口液对早期原位菌斑生物膜形成的影响 被引量:12
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作者 鲁纯 李松 +3 位作者 李谨 王娟 胡凡 陈武 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期372-375,共4页
目的:应用口内牙菌斑生物膜模型评估替硝唑漱口液、西吡氯铵漱口液与氯己定漱口液对早期原位牙菌斑生物膜形成的影响。方法:在专业洁治后,志愿者佩戴一种上颌装置,6个玻璃片置于装置内以形成口内菌斑生物膜。志愿者用指定漱口液每天漱口... 目的:应用口内牙菌斑生物膜模型评估替硝唑漱口液、西吡氯铵漱口液与氯己定漱口液对早期原位牙菌斑生物膜形成的影响。方法:在专业洁治后,志愿者佩戴一种上颌装置,6个玻璃片置于装置内以形成口内菌斑生物膜。志愿者用指定漱口液每天漱口2次,每次15ml含漱1min。48h后样本从装置中移出,立即用2种荧光染料染色,分别将死菌染成红色,活菌染成绿色,在激光共聚焦显微镜下观察,进行三维扫描,评估菌斑生物膜的厚度和活菌比率。在14d洗脱期后,再应用另一种漱口液。结果:与清水相比,3种漱口液作用下的48h菌斑生物膜平均厚度及平均活菌比率均有显著降低(P<0.001),且3组之间有显著差异(P<0.05)。结论:对于早期原位菌斑生物膜,3种漱口液均显示有抑制菌斑形成及抗菌的作用。 展开更多
关键词 菌斑生物膜 替硝唑 西吡氯铵 氯己定 激光共聚焦显微镜 二乙酸荧光素/溴化乙锭
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