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芸薹属类黄酮3′-羟化酶基因家族RNA干扰载体的构建 被引量：4
1
作者 陈倩 闫楠 +1 位作者 马丽娟 柴友荣 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期8-11,共4页
目的:构建芸薹属类黄酮3′羟化酶(F3′H)基因家族的RNAi载体。方法:采用PCR克隆了607bp的芸薹属F3’H基因家族的RNAi片段,将其反义片段、正义片段分别采用NcoⅠ+AatⅡ、BamHⅠ+XbaⅠ插入到改进型植物RNAi基础载体pF-GC5941M的启动子与... 目的:构建芸薹属类黄酮3′羟化酶(F3′H)基因家族的RNAi载体。方法:采用PCR克隆了607bp的芸薹属F3’H基因家族的RNAi片段,将其反义片段、正义片段分别采用NcoⅠ+AatⅡ、BamHⅠ+XbaⅠ插入到改进型植物RNAi基础载体pF-GC5941M的启动子与间隔区、间隔区与终止子之间,形成11366bp的重组载体pFGC5941M-BF3′HI(简称为pBF3′HI),复合PCR鉴定后转化根癌农杆菌,获得工程菌株。结果:载体构建成功。结论:构建了RNAi载体pBF3′HI,可用于芸薹属植物花色、种皮色泽、茎叶色彩等性状的机理研究和遗传修饰。 展开更多
关键词 芸薹属 类黄酮3′-羟化酶(f3′h) RNAI 载体
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菊花CgF3′H基因克隆及表达特性分析 被引量：2
2
作者 陈素梅 吕国胜 +5 位作者 朱喜荣 刘兆磊 管志勇 章镇 陈发棣 王丽君 《分子植物育种》 CAS CSCD 2011年第5期623-628,共6页
根据菊花花器官表达序列标签序列设计引物,采用PCR和5'-RACE技术对类黄酮3'-羟化酶(F3'H)基因进行全长cDNA克隆。克隆获得F3'HcDNA全长为1760bp,其开放阅读框(ORF)为1524bp,编码一条包含508个氨基酸残基的多肽,GenBank... 根据菊花花器官表达序列标签序列设计引物,采用PCR和5'-RACE技术对类黄酮3'-羟化酶(F3'H)基因进行全长cDNA克隆。克隆获得F3'HcDNA全长为1760bp,其开放阅读框(ORF)为1524bp,编码一条包含508个氨基酸残基的多肽,GenBank登录号为AB523844。预测该基因编码的蛋白分子式为C2535H4022N684O707S18,分子量为55.97kD,理论等电点pI为7.23。其氨基酸序列与蓝眼菊属(ABB29899.1)、紫茎泽兰(ABM46853.1)、欧亚种葡萄(ACN38268.1)和高粱(ABG54320.1)等植物的F3'H氨基酸序列的同源性分别为83.27%、80.51%、75.05%和59.96%。系统进化分析表明其与蓝眼菊属的亲缘关系最近。荧光定量PCR分析发现F3'H基因在切花菊‘H5’各个器官中均有表达,花托中表达量最高,而叶片中表达量最低。 展开更多
关键词 菊花 类黄酮3'-羟化酶(f3'h) 克隆 表达
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甘蓝型油菜F3’H基因反义植物表达载体的构建
3
作者 许本波 谢伶俐 +2 位作者 田志宏 柴友荣 李加纳 《长江大学学报（自科版）（中旬）》 CAS 2007年第3期77-79,83,共4页
类黄酮3’-羟化酶(F3’H)是类黄酮途径中的一个关键酶,对种皮色泽和花色的形成具有重要作用。通过PCR法扩增了甘蓝型油菜(Brassica napus L.)F3’H基因的一段特异保守片段F3’HA,并将其亚克隆到中间载体pCAMBIA2301G中,构建了F3’H反义... 类黄酮3’-羟化酶(F3’H)是类黄酮途径中的一个关键酶,对种皮色泽和花色的形成具有重要作用。通过PCR法扩增了甘蓝型油菜(Brassica napus L.)F3’H基因的一段特异保守片段F3’HA,并将其亚克隆到中间载体pCAMBIA2301G中,构建了F3’H反义植物表达载体pCAMBIA2301-F3’HA,通过PCR鉴定和酶切鉴定证实载体构建成功,并转化到根癌农杆菌LBA4404菌株中形成工程菌株。为进一步研究F3’H基因在甘蓝型油菜种皮色素合成途径中的分子生物学机理和该基因的代谢调控网络奠定基础。 展开更多
关键词 类黄酮3’-羟化酶 反义表达载体 甘蓝型油菜(Brassica NAPUS L.)
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芜菁的类黄酮3'羟化酶基因克隆和UV-A诱导表达特性 被引量：10
4
作者 许志茹 崔国新 +2 位作者 李春雷 孙燕 李玉花 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期931-935,共5页
用UV-A处理‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁块根24h后提取总RNA,以RT-PCR方法分别克隆到BrF3'H1和BrF3'H2基因。BrF3'H1和BrF3'H2的开放读码框为1536bp,均编码511个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BrF3'H1和BrF3'H2与... 用UV-A处理‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁块根24h后提取总RNA,以RT-PCR方法分别克隆到BrF3'H1和BrF3'H2基因。BrF3'H1和BrF3'H2的开放读码框为1536bp,均编码511个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BrF3'H1和BrF3'H2与甘蓝型油菜F3'H的同源性达99%,在第45～476的肽段含有细胞色素P450家族基因的结构域。BrF3'H1和BrF3'H2基因有高度同源性,核苷酸序列的17个位点处有差异,推导的氨基酸序列在5个位点处有差异。Northern杂交结果显示,UV-A可以诱导BrF3'H1表达,基因的表达量与UV-A处理时间呈相关,UV-A不能诱导BrF3'H2基因表达。 展开更多
关键词 芜菁 类黄酮3’羟化酶基因 基因克隆 序列分析 基因表达
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水稻类黄酮3'-羟化酶基因克隆及植物表达载体的构建 被引量：1
5
作者 刘南南 王宝琴 +2 位作者 李敏 刘雪红 管宇 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第16期149-151,共3页
参考GenBank中发布的水稻品种日本晴位于10号染色体的F3'H基因序列设计特异引物,用PCR方法从水稻基因组中克隆F3'H基因片段,并将该片段克隆到pMD18-T载体进行测序和序列分析。结果表明,克隆的F3'H基因全长1 789 bp,GenBank... 参考GenBank中发布的水稻品种日本晴位于10号染色体的F3'H基因序列设计特异引物,用PCR方法从水稻基因组中克隆F3'H基因片段,并将该片段克隆到pMD18-T载体进行测序和序列分析。结果表明,克隆的F3'H基因全长1 789 bp,GenBank登录号为HQ876708,该基因与日本晴基因组序列同源性为100%。分别将F3'H基因插入植物双元表达载体pPZP2Ha3(-)和pPZP2Ha3(+)中,获得F3'H基因正义和反义植物表达载体,同时转入根癌农杆菌中。该研究为利用农杆菌介导法转化F3'H基因,进一步研究F3'H基因功能奠定基础。 展开更多
关键词 水稻 类黄酮3'-羟化酶(f3'h)基因 PCR扩增 载体构建
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