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嗜水气单胞菌FNR的表达、纯化及酶活分析
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作者 张凯 陈湖星 +3 位作者 余金辉 严佳丽 刘德立 熊丽 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1003-1007,共5页
铁氧还蛋白还原酶(Ferredoxin-NADP+reductases,FNR)是一种在生物体的多种代谢中起着重要作用的黄素酶.为探讨嗜水气单胞菌(Aeromona s hydrophila)XS91-4-1中FNR的功能和结构,通过克隆其FNR基因,构建重组表达载体pET42a-fnr,表达并分... 铁氧还蛋白还原酶(Ferredoxin-NADP+reductases,FNR)是一种在生物体的多种代谢中起着重要作用的黄素酶.为探讨嗜水气单胞菌(Aeromona s hydrophila)XS91-4-1中FNR的功能和结构,通过克隆其FNR基因,构建重组表达载体pET42a-fnr,表达并分离纯化了具有活性的GST-FNR融合蛋白,根据米曼氏动力学测定了纯化蛋白对NADPH及EDTA-Fe3+的酶活力,采用生物信息学方法对XS91-4-1 FNR蛋白序列进行系统学分析,并初步预测了该蛋白三维结构.结果表明:重组质粒能够在宿主菌大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中获得高效可溶性表达,经镍柱亲和层析法可纯化出电泳均一的目的蛋白,蛋白浓度为67.3μg/mL;纯化蛋白对NADPH的比活力为1.78 U/mg,对EDTA-Fe3+的比活力为1.13 U/mg,比活力比粗酶分别提高了约29和22倍;生物信息学分析表明XS91-4-1 FNR分布在Bacterial-class FNR分支上且具有与此类FNR相似的结构特点.上述结果显示嗜水气单胞菌FNR具有与已报道的FNR相似的基本特性,并推测其可能属于Bacterial-class FNR. 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 铁氧还蛋白还原酶 可溶性表达 蛋白纯化 酶活 二三维结构
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