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结核分枝杆菌双重实时RT-PCR检测方法的研究
被引量：
2
1
作者
古莉冰
朱玉兰
+4 位作者
王佃鹏
董瑞玲
李微
孙杰
刘胜牙
《中国热带医学》
CAS
2012年第6期756-758,共3页
目的建立检测结核分枝杆菌mRNA表达水平的双重实时RT-PCR反应体系,准确快速鉴定结核分枝杆菌。方法根据GenBank上已发表的结核分枝杆菌表达85B抗原的fbpB mRNA基因序列,进行对比分析,设计合成fbpB引物和探针,其中探针以CY5为报告基团,B...
目的建立检测结核分枝杆菌mRNA表达水平的双重实时RT-PCR反应体系,准确快速鉴定结核分枝杆菌。方法根据GenBank上已发表的结核分枝杆菌表达85B抗原的fbpB mRNA基因序列,进行对比分析,设计合成fbpB引物和探针,其中探针以CY5为报告基团,BHQ3为淬灭基团。根据WHO文献报道合成人类RNase P基因引物和探针,其中探针以FAM为报告基团,BHQ1为淬灭基团。经条件优化后,建立检测结核分枝杆菌mRNA双重实时RT-PCR方法,在同一体系内同时扩增结核分枝杆菌fbpB基因和人类RNase P基因,通过检测10份肺结核患者痰液和10份健康无症状人群痰液,检验方法的特异性、重复性和检测限性。结果肺结核患者痰液fbpB和RNase P基因均扩增阳性,健康无症状人群痰液fbpB均无扩展曲线,RNase P均扩增阳性。重复性检测显示fbpB基因重复检测的变异系数在1%以下,fbpB检测CT值与痰涂片抗酸染色分枝杆菌的数量呈良好的相关性。结论建立了一种快速双重实时RT-PCR方法能同时对结核分枝杆菌fbpB mRNA基因和人类RNase P基因进行检测,在检测fbpBmRNA基因的同时,通过检测RNase P基因监测RNA提取效果和PCR反应扩增效果。
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关键词
结核分枝杆菌
fbpb
MRNA
RNASE
P
双重实时RT-PCR
原文传递
儿童结核病结核分枝杆菌临床分离株中esxA、fbpB、Rv2660c基因多态性研究
被引量：
2
2
作者
马廷廷
黄延风
+1 位作者
杨震华
苏薇
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第17期1768-1773,共6页
目的对抗原编码基因esxA、fbpB、Rv2660c进行测序,了解esxA、fbpB、Rv2660c的基因多态性。方法选取135株结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株,运用PCR方法扩增目的基因esx A、fbp B、Rv2660c并进行测序,与结核标准...
目的对抗原编码基因esxA、fbpB、Rv2660c进行测序,了解esxA、fbpB、Rv2660c的基因多态性。方法选取135株结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株,运用PCR方法扩增目的基因esx A、fbp B、Rv2660c并进行测序,与结核标准株H37Rv基因序列以及从免疫表位数据库(immune epitope database,IEDB)中查询到的表位序列进行对比,分析esx A、fbp B、Rv2660c基因序列中的变异特征。结果在135株菌株中,esx A、Rv2660c序列暂未发现基因变异。fbpB共66株(48.89%)发现了基因变异,5个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点共造成8个(14.81%)T细胞抗原表位以及9个(24.32%)B细胞抗原表位序列的多态性。fbpB基因的d N值为0.000 120,d S为0.002 126,其中T细胞表位区与非T细胞表位区的d N值分别为0.000 067和0.000 408,d S分别为0.002 382和0.000 470,B细胞表位区dN和dS值分别为0.000 063和0.002 380,非B细胞表位区dN和dS均为0。结论 esxA、Rv2660c基因序列较保守,fbp B存在基因多态性,预测会对蛋白Ag85B的免疫功能造成影响,从而影响H56的免疫有效性。
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关键词
结核分枝杆菌
esxA
fbpb
Rv2660c
基因多态性
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职称材料
结核分枝杆菌fbpB基因植物表达载体的构建及鉴定
被引量：
1
3
作者
蔡群芳
邬强
+4 位作者
刘珊
高新征
崔开媚
范志刚
熊燏
《海南医学院学报》
CAS
2012年第3期289-291,296,共4页
目的:构建结核分枝杆菌fbpB基因的植物表达载体,为在植物中表达该基因奠定基础。方法:以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR扩增fbpB编码基因,然后将其克隆到植物表达载体pBI121上,并进行鉴定。结果:重组载体经菌液PCR鉴定为阳...
目的:构建结核分枝杆菌fbpB基因的植物表达载体,为在植物中表达该基因奠定基础。方法:以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR扩增fbpB编码基因,然后将其克隆到植物表达载体pBI121上,并进行鉴定。结果:重组载体经菌液PCR鉴定为阳性克隆后再经双酶切鉴定可见约13kb和1kb的2条特异性条带,与预期大小相一致,测序结果表明克隆的fbpB基因序列与Genbank上公布的相一致。结论:成功构建了fbpB基因的植物表达载体,为研制和开发新型的结核疫苗打下坚实的基础。
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关键词
结核分枝杆菌
fbpb
基因
结核疫苗
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职称材料
题名
结核分枝杆菌双重实时RT-PCR检测方法的研究
被引量：
2
1
作者
古莉冰
朱玉兰
王佃鹏
董瑞玲
李微
孙杰
刘胜牙
机构
深圳国际旅行卫生保健中心
深圳市职业病防治院
出处
《中国热带医学》
CAS
2012年第6期756-758,共3页
文摘
目的建立检测结核分枝杆菌mRNA表达水平的双重实时RT-PCR反应体系,准确快速鉴定结核分枝杆菌。方法根据GenBank上已发表的结核分枝杆菌表达85B抗原的fbpB mRNA基因序列,进行对比分析,设计合成fbpB引物和探针,其中探针以CY5为报告基团,BHQ3为淬灭基团。根据WHO文献报道合成人类RNase P基因引物和探针,其中探针以FAM为报告基团,BHQ1为淬灭基团。经条件优化后,建立检测结核分枝杆菌mRNA双重实时RT-PCR方法,在同一体系内同时扩增结核分枝杆菌fbpB基因和人类RNase P基因,通过检测10份肺结核患者痰液和10份健康无症状人群痰液,检验方法的特异性、重复性和检测限性。结果肺结核患者痰液fbpB和RNase P基因均扩增阳性,健康无症状人群痰液fbpB均无扩展曲线,RNase P均扩增阳性。重复性检测显示fbpB基因重复检测的变异系数在1%以下,fbpB检测CT值与痰涂片抗酸染色分枝杆菌的数量呈良好的相关性。结论建立了一种快速双重实时RT-PCR方法能同时对结核分枝杆菌fbpB mRNA基因和人类RNase P基因进行检测,在检测fbpBmRNA基因的同时,通过检测RNase P基因监测RNA提取效果和PCR反应扩增效果。
关键词
结核分枝杆菌
fbpb
MRNA
RNASE
P
双重实时RT-PCR
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
fbpb
mRNA
RNase P
Duplex real-time PCR
分类号
R52 [医药卫生—内科学]
原文传递
题名
儿童结核病结核分枝杆菌临床分离株中esxA、fbpB、Rv2660c基因多态性研究
被引量：
2
2
作者
马廷廷
黄延风
杨震华
苏薇
机构
重庆医科大学附属儿童医院感染科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地
Department of Epidemiology
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第17期1768-1773,共6页
文摘
目的对抗原编码基因esxA、fbpB、Rv2660c进行测序,了解esxA、fbpB、Rv2660c的基因多态性。方法选取135株结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株,运用PCR方法扩增目的基因esx A、fbp B、Rv2660c并进行测序,与结核标准株H37Rv基因序列以及从免疫表位数据库(immune epitope database,IEDB)中查询到的表位序列进行对比,分析esx A、fbp B、Rv2660c基因序列中的变异特征。结果在135株菌株中,esx A、Rv2660c序列暂未发现基因变异。fbpB共66株(48.89%)发现了基因变异,5个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点共造成8个(14.81%)T细胞抗原表位以及9个(24.32%)B细胞抗原表位序列的多态性。fbpB基因的d N值为0.000 120,d S为0.002 126,其中T细胞表位区与非T细胞表位区的d N值分别为0.000 067和0.000 408,d S分别为0.002 382和0.000 470,B细胞表位区dN和dS值分别为0.000 063和0.002 380,非B细胞表位区dN和dS均为0。结论 esxA、Rv2660c基因序列较保守,fbp B存在基因多态性,预测会对蛋白Ag85B的免疫功能造成影响,从而影响H56的免疫有效性。
关键词
结核分枝杆菌
esxA
fbpb
Rv2660c
基因多态性
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
esxA
fbpb
Rv2660c
gene polymorphism
分类号
R738.911 [医药卫生—肿瘤]
R394.3 [医药卫生—临床医学]
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职称材料
题名
结核分枝杆菌fbpB基因植物表达载体的构建及鉴定
被引量：
1
3
作者
蔡群芳
邬强
刘珊
高新征
崔开媚
范志刚
熊燏
机构
海南医学院热带医学与检验医学院
海南医学院理学院
出处
《海南医学院学报》
CAS
2012年第3期289-291,296,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(31160030)
海南医学院科研培育基金(HY2010-006)~~
文摘
目的:构建结核分枝杆菌fbpB基因的植物表达载体,为在植物中表达该基因奠定基础。方法:以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR扩增fbpB编码基因,然后将其克隆到植物表达载体pBI121上,并进行鉴定。结果:重组载体经菌液PCR鉴定为阳性克隆后再经双酶切鉴定可见约13kb和1kb的2条特异性条带,与预期大小相一致,测序结果表明克隆的fbpB基因序列与Genbank上公布的相一致。结论:成功构建了fbpB基因的植物表达载体,为研制和开发新型的结核疫苗打下坚实的基础。
关键词
结核分枝杆菌
fbpb
基因
结核疫苗
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
fbpb
Tuberculosis vaccine
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌双重实时RT-PCR检测方法的研究
古莉冰
朱玉兰
王佃鹏
董瑞玲
李微
孙杰
刘胜牙
《中国热带医学》
CAS
2012
2
原文传递
2
儿童结核病结核分枝杆菌临床分离株中esxA、fbpB、Rv2660c基因多态性研究
马廷廷
黄延风
杨震华
苏薇
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
下载PDF
职称材料
3
结核分枝杆菌fbpB基因植物表达载体的构建及鉴定
蔡群芳
邬强
刘珊
高新征
崔开媚
范志刚
熊燏
《海南医学院学报》
CAS
2012
1
下载PDF
职称材料
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