目的·探究结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)在肝细胞铁死亡(ferroptosis)中的作用及机制。方法·给予8周龄的C57BL/6J雄性小鼠正常饲料(normal iron diet,NID组,n=5)和高铁饲料(high iron diet,HID组,n=8)饲喂12周后,收集2组小鼠的...目的·探究结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)在肝细胞铁死亡(ferroptosis)中的作用及机制。方法·给予8周龄的C57BL/6J雄性小鼠正常饲料(normal iron diet,NID组,n=5)和高铁饲料(high iron diet,HID组,n=8)饲喂12周后,收集2组小鼠的肝脏和血清。利用血清学生化指标、肝脏苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,H-E)染色、天狼星红染色、普鲁士蓝染色和4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)染色明确2组小鼠肝脏损伤、病理学改变、纤维化、铁沉积和脂质过氧化反应程度;利用RNA测序(RNAsequencing,RNA-seq)技术和生物信息学分析高铁饮食对小鼠肝脏转录组表达的调控,并筛选新的调控铁死亡的候选基因。在AML-12小鼠肝细胞中过表达Hp或利用siRNA敲减Hp后,给予铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3(RAS-selective lethal small molecule 3,RSL3)和/或细胞外信号调节激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)活性抑制剂SCH772984,利用细胞计数、real-time PCR和C11-BODIPY581/591免疫荧光及流式细胞术等实验明确Hp在肝细胞铁死亡中的作用及机制。结果·相较于NID组小鼠,HID组小鼠血清中谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)和谷草转氨酶(glutamic-oxalacetic transaminase,GOT)水平明显升高,肝脏出现明显的肝细胞死亡、纤维化、铁沉积和脂质过氧化产物累积。RNA-seq及生物信息学分析结果分析发现,HID组小鼠肝脏中急性期反应、氧化还原反应、催化反应及血红蛋白结合等信号通路发生了明显的变化,而Hp mRNA在HID组显著下调。而且,HID组小鼠肝组织及RSL3处理的AML-12肝细胞中的Hp mRNA和蛋白表达水平均明显降低。重要的是,在AML-12肝细胞中,Hp过表达可明显减轻RSL3引起的肝细胞脂质过氧化和铁死亡。反之,Hp敲减可加重RSL3引起的肝细胞铁死亡。机制上,Hp明显抑制RSL3引起的肝细胞ERK1/2磷酸化的增强;而且,SCH772984可明显恢复Hp敲减导致的肝细胞脂质过氧�展开更多
目的:探讨泛连接蛋白1(Panx1)在睾丸癌Tcam-2细胞侵袭迁移中的作用及可能机制。方法:用100μmol/L甘珀酸(CBX)和200μmol/L的丙磺舒(PBN)处理Tcam-2细胞后,采用实时荧光法检测细胞间荧光传递能力,化学发光法检测细胞外ATP浓度,Transwel...目的:探讨泛连接蛋白1(Panx1)在睾丸癌Tcam-2细胞侵袭迁移中的作用及可能机制。方法:用100μmol/L甘珀酸(CBX)和200μmol/L的丙磺舒(PBN)处理Tcam-2细胞后,采用实时荧光法检测细胞间荧光传递能力,化学发光法检测细胞外ATP浓度,Transwell法检测Tcam-2细胞的侵袭迁移能力,Western印迹法检测Panx1蛋白在睾丸间质细胞TM3和睾丸癌细胞Tcam-2中的表达及细胞外调节蛋白酶激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、波形蛋白、基质金属酶蛋白9(MMP-9)和E-钙黏蛋白的表达。结果:Western印迹结果显示,与睾丸间质细胞TM3相比,Panx1蛋白在睾丸癌Tcam-2细胞中表达量显著增高[2.79±0.17 vs 1.00±0.06,P<0.05];用CBX和PBN处理Tcam-2细胞后,实时荧光法和化学发光结果显示,与对照组[(99.50±3.12)%]相比,CBX和PBN显著抑制荧光传递能力[分别下降至(61.54±3.30)%和(68.06±4.03)%,P<0.01]和降低细胞外ATP水平[(110±8.16)%vs(57.06±5.80)%、(56.42±7.70)%,P<0.01];Transwell法和细胞划痕法结果显示,与对照组相比,CBX和PBN显著抑制睾丸癌Tcam-2细胞迁移[(331.00±30.80)个vs(11.5±1.11)、(8.25±1.23),P<0.05]和侵袭[细胞数目为(89.00±13.09)vs(11.75±3.77)、(11.5±3.5)个,P<0.01];Western印迹法结果显示,与对照组表达水平(0.98±0.03、1.093±0.09、1.00±0.09、1.13±0.04)相比,CBX和PBN显著抑制p-ERK1/2(0.538±0.05、0.476±0.02,P<0.05)、波形蛋白(0.541±0.09、0.705±0.07,P<0.01)、MMP-9蛋白表达(0.439±0.08、0.557±0.065,P<0.01),增强E-钙黏蛋白表达(3.896±0.06、3.551±0.04,P<0.01)。结论:Panx1通道蛋白在睾丸癌Tcam-2细胞中表达量增高,CBX和PBN抑制Panx1通道后,Tcam-2细胞侵袭迁移能力降低。展开更多
目的:观察替米沙坦对心肌肥厚大鼠左室心肌组织中Raf/MEK/ERK信号通路的影响。方法 :清洁级健康SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和干预组3组,每组10只。模型组和干预组给予异丙肾上腺素皮下注射,干预组在给予异丙肾上腺素注射同时灌...目的:观察替米沙坦对心肌肥厚大鼠左室心肌组织中Raf/MEK/ERK信号通路的影响。方法 :清洁级健康SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和干预组3组,每组10只。模型组和干预组给予异丙肾上腺素皮下注射,干预组在给予异丙肾上腺素注射同时灌胃应用替米沙坦,对照组给予生理盐水皮下注射。进行心肌相关指数、病理学检测,并采用RT-PCR方法检测大鼠左心室心肌心房钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)表达,检测模型建立成功情况;模型建立成功后,各组大鼠取左心室心肌组织采用免疫组化检测磷酸化Raf(phosphorylation of Raf,p-Raf)和磷酸化细胞外调节激酶1/2(phosphorylation of extracellular regulated protein kinase1/2,p-ERK1/2)表达。结果:模型组p-Raf阳性区域平均积分光密度明显高于对照组(P=0.000),干预组介于模型组与对照组之间(P=0.041,P=0.031);模型组p-ERK1/2阳性区域平均积分光密度明显高于对照组(P=0.000),干预组介于模型组与对照组之间(P=0.0039,P=0.023)。结论:替米沙坦可能抑制p-Raf、p-ERK1/2蛋白表达而抑制Raf/MEK/ERK信号通路激活,具有抗心肌肥厚的作用。展开更多
文摘目的·探究结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)在肝细胞铁死亡(ferroptosis)中的作用及机制。方法·给予8周龄的C57BL/6J雄性小鼠正常饲料(normal iron diet,NID组,n=5)和高铁饲料(high iron diet,HID组,n=8)饲喂12周后,收集2组小鼠的肝脏和血清。利用血清学生化指标、肝脏苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,H-E)染色、天狼星红染色、普鲁士蓝染色和4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)染色明确2组小鼠肝脏损伤、病理学改变、纤维化、铁沉积和脂质过氧化反应程度;利用RNA测序(RNAsequencing,RNA-seq)技术和生物信息学分析高铁饮食对小鼠肝脏转录组表达的调控,并筛选新的调控铁死亡的候选基因。在AML-12小鼠肝细胞中过表达Hp或利用siRNA敲减Hp后,给予铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3(RAS-selective lethal small molecule 3,RSL3)和/或细胞外信号调节激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)活性抑制剂SCH772984,利用细胞计数、real-time PCR和C11-BODIPY581/591免疫荧光及流式细胞术等实验明确Hp在肝细胞铁死亡中的作用及机制。结果·相较于NID组小鼠,HID组小鼠血清中谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)和谷草转氨酶(glutamic-oxalacetic transaminase,GOT)水平明显升高,肝脏出现明显的肝细胞死亡、纤维化、铁沉积和脂质过氧化产物累积。RNA-seq及生物信息学分析结果分析发现,HID组小鼠肝脏中急性期反应、氧化还原反应、催化反应及血红蛋白结合等信号通路发生了明显的变化,而Hp mRNA在HID组显著下调。而且,HID组小鼠肝组织及RSL3处理的AML-12肝细胞中的Hp mRNA和蛋白表达水平均明显降低。重要的是,在AML-12肝细胞中,Hp过表达可明显减轻RSL3引起的肝细胞脂质过氧化和铁死亡。反之,Hp敲减可加重RSL3引起的肝细胞铁死亡。机制上,Hp明显抑制RSL3引起的肝细胞ERK1/2磷酸化的增强;而且,SCH772984可明显恢复Hp敲减导致的肝细胞脂质过氧�
文摘目的:探讨泛连接蛋白1(Panx1)在睾丸癌Tcam-2细胞侵袭迁移中的作用及可能机制。方法:用100μmol/L甘珀酸(CBX)和200μmol/L的丙磺舒(PBN)处理Tcam-2细胞后,采用实时荧光法检测细胞间荧光传递能力,化学发光法检测细胞外ATP浓度,Transwell法检测Tcam-2细胞的侵袭迁移能力,Western印迹法检测Panx1蛋白在睾丸间质细胞TM3和睾丸癌细胞Tcam-2中的表达及细胞外调节蛋白酶激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、波形蛋白、基质金属酶蛋白9(MMP-9)和E-钙黏蛋白的表达。结果:Western印迹结果显示,与睾丸间质细胞TM3相比,Panx1蛋白在睾丸癌Tcam-2细胞中表达量显著增高[2.79±0.17 vs 1.00±0.06,P<0.05];用CBX和PBN处理Tcam-2细胞后,实时荧光法和化学发光结果显示,与对照组[(99.50±3.12)%]相比,CBX和PBN显著抑制荧光传递能力[分别下降至(61.54±3.30)%和(68.06±4.03)%,P<0.01]和降低细胞外ATP水平[(110±8.16)%vs(57.06±5.80)%、(56.42±7.70)%,P<0.01];Transwell法和细胞划痕法结果显示,与对照组相比,CBX和PBN显著抑制睾丸癌Tcam-2细胞迁移[(331.00±30.80)个vs(11.5±1.11)、(8.25±1.23),P<0.05]和侵袭[细胞数目为(89.00±13.09)vs(11.75±3.77)、(11.5±3.5)个,P<0.01];Western印迹法结果显示,与对照组表达水平(0.98±0.03、1.093±0.09、1.00±0.09、1.13±0.04)相比,CBX和PBN显著抑制p-ERK1/2(0.538±0.05、0.476±0.02,P<0.05)、波形蛋白(0.541±0.09、0.705±0.07,P<0.01)、MMP-9蛋白表达(0.439±0.08、0.557±0.065,P<0.01),增强E-钙黏蛋白表达(3.896±0.06、3.551±0.04,P<0.01)。结论:Panx1通道蛋白在睾丸癌Tcam-2细胞中表达量增高,CBX和PBN抑制Panx1通道后,Tcam-2细胞侵袭迁移能力降低。
文摘目的:观察替米沙坦对心肌肥厚大鼠左室心肌组织中Raf/MEK/ERK信号通路的影响。方法 :清洁级健康SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和干预组3组,每组10只。模型组和干预组给予异丙肾上腺素皮下注射,干预组在给予异丙肾上腺素注射同时灌胃应用替米沙坦,对照组给予生理盐水皮下注射。进行心肌相关指数、病理学检测,并采用RT-PCR方法检测大鼠左心室心肌心房钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)表达,检测模型建立成功情况;模型建立成功后,各组大鼠取左心室心肌组织采用免疫组化检测磷酸化Raf(phosphorylation of Raf,p-Raf)和磷酸化细胞外调节激酶1/2(phosphorylation of extracellular regulated protein kinase1/2,p-ERK1/2)表达。结果:模型组p-Raf阳性区域平均积分光密度明显高于对照组(P=0.000),干预组介于模型组与对照组之间(P=0.041,P=0.031);模型组p-ERK1/2阳性区域平均积分光密度明显高于对照组(P=0.000),干预组介于模型组与对照组之间(P=0.0039,P=0.023)。结论:替米沙坦可能抑制p-Raf、p-ERK1/2蛋白表达而抑制Raf/MEK/ERK信号通路激活,具有抗心肌肥厚的作用。
