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鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域的克隆及GST融合蛋白原核表达
1
作者
牛金鹏
王惠川
吴国娟
《北京农学院学报》
2010年第4期21-23,62,共4页
应用RT-PCR技术扩增鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域(CHIFNAR2 EC)基因片段,将扩增产物克隆至pMD-18T,转化J M109感受态。重组质粒与表达载体pGEX-6P-1经双酶切后构建重组表达质粒pGEX-6P-CHIF-NAR2EC,转入BL21,提取质粒酶切和测序鉴定。测序结...
应用RT-PCR技术扩增鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域(CHIFNAR2 EC)基因片段,将扩增产物克隆至pMD-18T,转化J M109感受态。重组质粒与表达载体pGEX-6P-1经双酶切后构建重组表达质粒pGEX-6P-CHIF-NAR2EC,转入BL21,提取质粒酶切和测序鉴定。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99%。用IPTG诱导表达,对诱导条件进行初步优化,表达蛋白主要以包涵体的形式存在。通过切胶的方法进行纯化,获取具有较高纯度的融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western Blot检测显示融合蛋白分子量大小约为50 KD,采用抗GST抗体进行Western Blot,成功检测到特异性目的条带。
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关键词
干扰素α受体Ⅱ
胞外域
克隆
融合蛋白
原核表达
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职称材料
猪PD-1胞外区基因的克隆及原核表达
2
作者
杨媛
朱艳平
+4 位作者
岳锋
孙国鹏
张艳芳
银梅
王选年
《动物医学进展》
北大核心
2015年第9期55-59,共5页
为研究PD-1/PD-L1通路在猪免疫抑制性疾病中的作用,根据猪的PD-1的基因序列,设计扩增其胞外区的引物,从猪PBMC基因组中通过PCR扩增获得猪PD-1胞外区基因片段,测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组原核表达质粒pET32-PD1,转...
为研究PD-1/PD-L1通路在猪免疫抑制性疾病中的作用,根据猪的PD-1的基因序列,设计扩增其胞外区的引物,从猪PBMC基因组中通过PCR扩增获得猪PD-1胞外区基因片段,测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组原核表达质粒pET32-PD1,转化大肠埃希菌DH5α。挑选可疑菌落鉴定正确后转至Rosetta(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明,在37℃、0.5mmol/L IPTG条件下诱导获得33ku的PD-1胞外区融合蛋白,能够被其多抗血清、His标签抗体和人PD-1抗体所识别。本研究为制备其单克隆抗体和研究PD-1/PD-L1在猪免疫抑制性疾病中的作用提供了材料。
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关键词
猪PD-1
胞外区
克隆
原核表达
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职称材料
题名
鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域的克隆及GST融合蛋白原核表达
1
作者
牛金鹏
王惠川
吴国娟
机构
北京农学院动物科学技术学院
出处
《北京农学院学报》
2010年第4期21-23,62,共4页
基金
北京市自然科学基金项目(6092004)
国家自然科学基金项目(30771625)
文摘
应用RT-PCR技术扩增鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域(CHIFNAR2 EC)基因片段,将扩增产物克隆至pMD-18T,转化J M109感受态。重组质粒与表达载体pGEX-6P-1经双酶切后构建重组表达质粒pGEX-6P-CHIF-NAR2EC,转入BL21,提取质粒酶切和测序鉴定。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99%。用IPTG诱导表达,对诱导条件进行初步优化,表达蛋白主要以包涵体的形式存在。通过切胶的方法进行纯化,获取具有较高纯度的融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western Blot检测显示融合蛋白分子量大小约为50 KD,采用抗GST抗体进行Western Blot,成功检测到特异性目的条带。
关键词
干扰素α受体Ⅱ
胞外域
克隆
融合蛋白
原核表达
Keywords
Interferon
receptor
II
extracellular
region
cloning
recombinant
protein
prokaryotic
expression
分类号
S831 [农业科学—畜牧学]
Q786 [农业科学—畜牧兽医]
下载PDF
职称材料
题名
猪PD-1胞外区基因的克隆及原核表达
2
作者
杨媛
朱艳平
岳锋
孙国鹏
张艳芳
银梅
王选年
机构
新乡学院生物技术研究中心
河南科技学院动物科学学院
出处
《动物医学进展》
北大核心
2015年第9期55-59,共5页
基金
河南省基础与前沿技术研究(122300410150)
国家自然科学基金项目(31272539,31201877)
河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A230837)
文摘
为研究PD-1/PD-L1通路在猪免疫抑制性疾病中的作用,根据猪的PD-1的基因序列,设计扩增其胞外区的引物,从猪PBMC基因组中通过PCR扩增获得猪PD-1胞外区基因片段,测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组原核表达质粒pET32-PD1,转化大肠埃希菌DH5α。挑选可疑菌落鉴定正确后转至Rosetta(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明,在37℃、0.5mmol/L IPTG条件下诱导获得33ku的PD-1胞外区融合蛋白,能够被其多抗血清、His标签抗体和人PD-1抗体所识别。本研究为制备其单克隆抗体和研究PD-1/PD-L1在猪免疫抑制性疾病中的作用提供了材料。
关键词
猪PD-1
胞外区
克隆
原核表达
Keywords
porcine
PD-1
extracellular
region
cloning
prokaryotic
expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域的克隆及GST融合蛋白原核表达
牛金鹏
王惠川
吴国娟
《北京农学院学报》
2010
0
下载PDF
职称材料
2
猪PD-1胞外区基因的克隆及原核表达
杨媛
朱艳平
岳锋
孙国鹏
张艳芳
银梅
王选年
《动物医学进展》
北大核心
2015
0
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