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木聚糖酶基因克隆、表达与分泌及定点诱变研究进展 被引量:14
1
作者 刘相梅 祁蒙 曲音波 《生物工程进展》 CSCD 2001年第2期28-31,共4页
木聚糖酶专一性水解木聚糖分子中 β 1 4 糖苷键 ,在制浆造纸、食品、纺织、饲料、能源工业中具有广阔的应用前景。随着各种新技术的发展与应用 ,木聚糖酶基因的研究取得了很大进展 ,不仅克隆了许多不同来源的木聚糖酶基因 ,研究了木... 木聚糖酶专一性水解木聚糖分子中 β 1 4 糖苷键 ,在制浆造纸、食品、纺织、饲料、能源工业中具有广阔的应用前景。随着各种新技术的发展与应用 ,木聚糖酶基因的研究取得了很大进展 ,不仅克隆了许多不同来源的木聚糖酶基因 ,研究了木聚糖酶基因在同源和异源寄主中的表达和分泌 。 展开更多
关键词 木聚糖酶 基因表达 分泌 定点诱变 高效表达菌株
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丝状真菌表达分泌系统中受体菌的构建 被引量:12
2
作者 刘丽 刘谨 +2 位作者 仇润祥 朱兴国 唐国敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期667-670,共4页
黑曲霉糖化酶高产菌株T2 1经紫外诱变后 ,通过酪蛋白平板和蛋白酶活性测定筛选出胞外酸性蛋白酶活力仅为原株 0 76 %的菌株A .nigerT2 1 2 0 1,其生长特性和产糖化酶活力与原株基本一致。利用原生质体 PEG法将含有报告基因vhb的表达... 黑曲霉糖化酶高产菌株T2 1经紫外诱变后 ,通过酪蛋白平板和蛋白酶活性测定筛选出胞外酸性蛋白酶活力仅为原株 0 76 %的菌株A .nigerT2 1 2 0 1,其生长特性和产糖化酶活力与原株基本一致。利用原生质体 PEG法将含有报告基因vhb的表达分泌质粒pGT10 vhb通过与选择标记质粒的共转化导入此蛋白酶部分缺陷株及其原株T2 1,检测在蛋白酶缺陷株AspergillusnigerT2 1 2 0 1和原株T2 1中VHb的分泌表达 ,结果表明在A .nigerT2 1 2 0 1中VHb表达水平显著高于原株 ,但Northernblot却显示在两菌株中vnb基因的转录水平近似 。 展开更多
关键词 丝状真菌 表达分泌系统 受体菌 构建 黑曲霉T21 蛋白酶缺陷株 VHB
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双功能枯草杆菌诱导型高效表达分泌载体的构建与鉴定 被引量:7
3
作者 李瑞芳 张添元 罗进贤 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期714-719,共6页
利用大肠杆菌质粒pSP72和枯草杆菌质粒pUB18共整合得到双功能克隆载体pSB。在pSB多克隆位点依次引入枯草杆菌果聚糖蔗糖酶基因启动子-信号肽序列sacBp.s.、地衣芽孢杆菌淀粉酶基因终止子序列α-amyT和短小芽孢杆菌增强子基因degQ,最终... 利用大肠杆菌质粒pSP72和枯草杆菌质粒pUB18共整合得到双功能克隆载体pSB。在pSB多克隆位点依次引入枯草杆菌果聚糖蔗糖酶基因启动子-信号肽序列sacBp.s.、地衣芽孢杆菌淀粉酶基因终止子序列α-amyT和短小芽孢杆菌增强子基因degQ,最终构建了双功能枯草杆菌诱导型高效表达分泌载体pSBPTQ。将VasostatinⅠ基因作为靶基因检测sacBp.s.、α-amyT和degQ在pSBPTQ进行外源基因表达时的功能,结果表明,在蔗糖诱导下,sacB启动子有效启动了Vasostatin I基因的表达和分泌,α-amy T提高了VasostatinⅠ基因的转录效率,而degQ明显增强了VasostatinⅠ基因的表达水平。VasostatinⅠ基因在蔗糖诱导下成功表达并分泌到枯草杆菌细胞外,蛋白质分泌效率达到90%左右。质粒稳定性试验结果表明,经过40个世代之后,质粒pSBPTQ在枯草杆菌DB1342中仍旧保持在83%以上。 展开更多
关键词 枯草杆菌 双功能载体 诱导型 表达分泌 构建
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黑曲霉糖化酶cDNA的改造及其在酿酒酵母中的表达 被引量:5
4
作者 李文清 罗进贤 +1 位作者 叶若邻 徐柏年 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期205-209,共5页
应用PCR技术扩增黑曲霉糖化酶cDNA不含非编码区50bp的5’端740bp的序列与该cDNA3’端1400bp的序列连接,获得切除了5’端非编码的糖化酶cDNA。将改造后的cDNA插到质粒pMA91的酵母PGK基因的启动子和转录终止信号之间,构建了含黑曲霉糖... 应用PCR技术扩增黑曲霉糖化酶cDNA不含非编码区50bp的5’端740bp的序列与该cDNA3’端1400bp的序列连接,获得切除了5’端非编码的糖化酶cDNA。将改造后的cDNA插到质粒pMA91的酵母PGK基因的启动子和转录终止信号之间,构建了含黑曲霉糖化酶基因的表达载体pMAG17。用原生质体转化法将重组质粒pMAG17引入酿酒酵母GRF18。酿酒酵母GRF18转化子在淀粉平板上产生水解透明圈,表明糖化酶已在酵母中表达并分泌至培养基中。测定转化子的胞外酶活力及淀粉水解率。结果表明:改造后的糖化酶基因在酵母中的表达、分泌水平及水解淀粉的能力都高于未改造的基因。 展开更多
关键词 黑曲霉糖化酶 基因改造 表达 酿酒酵母 CDNA
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水蛭素基因的递归PCR合成和在大肠杆菌中的表达与分泌 被引量:4
5
作者 毕群 黄仪秀 朱圣庚 《北京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期737-742,共6页
水蛭素是凝血酶最强的特异抑制剂,可望成为预防和治疗各种血栓疾病的有效药物。根据医用水蛭(Hirudomedicinalis)头部水蛭素(HV-2)的氨基酸序列,通过递归PCR,合成水蛭素基因,并重组到本实验室改建的大... 水蛭素是凝血酶最强的特异抑制剂,可望成为预防和治疗各种血栓疾病的有效药物。根据医用水蛭(Hirudomedicinalis)头部水蛭素(HV-2)的氨基酸序列,通过递归PCR,合成水蛭素基因,并重组到本实验室改建的大肠杆菌分泌型表达载体pIN-ompA-HI中,使水蛭素基因的编码序列直接位于大肠杆菌外膜蛋白A信号肽序列的下游。转化大肠杆菌DH5α,筛选出重组体,经PCR,限制酶切图谱和序列分析,结果表明所合成的水蛭素基因与设计完全一致。水蛭素基因在大肠杆菌中得到表达,重组水蛭素(rHV-2)被分泌到细胞周质及培养基中,表达量占菌体蛋白的19.8%,并且有明显抗凝血酶生物活性。经分离纯化,产物在质谱分析中显示基本为单一成分,分子量为6893.1Da,证明重组水蛭素在分泌过程得到正确加工。 展开更多
关键词 水蛭素 递归PCR 大肠杆菌 基因表达 抗凝血药
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利用枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因启动子与信号肽重组分泌表达mpd基因 被引量:5
6
作者 张晓舟 闫新 +1 位作者 崔中利 李顺鹏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期249-256,共8页
用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pNW33N和去除了信号肽编码序列的成熟mpd基因构建了穿梭启动子探针pNW33N-mpd。用该探针从质粒pMPDP3和pMPDP29上克隆来自于枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因上游的启动子功能片段,构建了穿梭表达载体pNYTM和... 用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pNW33N和去除了信号肽编码序列的成熟mpd基因构建了穿梭启动子探针pNW33N-mpd。用该探针从质粒pMPDP3和pMPDP29上克隆来自于枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因上游的启动子功能片段,构建了穿梭表达载体pNYTM和pNYWM。将表达载体pNYTM和pNYWM转入枯草芽孢杆菌1A751获得表达菌株1A751(pNYTM)和1A751(pNYTM),mpd基因在ytkA和ywoF基因的启动子和信号肽的带动下实现了分泌表达且具有天然活性,结果表明ytkA基因的启动子强度强于ywoF基因的启动子。利用ytkA基因的强启动子和nprB基因的分泌型信号肽编码序列构建了新的穿梭分泌表达载体pYNMK,并使mpd基因在枯草芽孢杆菌WB800中得到了更高水平的分泌表达,表达菌株WB800(pYNMK)在培养到第84h时甲基对硫磷水解酶酶活达到最高值为10.40u/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的10.8倍,重组表达产物有91.4%分泌在培养基中。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 ytkA基因 ywoF基因 启动子 信号肽 mpd基因 分泌表达
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热打击诱导血管内皮细胞组织因子早期表达分泌的初步研究
7
作者 钱晶 王凡凡 +4 位作者 万露露 杨加乐 施学智 童华生 周伟梁 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1412-1419,共8页
目的探讨热打击诱导血管内皮细胞组织因子(TF)早期表达分泌的规律。方法将30只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组与热打击后复温0、3、6、9h组(n=6)。热打击组小鼠暴露于动物孵箱热环境,核心温度达42.5℃时即为发生重症中暑。采用HE... 目的探讨热打击诱导血管内皮细胞组织因子(TF)早期表达分泌的规律。方法将30只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组与热打击后复温0、3、6、9h组(n=6)。热打击组小鼠暴露于动物孵箱热环境,核心温度达42.5℃时即为发生重症中暑。采用HE染色观察小鼠肝脏、肺脏及肾脏组织病理学变化;RT-qPCR检测小鼠组织TFmRNA表达水平;ELISA法检测小鼠血浆TF浓度。体外建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)热打击模型,分为对照组与热打击后复温0、3、6、9 h组。采用RT-qPCR、Western blotting及细胞免疫荧光化学技术分别检测HUVECs中TF mRNA及蛋白表达水平;采用ELISA法检测HUVECs培养上清中TF水平。结果对照组小鼠各组织未见明显病理损伤,热打击复温小鼠存在不同程度组织细胞结构性损伤及出血性、炎症性损伤。与对照组小鼠比较,热打击复温0、3 h组肾脏(1.719±0.018、1.241±0.178 vs.1.000±0.063)、复温3 h组肺脏(2.444±0.511 vs.1.000±0.106)及复温6 h组肝脏(7.312±0.618 vs.1.000±0.147)中TF mRNA表达量均明显升高(P<0.05)。热打击小鼠复温0、3、6、9h组血浆TF水平均较对照组小鼠升高[(132.426±17.920)pg/ml、(119.400±10.267)pg/ml、(107.374±13.495)pg/ml、(163.767±22.810)pg/ml vs.(75.479±13.831)pg/ml,P<0.01]。与对照组比较,热打击后复温6、9h组HUVECs的TFmRNA表达水平明显升高(1.905±0.354、2.564±0.297vs.1.000±0.097,P<0.01);热打击复温0、3、6、9 h组HUVECs培养上清TF水平均明显高于对照组[(36.309±4.101)pg/ml、(38.425±5.484)pg/ml、(41.655±4.380)pg/ml、(43.586±4.718)pg/ml vs.(14.996±0.254)pg/ml,P<0.01]。结论热打击血管内皮细胞中TF的早期表达分泌增加,可能是重症中暑循环TF的主要来源之一。 展开更多
关键词 热打击 血管内皮细胞 组织因子 表达分泌
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酵母分泌表达重组人神经生长因子 被引量:4
8
作者 王革 王妍 +3 位作者 孙海波 何凌冰 朱一松 王君艳 《食品与药品》 CAS 2007年第1期9-11,共3页
目的研究人神经生长因子基因工程制备工艺。方法构建了表达质粒pPIC9K/rhNGF,转化毕赤酵母,筛选多拷贝转化子,进行摇瓶表达,正交试验选择表达条件。结果得到高表达高外泌的工程菌,并确定了纯化步骤,经疏水层析和阳离子交换层析纯化后,... 目的研究人神经生长因子基因工程制备工艺。方法构建了表达质粒pPIC9K/rhNGF,转化毕赤酵母,筛选多拷贝转化子,进行摇瓶表达,正交试验选择表达条件。结果得到高表达高外泌的工程菌,并确定了纯化步骤,经疏水层析和阳离子交换层析纯化后,取得高活性高纯度的rhNGF。结论为该药的规模生产奠定了基础。 展开更多
关键词 重组人神经生长因子 毕赤酵母 分泌表达
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嗜热内切-1,4-β-木聚糖酶在枯草杆菌中的表达及酶学性质 被引量:2
9
作者 郑春阳 刘珺 +1 位作者 魏国祥 王磊 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1333-1337,共5页
首先根据Thermopolyspora flexuosa的内切-1,4-β-木聚糖酶基因设计了引物,PCR扩增成功后进行酶切消化,连接载体质粒pHT43,经大肠杆菌DH5α扩增后,挑选阳性克隆,经菌体PCR及测序验证后,将基因序列测序正确的质粒大量抽提,经过转化导入... 首先根据Thermopolyspora flexuosa的内切-1,4-β-木聚糖酶基因设计了引物,PCR扩增成功后进行酶切消化,连接载体质粒pHT43,经大肠杆菌DH5α扩增后,挑选阳性克隆,经菌体PCR及测序验证后,将基因序列测序正确的质粒大量抽提,经过转化导入枯草芽孢杆菌Bacillus subtilius WB800N宿主,培养并经过1 mmol/L IPTG诱导表达后,发酵胞外上清经SDS-PAGE电泳证明重组蛋白质成功获得表达。其相对分子质量为27 kD,最适反应温度为80℃,最适反应pH为6.0。由此得知,分泌表达的嗜热内切-1,4-β-木聚糖酶的枯草芽孢杆菌工程菌株构建成功,这为未来该酶的产业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌表达系统 分泌表达 耐高温嗜热内切-1 4-β-木聚糖酶
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利用短短小芽孢杆菌启动子和信号肽编码序列构建穿梭分泌表达载体 被引量:2
10
作者 张晓舟 闫新 +1 位作者 崔中利 李顺鹏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期526-530,共5页
以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板,利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列,测序分析后提交GenBank,登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点,将PCR产物双酶切后克... 以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板,利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列,测序分析后提交GenBank,登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点,将PCR产物双酶切后克隆至穿梭载体pP43NMK的相应位点构建分泌表达载体pP15MK,插入片段置于该载体中mpd基因的上游,并使信号肽编码序列与去除了自身信号肽编码序列的mpd基因阅读框恰好融合。将pP15MK导入枯草杆菌构建表达菌株1A751(pP15MK),在短短小芽孢杆菌启动子和信号肽元件的带动下,mpd基因能够在表达菌株的对数生长期和稳定期持续性高效分泌表达,表达产物结合在细胞膜上;发酵液在48h酶活达到最高值7.79U/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的8.1倍。 展开更多
关键词 短短小芽孢杆菌 启动子 信号肽 分泌表达 枯草芽孢杆菌
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问号钩端螺旋体 tlyA 基因原核表达及其表达产物溶血和致炎作用 被引量:2
11
作者 王欢 林旭瑷 +2 位作者 周永列 邱莲女 严杰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期341-347,共7页
目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体) tlyA基因原核表达系统,确定目的重组表达产物rTlyA溶解红细胞及诱导人THP-1和小鼠J774A.1巨噬细胞分泌致炎细胞因子的作用。方法采用PCR扩增问号钩体黄疸出血群赖型赖株tlyA基因,T-A克隆后测... 目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体) tlyA基因原核表达系统,确定目的重组表达产物rTlyA溶解红细胞及诱导人THP-1和小鼠J774A.1巨噬细胞分泌致炎细胞因子的作用。方法采用PCR扩增问号钩体黄疸出血群赖型赖株tlyA基因,T-A克隆后测序。采用原核表达载体pET-42a及表达宿主菌E.coli BL21DE3构建tlyA基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测rTlyA表达情况, Ni-NTA亲和层析法提纯rTlyA。采用平板法和分光光度法测定rTlyA对绵羊红细胞的溶血活性。采用RT-PCR和Western blot分别检测问号钩体赖株感染THP-1和J774A.1细胞后tlyA基因mRNA水平变化及TlyA外分泌情况。采用ELISA检测rTlyA诱导THP-1和J774A.1细胞分泌致炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的作用。结果所克隆的tlyA基因与GenBank中公布的相应基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.2%和99.8%。所构建的tlyA基因原核表达系统能有效表达rTlyA。10μg/ml rTlyA能显示较强的溶解绵羊红细胞活性。问号钩体赖株感染THP-1和J774A.1细胞1~8 h后,tlyA-mRNA水平显著升高(P<0.05)且出现TlyA外分泌。0.1、1和10μg/ml rTlyA均能使THP-1和J774A.1细胞分泌致炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平显著升高(P<0.05)。结论问号钩体tlyA基因产物TlyA是溶血素并能诱导巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α,可在钩体病炎症反应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 问号钩端螺旋体 tlyA基因 溶血素 表达/分泌 致炎细胞因子
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Expression and secretion of barley α-amylase and A.niger glucoamylase in Saccharomyces cerevisiae
12
作者 罗进贤 李政海 李文清 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1998年第2期113-118,共6页
cDNAs of barley α amylase and A.niger glucoamylase were cloned in one E.coli yeast shuttle plasmid resulting in the construction of expression secretion vector pMAG15. pMAG15 was transformed into S.cerevisiae GRF18 b... cDNAs of barley α amylase and A.niger glucoamylase were cloned in one E.coli yeast shuttle plasmid resulting in the construction of expression secretion vector pMAG15. pMAG15 was transformed into S.cerevisiae GRF18 by protoplast transformation. The barley α amylase and A.niger glucoamylase were efficiently expressed under the control of promoter and terminator of yeast PGK gene and their own signal sequence. Over 99% of the enzyme activity expressed was secreted to the medium. The recombinant yeast strain, S.cerevisiae GRF18(pMAG15), hydrolyzes 99% of the starch in YPS medium containing 15% starch in 47 h. The glucose produced can be used for the production of ethanol. 展开更多
关键词 BARLEY α amylase and A.niger GLUCOAMYLASE Saccharomyces cerevisiae expression and secretion.
原文传递
人骨形态发生蛋白6(hBMP6)在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:1
13
作者 米东 杨爽 +4 位作者 胡芬 张杰 乔玉欢 杜君 朱天慧 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期24-27,共4页
以重组质粒pcDNA6A-BMP6为模板PCR扩增hBMP6成熟肽cDNA编码序列,将该序列克隆到酵母分泌表达表达载体pPIC9K中.重组质粒pPIC9K-hBMP6经SacI酶切线性化,电击转化毕赤酵母GS115,PCR法筛选阳性转化子,利用梯度浓度G418筛选到七株高拷贝整... 以重组质粒pcDNA6A-BMP6为模板PCR扩增hBMP6成熟肽cDNA编码序列,将该序列克隆到酵母分泌表达表达载体pPIC9K中.重组质粒pPIC9K-hBMP6经SacI酶切线性化,电击转化毕赤酵母GS115,PCR法筛选阳性转化子,利用梯度浓度G418筛选到七株高拷贝整合的阳性转化子。用甲醇进行诱导表达,SDSPAGE及Western-blot检测结果表明hBMP6成熟肽以分子量约为34和18 kD两种不同糖基化修饰的单体形式存在,具有良好的免疫原性. 展开更多
关键词 毕赤酵母 BMP6 PPIC9K 分泌表达
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人血管抑素cDNA在酿酒酵母中的表达和分泌
14
作者 卢文菊 罗进贤 +2 位作者 刘向辉 张朝琴 陈柏铭 《广州医学院学报》 2000年第2期7-10,共4页
目的 :在酿酒酵母中表达和分泌人血管抑素。方法 :应用DNA重组技术构建重组质粒 ;质粒DNA转化酵母用醋酸锂法 ;以纤溶酶原抗血清为第一抗体 ,采用ELISA方法检测表达产物。结果 :将MFα1信号肽和人血管抑素融合基因序列插入酵母表达载体p... 目的 :在酿酒酵母中表达和分泌人血管抑素。方法 :应用DNA重组技术构建重组质粒 ;质粒DNA转化酵母用醋酸锂法 ;以纤溶酶原抗血清为第一抗体 ,采用ELISA方法检测表达产物。结果 :将MFα1信号肽和人血管抑素融合基因序列插入酵母表达载体pMA91的Bg1Ⅱ位点 ,构建了重组表达质粒 pMAA2 ,转化酿酒酵母GRF18后获得工程菌GRF18(pMAA2 ) ,其培养上清液ELISA分析阳性。结论 :人血管抑素在GRF18(pMAA2 )中得到表达 ,产物分泌至细胞外 ,能够与纤溶酶原抗血清发生特异的免疫反应。 展开更多
关键词 血管抑素 基因表达 分泌 酿酒酵母
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突变型hGM-CSF在毕赤甲醇酵母中的分泌表达
15
作者 杨红 欧阳克清 +3 位作者 郭芝刚 李新平 陈云高 蔡绍皙 《重庆大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第6期94-97,共4页
临床研究发现 ,与大肠杆菌体系生产的hGM -CSF相比 ,利用酵母表达系统生产的hGM -CSF ,具有毒副作用小等优点。鉴于非糖基化的hGM -CSF生物活性比人体天然产生的糖基化GM -CSF活性更高 ,采用PCR定点突变的方法修改hGM -CSF基因中的糖基... 临床研究发现 ,与大肠杆菌体系生产的hGM -CSF相比 ,利用酵母表达系统生产的hGM -CSF ,具有毒副作用小等优点。鉴于非糖基化的hGM -CSF生物活性比人体天然产生的糖基化GM -CSF活性更高 ,采用PCR定点突变的方法修改hGM -CSF基因中的糖基化位点 ,进而在毕赤酵母 (Pichiapastoris)中实现该突变型基因的高效表达。实验结果表明 ,突变型基因的表达产物具有天然hGM -CSF的活性。 展开更多
关键词 突变型hGM-CSF 毕赤酵母 分泌表达
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羊生长激素在大肠杆菌中的表达及分泌初探
16
作者 牛淑敏 宋诚 +2 位作者 黄铁石 王玉香 赵大健 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期31-35,共5页
利用PCR方法,将羊生长激素(oGH)成熟蛋白编码序列扩增,再将扩增产物接入分泌型表达载体pET12a(SalI位点)中,利用宿主菌自身的OmpT信号肽引导羊生长激素在E.coliBL21(DE3)中分泌,获得正向插入重组质粒pET12-oGH8,对重组子及对照菌进行诱... 利用PCR方法,将羊生长激素(oGH)成熟蛋白编码序列扩增,再将扩增产物接入分泌型表达载体pET12a(SalI位点)中,利用宿主菌自身的OmpT信号肽引导羊生长激素在E.coliBL21(DE3)中分泌,获得正向插入重组质粒pET12-oGH8,对重组子及对照菌进行诱导表达,薄层色谱扫描(SDS-PAGE)检测结果发现,oGH在OmpT信号肽引导下未见明显分泌,推测oGH自身的氨基酸序列可能是影响其在E. 展开更多
关键词 生长激素 信号肽 表达 分泌 大肠杆菌 垂体
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前列腺方治疗慢性前列腺炎血瘀证的临床与实验研究 被引量:64
17
作者 张亚强 刘猷枋 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第9期534-536,共3页
目的 :验证前列腺方 (汤剂及胶囊 )的临床疗效及作用机理。方法 :用前列腺汤剂和前列腺胶囊分别治疗慢性前列腺炎血瘀证 32 2例和 2 39例患者 ,并与用前列康片治疗的95例作对照 ,观察治疗前后前列腺液 (EPS) pH值及锌 (EPS Zn)含量 ,... 目的 :验证前列腺方 (汤剂及胶囊 )的临床疗效及作用机理。方法 :用前列腺汤剂和前列腺胶囊分别治疗慢性前列腺炎血瘀证 32 2例和 2 39例患者 ,并与用前列康片治疗的95例作对照 ,观察治疗前后前列腺液 (EPS) pH值及锌 (EPS Zn)含量 ,并进行动物血液流变学及微循环观察。结果 :汤剂组、胶囊组和对照组临床治愈率分别为 6 5 8%、54 4 %和 1 7 9% ;汤剂可明显改善EPS pH和EPS Zn含量。实验研究结果表明前列腺方有降低实验性家兔血瘀模型的全血粘度、血小板粘附率、体外血栓干重 ;对肾上腺素引起的小鼠微循环障碍模型的微动脉血流停止或减慢有显著推迟发生作用。结论 :前列腺方 (汤剂及胶囊 ) 展开更多
关键词 前列腺炎 慢性 前列腺炎 血瘀证 中医药疗法
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颅脑损伤患者血清MCP-1和RANTES水平及其临床意义 被引量:19
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作者 杨欣刚 杨彦楠 《中国现代医学杂志》 CAS 2020年第12期92-95,共4页
目的探讨颅脑损伤患者血清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和调节活化正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)水平及其临床意义。方法选取2019年1月—2019年12月武警海警总队医院收治的重型颅脑损伤患者150例作为颅脑损伤组,选取同期该院健康体检者... 目的探讨颅脑损伤患者血清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和调节活化正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)水平及其临床意义。方法选取2019年1月—2019年12月武警海警总队医院收治的重型颅脑损伤患者150例作为颅脑损伤组,选取同期该院健康体检者150例作为对照组。根据是否发生主要不良事件分为不良事件组51例和无不良事件组99例。测定血清MCP-1、RANTES、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、S100B水平。结果颅脑损伤组血清MCP-1、RANTES、CRP、IL-6、TNF-α和S100B水平高于对照组(P<0.05)。颅脑损伤患者血清MCP-1、RANTES水平与入院GCS评分呈负相关(r=-0.627和-0.634,P<0.05),与血清CRP、IL-6、TNF-α、S100B水平呈正相关(MCP-1:r=0.516、0.497、0.534和0.558,P<0.05;RANTES:r=0.542、0.485、0.497和0.516,P<0.05)。不良事件组血清MCP-1和RANTES水平高于无不良事件组(P<0.05)。颅脑损伤死亡组血清MCP-1和RANTES水平高于存活组(P<0.05)。结论颅脑损伤患者血清MCP-1和RANTES水平升高,其水平与脑损伤程度、炎症程度、病情严重程度及预后关系密切。 展开更多
关键词 颅脑损伤 单核细胞趋化蛋白1 调节活化正常T细胞表达和分泌因子 炎症
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枯草芽胞杆菌蛋白质表达分泌系统发展及展望 被引量:6
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作者 张大伟 康倩 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期1-10,共10页
枯草芽胞杆菌作为革兰阳性模式菌株是基础研究和工业应用的常用宿主细胞。介绍了枯草芽胞杆菌中蛋白合成和分泌过程中的重要步骤及重要调控位点。在枯草芽胞杆菌蛋白表达及分泌系统中,可以针对目标基因在体内的转录、翻译、折叠、转运... 枯草芽胞杆菌作为革兰阳性模式菌株是基础研究和工业应用的常用宿主细胞。介绍了枯草芽胞杆菌中蛋白合成和分泌过程中的重要步骤及重要调控位点。在枯草芽胞杆菌蛋白表达及分泌系统中,可以针对目标基因在体内的转录、翻译、折叠、转运和菌株改造等方面对表达分泌系统进行优化改良,针对不同的目标蛋白,可进行不同优化模块的组装和拼搭,以达到针对目标蛋白产物定制化地提高产量和分泌量的目的。在未来,随着基因编辑和合成生物技术的发展,菌株改良策略的不断优化,枯草芽胞杆菌将会在工业生产蛋白质制品领域发挥更大的应用价值。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 蛋白质表达和分泌 微生物应用 表达分泌系统调控 菌株改造策略
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枯草芽孢杆菌表达和分泌异源蛋白的研究进展 被引量:6
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作者 王杰 王晨 +2 位作者 杜燕 徐晶玉 班睿 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期2815-2826,共12页
枯草芽孢杆菌是一种广泛应用于基础研究和工业生产的重要模式菌株,具有无致病性、蛋白分泌能力强、遗传背景清晰等多种优势,是生产异源蛋白的理想宿主。目前已有诸多异源蛋白在枯草芽孢杆菌中实现表达和分泌,其中包括淀粉酶、β-半乳糖... 枯草芽孢杆菌是一种广泛应用于基础研究和工业生产的重要模式菌株,具有无致病性、蛋白分泌能力强、遗传背景清晰等多种优势,是生产异源蛋白的理想宿主。目前已有诸多异源蛋白在枯草芽孢杆菌中实现表达和分泌,其中包括淀粉酶、β-半乳糖苷酶和蛋白酶等有价值的工业酶。本文从异源蛋白表达和分泌的关键步骤出发,总结了枯草芽孢杆菌生产异源蛋白的传统策略和最新技术。除此之外,分析了当前研究存在的瓶颈并对如何提高异源蛋白产量提出了新的建议和策略。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 异源蛋白 表达分泌系统 菌株改造策略 限制因素
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