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Aspergillus ficuum菊粉酶的分离纯化及其酶解菊粉制备低聚果糖 被引量：12
1
作者 王静 金征宇 +1 位作者 江波 徐学明 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期5-9,20,共6页
采用硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、DEAE-Cellulose离子交换色谱等分离纯化技术，从Aspergillus ficuum菌株混合酶系中分离得到4种菊粉酶组分，应用薄层层析法分离各组分水解菊粉的产物，发现其中3种组分主要含外切菊粉酶，一种主要含有内... 采用硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、DEAE-Cellulose离子交换色谱等分离纯化技术，从Aspergillus ficuum菌株混合酶系中分离得到4种菊粉酶组分，应用薄层层析法分离各组分水解菊粉的产物，发现其中3种组分主要含外切菊粉酶，一种主要含有内切菊粉酶。进一步对所得到的内切菊粉酶组分酶解菊粉制备低聚果糖进行了研究，研究了底物浓度、加酶量、反应温度和反应pH对低聚果糖制备的影响，确定其最适反应条件为：底物浓度50g／L、加酶量10U／g底物，反应温度45℃，反应PH6．0。在此条件下反应72h，菊粉酶解率达74％，低聚果糖得率可达50％以上，酶解产物以DP2～DP4为主。 展开更多
关键词 ASPERGILLUS ficuum 菊粉酶 外切菊粉酶 内切菊粉酶 低聚果糖
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Aspergillus ficuum菊粉酶酶学性质的研究 被引量：3
2
作者 王静 金征宇 +1 位作者 孙宝国 曹雁平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第4期272-277,共6页
本实验对Aspergillus ficuum产菊粉酶体系中的外切菊粉酶和内切菊粉酶的酶学性质进行了研究,研究表明二者酶学性质非常相似:两种酶的最适反应温度均在45℃左右;外切菊粉酶的最适反应pH为4.5,内切菊粉酶为pH5.0;Ag^+完全抑制两种酶的活性... 本实验对Aspergillus ficuum产菊粉酶体系中的外切菊粉酶和内切菊粉酶的酶学性质进行了研究,研究表明二者酶学性质非常相似:两种酶的最适反应温度均在45℃左右;外切菊粉酶的最适反应pH为4.5,内切菊粉酶为pH5.0;Ag^+完全抑制两种酶的活性,Fe^2+和Al^3+对两种酶有较强的抑制作用,尤其是外切菊粉酶,Mg^2+对两种酶有激活作用;实验还对两种酶的动力学常数进行了测定和比较。 展开更多
关键词 外切菊粉酶 内切菊粉酶 酶学性质 ASPERGILLUS ficuum
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克鲁维酵母中外切菊粉酶基因在毕赤酵母中的表达研究 被引量：3
3
作者 祝林 陈晶晶 +2 位作者 舒望云 王博 马立新 《湖北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2006年第4期385-388,共4页
用PCR的方法从克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)ATCC12424中克隆出外切菊粉酶基因.将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pHBM905C、pHBM906上,构建了外切菊粉酶毕赤酵母表达载体pHBM1200、pHBM1201.将两者转化毕赤酵母GS115,得到重组菌株... 用PCR的方法从克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)ATCC12424中克隆出外切菊粉酶基因.将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pHBM905C、pHBM906上,构建了外切菊粉酶毕赤酵母表达载体pHBM1200、pHBM1201.将两者转化毕赤酵母GS115,得到重组菌株GS115(pHBM1200)、GS115(pHBM1201),将这两种重组菌株进行摇瓶发酵,测得带α-信号肽的菌株GS115(pHBM1200)表达的外切菊粉酶最高酶活为89.43 U/mL,带自身信号肽的菌株GS115(pHBM1201)表达的外切菊粉酶最高酶活为14.828 U/mL.SDS-PAGE电泳表明,外切菊粉酶的表观分子量为90 kD.将外切菊粉酶用去糖基化酶endoH处理后,SDS-PAGE电泳表明,分子量为60 kD,和预计的分子量一致. 展开更多
关键词 外切菊粉酶 克鲁维酵母 毕赤酵母 基因表达
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Kluyveromyces marxianus菊粉外切酶的制备及其水解菊粉的研究 被引量：3
4
作者 汪伦记 董英 +1 位作者 邹风 郭凯 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期18-22,27,共6页
采用超滤、DEAE-Cellulose阴离子交换色谱、SephadexG-100凝胶色谱等蛋白分离技术,从马克斯克鲁维酵母粗酶液中分离到2种菊粉外切酶Ⅰ(ExoⅠ)和Ⅱ(ExoⅡ)。经分步纯化后,酶活回收4.92%,纯化了51倍。用纯化的2种菊粉外切酶进行分解菊粉,... 采用超滤、DEAE-Cellulose阴离子交换色谱、SephadexG-100凝胶色谱等蛋白分离技术,从马克斯克鲁维酵母粗酶液中分离到2种菊粉外切酶Ⅰ(ExoⅠ)和Ⅱ(ExoⅡ)。经分步纯化后,酶活回收4.92%,纯化了51倍。用纯化的2种菊粉外切酶进行分解菊粉,ExoⅠ酶解菊粉的产物主要是果糖和少量葡萄糖;ExoⅡ酶解菊粉的能力很弱,只有少量的还原糖生成。结果表明,ExoⅠ是主要的菊粉外切酶。SDS-PAGE测定ExoⅠ的分子量为85ku。ExoⅠ水解菊粉的优化表明,在加酶量80 U/g、菊粉浓度10%、pH4.6条件下,50℃酶解8h,其酶解率达73.52%。菊粉外切酶快速水解菊粉的特性,为利用菊粉发酵生产燃料乙醇提供了条件。 展开更多
关键词 马克斯克鲁维酵母 菊粉外切酶 制备 果糖 燃料乙醇
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组氨酸标签位置对重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母外切菊粉酶活性的影响 被引量：2
5
作者 马君燕 谭海东 +2 位作者 王文霞 杜昱光 尹恒 《生命科学研究》 CAS CSCD 2016年第3期218-223,277,共7页
为了研究His_6-tag标签位置对鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶(Kluyveromyces cicerisporus CBS4857 exo-inulinase,KcINU1)酶活性的影响,实验首先根据Swiss-Model构建的KcINU1三维模型预测了组氨酸标签在KcINU1的位置,然后将编码H... 为了研究His_6-tag标签位置对鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶(Kluyveromyces cicerisporus CBS4857 exo-inulinase,KcINU1)酶活性的影响,实验首先根据Swiss-Model构建的KcINU1三维模型预测了组氨酸标签在KcINU1的位置,然后将编码His_6-tag的基因通过PCR方法分别引入到kcINU1的N端和C端,并将重组的kcINU1基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA,重组质粒进一步经电转化法整合到毕赤酵母宿主菌X-33中,最后用甲醇诱导进行分泌表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,DNS去进行外切菊粉酶的活性测定。结果显示,实验中成功表达了具有活性的、His_6-tag标签位置不同的重组蛋白,并且N-His_6-KcINU1糖基化程度比KcINU1-His-C高,后者的比活是前者的82.2%,表明N端携带His_6-tag标签不影响蛋白的糖基化修饰,可以保持较高的酶活。该研究为获得高活性且便于分离纯化的重组KcINU1奠定了基础,对糖苷水解酶32家族标签位置的选择具有指导意义。 展开更多
关键词 组氨酸标签位置 鹰嘴豆孢克鲁维酵母 外切菊粉酶 酶活性 糖苷水解酶32家族
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响应曲面法优化产外切菊粉酶菌株G-60的发酵条件研究 被引量：2
6
作者 苟亚峰 马慧 +3 位作者 王丹 周路 陈月娥 高剑峰 《中国酿造》 CAS 2013年第4期85-89,共5页
从新疆石河子盐碱地菊芋生长根际土壤中,分离筛选得到10株具有菊粉外切酶活力的菌株,复筛得到1株高产菊粉外切酶活力菌株,将其命名为G-60。在单因素实验的基础上,采用Plackett-Burman试验法对8个因素进行了显著因素的筛选,结果表明菊粉... 从新疆石河子盐碱地菊芋生长根际土壤中,分离筛选得到10株具有菊粉外切酶活力的菌株,复筛得到1株高产菊粉外切酶活力菌株,将其命名为G-60。在单因素实验的基础上,采用Plackett-Burman试验法对8个因素进行了显著因素的筛选,结果表明菊粉添加量、酵母膏含量和初始pH值对菊粉外切酶酶活影响极显著;通过最陡爬坡试验及Box-Behnken设计进一步优化,得到最佳发酵产酶条件为:菊粉添加量7.91%、培养基初始pH为6.61、酵母膏含量0.64%,在此条件下,外切酶活达到58.51U/mL,与优化前相比提高2.02倍。 展开更多
关键词 菌株G-60 菊粉外切酶 响应面法
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Aspergillus ficuum产果聚糖酶体系的分析 被引量：1
7
作者 王静 金征宇 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2002年第4期424-427,共4页
采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳法对Aspergillusficuum产果聚糖酶体系进行了分离 ,获得8条谱带 ;进一步运用薄层色谱 (TLC)和高效液相色谱 (HPLC)法进行分析 ,发现 8条谱带中有 3条属于外切菊粉酶 ,2条属于内切菊粉酶 ,证明了Aspergillusfi... 采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳法对Aspergillusficuum产果聚糖酶体系进行了分离 ,获得8条谱带 ;进一步运用薄层色谱 (TLC)和高效液相色谱 (HPLC)法进行分析 ,发现 8条谱带中有 3条属于外切菊粉酶 ,2条属于内切菊粉酶 ,证明了Aspergillusficuum能同时产内切菊粉酶和外切菊粉酶 . 展开更多
关键词 果聚糖酶 外切菊粉酶 内切菊粉酶 活性聚丙烯酰胺凝胶电泳法 分离
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Aspergillus ficuum菊粉酶的化学修饰和荧光光谱
8
作者 陈晓明 陈寒青 +2 位作者 王静 金征宇 徐学明 《江苏大学学报（自然科学版）》 EI CAS 北大核心 2009年第4期334-337,361,共5页
选用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)、焦碳酸二乙酯(DEPC)、丁二酮(DIC)、氯氨-T(Ch-T)、碳二亚胺(EDC)、苯甲基磺酰氟(PMSF)和二硫苏糖醇(DTT)等化学修饰剂,通过对Aspergillus ficu-um内切和外切菊粉酶进行修饰,以研究菊粉酶分子中氨基酸侧链... 选用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)、焦碳酸二乙酯(DEPC)、丁二酮(DIC)、氯氨-T(Ch-T)、碳二亚胺(EDC)、苯甲基磺酰氟(PMSF)和二硫苏糖醇(DTT)等化学修饰剂,通过对Aspergillus ficu-um内切和外切菊粉酶进行修饰,以研究菊粉酶分子中氨基酸侧链基团对酶活性的影响.研究结果表明:内切菊粉酶和外切菊粉酶活性中心的必需氨基酸残基均含有色氨酸和羧基氨基酸,且内切和外切菊粉酶活性中心的色氨酸残基数目分别为1和2;组氨酸可能是酶活性中心的组成基团.荧光光谱法研究表明:内切菊粉酶的色氨酸残基比外切菊粉酶的色氨酸残基所处环境的极性大,对环境的变化更敏感,并且更加暴露,表明这两种酶具有不同的构象,这种构象上的差别可能是导致二者对底物菊粉作用机理不同的原因. 展开更多
关键词 内切菊粉酶 外切菊粉酶 酶活性 化学修饰 荧光光谱
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马克斯克鲁维酵母外切菊粉酶INU1的晶体结构研究
9
作者 李龙 苏晓琴 +3 位作者 方自安 周峻岗 胡小健 吕红 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期482-488,共7页
菊粉酶是一类能够将菊粉水解成果糖和低聚果糖的酶,它广泛应用于糖浆和果糖的工业生产.为了深入研究菊粉酶的结构与功能特征,我们解析了马克斯克鲁维酵母ATCC12424的外切菊粉酶INU1的晶体结构.通过毕赤酵母SMD1168(his4,pep4)对INU1进... 菊粉酶是一类能够将菊粉水解成果糖和低聚果糖的酶,它广泛应用于糖浆和果糖的工业生产.为了深入研究菊粉酶的结构与功能特征,我们解析了马克斯克鲁维酵母ATCC12424的外切菊粉酶INU1的晶体结构.通过毕赤酵母SMD1168(his4,pep4)对INU1进行了分泌表达,其体积酶活达到了1 671 U/mL.使用阴离子交换柱对INU1进行纯化并结晶解析了结构,INU1的晶体属于空间群I4 122,晶胞参数a=b=c=172.65,在上海同步辐射光源其衍射分辨率为2.8,一个非对称单位中有两个INU1分子以面对面方式堆积成二聚体.INU1的晶体结构与GH32(糖苷水解酶32)家族其他蛋白一致,主要由N端保守的5个β螺旋桨结构域和C端不保守的β夹层结构域组成.氨基酸序列和晶体结构对比显示,INU1的催化位点为Asp53,Asp182和Glu238.这个晶体结构为菊粉酶INU1的进一步改造以适应工业化生产提供了基础. 展开更多
关键词 菊粉酶 外切菊粉酶 菊粉 马克斯克鲁维酵母 晶体结构
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点青霉MH1发酵热稳定性外切菊粉酶的培养基优化及酶学性质研究 被引量：5
10
作者 何国庆 Mokhtar A.M. +1 位作者 陈启和 汤兴俊 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 2006年第3期19-25,共7页
为了分离出热稳定性胞外菊粉酶产生菌,并使菊粉酶的生产、产酶最大化以及分析其酶学性质,进行了本实验。实验结果表明:1株产外切β-D-果糖转化酶的点青霉从菊芋生长的环境中被分离,并经过诱变命名为点青霉(Penicilliumnotatum)MH1。采... 为了分离出热稳定性胞外菊粉酶产生菌,并使菊粉酶的生产、产酶最大化以及分析其酶学性质,进行了本实验。实验结果表明:1株产外切β-D-果糖转化酶的点青霉从菊芋生长的环境中被分离,并经过诱变命名为点青霉(Penicilliumnotatum)MH1。采用半部分因子设计和中心组合设计对影响菊粉酶生产的培养基组成中主要因子进行了优化,得到一最优培养基组成(g/L):菊芋粉24,牛肉膏5,酵母膏1,豆饼粉1,KH2PO43,MgSO4·7H2O0.2,初始pH3.5。优化试验结果显示:在34℃、200r/min摇床转速下培养48h,采用优化的培养基发酵生产得到的最大菊粉酶活力为32.46U/mL。对酶的部分性质进行了研究,其最适pH为4.2,酶在pH3～7具有反应活性,最适作用温度为55℃。粗酶液经过硫酸铵分级盐析,其适宜的盐析饱和度为20%～58%,盐析后酶液通过DEAE-纤维素DE52和SephadexG-100柱层析,纯化后得到的酶采用SDS-PAGE检测分析,结果显示该酶的分子质量为(108±1)KDa。 展开更多
关键词 外切菊粉酶 菊芋 点青霉MH1 优化 纯化
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