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小鼠白介素18与白介素1β转化酶共表达载体的构建及真核表达
被引量：
4
1
作者
徐玢
马小彤
+4 位作者
董成亚
石洋
林永敏
宋玉华
吴克复
《现代免疫学》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期177-181,共5页
为了制备白介素18前体(proIL-18)和白介素1β转化酶(ICE)共表达肿瘤疫苗,从小鼠脾细胞克隆proIL-18和ICE基因,构建小鼠proIL-18和ICE共表达质粒(pIRES-proIL-18-ICE),经测序证实序列正确后,脂质体法转染小鼠淋巴细胞白血病细胞系L1210,...
为了制备白介素18前体(proIL-18)和白介素1β转化酶(ICE)共表达肿瘤疫苗,从小鼠脾细胞克隆proIL-18和ICE基因,构建小鼠proIL-18和ICE共表达质粒(pIRES-proIL-18-ICE),经测序证实序列正确后,脂质体法转染小鼠淋巴细胞白血病细胞系L1210,筛选稳定表达细胞株。转染细胞RT-PCR及转染细胞培养上清IL-18ELISA检测结果表明,肿瘤细胞可以表达并分泌成熟的IL-18。培养上清的IL-18可显著诱导ConA刺激的小鼠脾细胞产生IFN-γ,表明其具有功能活性。生长曲线和细胞周期实验证实与未转染的肿瘤细胞相比,转染空载体pIRES、pIRES-proIL-18、pIRES-ICE、pIRES-proIL-18-ICE基因对肿瘤细胞生长增殖无明显影响。IL-18白血病瘤苗的成功制备表明,利用pIRES载体在同一肿瘤细胞中共表达的proIL-18和ICE能够完全模拟生理过程,在真核细胞内有效酶切,分泌出成熟并有功能活性的IL-18;构建的IL-18瘤苗为进一步评价其在小鼠体内的抗白血病效果奠定基础。
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关键词
小鼠白细胞介素18
真核表达载体
pires
L1210白血病细胞
肿瘤疫苗
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职称材料
携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞
2
作者
鄢雪敏
撖子建
+2 位作者
蔡琰
余展鹏
黄元姣
《中国癌症防治杂志》
CAS
2016年第4期207-211,共5页
目的构建携带绿色荧光基因的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的EBV潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入p IRES2-Zs...
目的构建携带绿色荧光基因的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的EBV潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入p IRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞(实验组),同时另设转染p IRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组。利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达。结果双酶切及测序鉴定证实真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75%;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达。结论成功构建了p IRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达。
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关键词
鼻咽肿瘤
EBV潜伏膜蛋白2A
序列克隆
pires
2-Zs-Green1载体
pires
2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体
基因转染
基因表达
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职称材料
hCGβ-TT-IRES-CD40L真核表达载体的构建
3
作者
卢明
王其龙
+1 位作者
刘静
刘胜武
《武汉大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2010年第2期259-262,280,共5页
目的:构建含有分子佐剂CD40L的真核表达质粒hCGβ-TT,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用分段PCR的方法构建了hCGβ-TT,然后插入双元真核表达质粒IRES的A位点,将CD40L插入pIRES的B位点构建hCGβ-TT-IRES-CD40L。结果:经测序所克隆的基因hCG...
目的:构建含有分子佐剂CD40L的真核表达质粒hCGβ-TT,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用分段PCR的方法构建了hCGβ-TT,然后插入双元真核表达质粒IRES的A位点,将CD40L插入pIRES的B位点构建hCGβ-TT-IRES-CD40L。结果:经测序所克隆的基因hCGβ-TT和CD40L序列正确。结论:利用分子佐剂CD40L与hCGβ-TT的连接,构建了hCGβ-TT-IRES-CD40L真核细胞表达质粒,为检测hCGβDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础。
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关键词
人绒毛膜促性腺激素β
CD40L
基因疫苗
真核表达载体
pires
原文传递
题名
小鼠白介素18与白介素1β转化酶共表达载体的构建及真核表达
被引量：
4
1
作者
徐玢
马小彤
董成亚
石洋
林永敏
宋玉华
吴克复
机构
中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室
出处
《现代免疫学》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期177-181,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30471964)
文摘
为了制备白介素18前体(proIL-18)和白介素1β转化酶(ICE)共表达肿瘤疫苗,从小鼠脾细胞克隆proIL-18和ICE基因,构建小鼠proIL-18和ICE共表达质粒(pIRES-proIL-18-ICE),经测序证实序列正确后,脂质体法转染小鼠淋巴细胞白血病细胞系L1210,筛选稳定表达细胞株。转染细胞RT-PCR及转染细胞培养上清IL-18ELISA检测结果表明,肿瘤细胞可以表达并分泌成熟的IL-18。培养上清的IL-18可显著诱导ConA刺激的小鼠脾细胞产生IFN-γ,表明其具有功能活性。生长曲线和细胞周期实验证实与未转染的肿瘤细胞相比,转染空载体pIRES、pIRES-proIL-18、pIRES-ICE、pIRES-proIL-18-ICE基因对肿瘤细胞生长增殖无明显影响。IL-18白血病瘤苗的成功制备表明,利用pIRES载体在同一肿瘤细胞中共表达的proIL-18和ICE能够完全模拟生理过程,在真核细胞内有效酶切,分泌出成熟并有功能活性的IL-18;构建的IL-18瘤苗为进一步评价其在小鼠体内的抗白血病效果奠定基础。
关键词
小鼠白细胞介素18
真核表达载体
pires
L1210白血病细胞
肿瘤疫苗
Keywords
murine
interleukin-18
eukaryotic
expression
vector
pires
L1210
leukemic
cells
tumor
vaccine
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞
2
作者
鄢雪敏
撖子建
蔡琰
余展鹏
黄元姣
机构
广西医科大学生物化学与分子生物学教研室
广西医科大学医学科学实验中心
出处
《中国癌症防治杂志》
CAS
2016年第4期207-211,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(81260405)
广西区域性高发肿瘤早期防治研究重点实验室基金项目(GK2013-A-02-02)
文摘
目的构建携带绿色荧光基因的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的EBV潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入p IRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞(实验组),同时另设转染p IRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组。利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达。结果双酶切及测序鉴定证实真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75%;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达。结论成功构建了p IRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达。
关键词
鼻咽肿瘤
EBV潜伏膜蛋白2A
序列克隆
pires
2-Zs-Green1载体
pires
2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体
基因转染
基因表达
Keywords
Nasopharyngeal
neoplasm
E
BV
latent
membrane
protein
2A
Sequence
clone
vector
pires
2-Zs-Greenl
eukaryotic
expression
vector
pires
2-Zs-Green
1-LMP2A
Gene
transfection
Gene
expression
分类号
R739.6 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
hCGβ-TT-IRES-CD40L真核表达载体的构建
3
作者
卢明
王其龙
刘静
刘胜武
机构
武汉大学医学院免疫学系
广州市达安临床检验中心有限公司
出处
《武汉大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2010年第2期259-262,280,共5页
文摘
目的:构建含有分子佐剂CD40L的真核表达质粒hCGβ-TT,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用分段PCR的方法构建了hCGβ-TT,然后插入双元真核表达质粒IRES的A位点,将CD40L插入pIRES的B位点构建hCGβ-TT-IRES-CD40L。结果:经测序所克隆的基因hCGβ-TT和CD40L序列正确。结论:利用分子佐剂CD40L与hCGβ-TT的连接,构建了hCGβ-TT-IRES-CD40L真核细胞表达质粒,为检测hCGβDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础。
关键词
人绒毛膜促性腺激素β
CD40L
基因疫苗
真核表达载体
pires
Keywords
Human
Chorionic
Gonadotropin
Beta
CD40L
Gene
Vaccine
eukaryotic
expression
vector
pires
分类号
R782 [医药卫生—口腔医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠白介素18与白介素1β转化酶共表达载体的构建及真核表达
徐玢
马小彤
董成亚
石洋
林永敏
宋玉华
吴克复
《现代免疫学》
CAS
CSCD
北大核心
2005
4
下载PDF
职称材料
2
携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞
鄢雪敏
撖子建
蔡琰
余展鹏
黄元姣
《中国癌症防治杂志》
CAS
2016
0
下载PDF
职称材料
3
hCGβ-TT-IRES-CD40L真核表达载体的构建
卢明
王其龙
刘静
刘胜武
《武汉大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2010
0
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