为了解黄酒发酵过程中氨基甲酸乙酯前体物瓜氨酸的来源,从黄酒发酵醪液中分离得到9株乳酸菌,并通过生理生化鉴定和16S r DNA序列分析,结果表明,菌株z1为Lactobacillus plantarum,菌株z2和z3为L.hilgardii,菌株z4为L.diolivorans,菌株z5...为了解黄酒发酵过程中氨基甲酸乙酯前体物瓜氨酸的来源,从黄酒发酵醪液中分离得到9株乳酸菌,并通过生理生化鉴定和16S r DNA序列分析,结果表明,菌株z1为Lactobacillus plantarum,菌株z2和z3为L.hilgardii,菌株z4为L.diolivorans,菌株z5和z7为L.brevis,菌株z6和z9为L.casei,菌株z8为L.fermentum。采用平板检测法结合分子检测法对9株乳酸菌产瓜氨酸能力进行了评价,结果显示,其中6株菌均能不同程度地降解精氨酸产生瓜氨酸,且与菌株中是否存在ADI途径编码基因簇中的关键基因arc A、arc B和arc C直接相关。此外,还应用HPLC对各菌株产瓜氨酸能力进行了精确定量,发现无论是在添加了精氨酸的培养基还是在灭菌后的黄酒培养液中培养,乳酸菌在利用精氨酸的过程中不断向胞外分泌瓜氨酸,从而积累氨基甲酸乙酯。本研究结果为进一步用微生物手段控制黄酒中氨基甲酸乙酯形成提供了思路。展开更多
通过代谢工程改造构建低产尿素的酿酒酵母工程菌,从根源上减少黄酒发酵液中尿素的含量及氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)的形成。该研究利用融合PCR构建DUR3过表达组件“HOL-PGK1p-DUR3-PGK1t-HOR”,通过CRISPR/Cas9介导的基因组编辑...通过代谢工程改造构建低产尿素的酿酒酵母工程菌,从根源上减少黄酒发酵液中尿素的含量及氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)的形成。该研究利用融合PCR构建DUR3过表达组件“HOL-PGK1p-DUR3-PGK1t-HOR”,通过CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术转化酿酒酵母S.cerevisiae Na DUR1,2-Δcar1,在敲除CAR1和过表达DUR1,2基因的基础上过表达DUR3基因,获得工程菌S.cerevisiae Na DUR1,2/DUR3-Δcar1。实验室黄酒发酵实验结果表明,与亲本菌株S.cerevisiae Na相比,工程菌S.cerevisiae Na DUR1,2/DUR3-Δcar1所酿黄酒发酵液中尿素含量降低了92.1%,EC含量降低了58.6%;与出发菌株S.cerevisiae Na DUR1,2-Δcar1相比,工程菌S.cerevisiae Na DUR1,2/DUR3-Δcar1所酿黄酒发酵液中尿素含量降低了43.4%,EC含量降低了16.2%。过表达DUR3的工程菌S.cerevisiae Na DUR1,2/DUR3-Δcar1具有“尿素吸收”的能力,减少EC的形成。借助CRISPR/Cas9系统,构建的酵母工程菌无外源抗性基因的引入,具有工业化应用的潜在可能性。展开更多
文摘通过代谢工程改造构建低产尿素的酿酒酵母工程菌,从根源上减少黄酒发酵液中尿素的含量及氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)的形成。该研究利用融合PCR构建DUR3过表达组件“HOL-PGK1p-DUR3-PGK1t-HOR”,通过CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术转化酿酒酵母S.cerevisiae Na DUR1,2-Δcar1,在敲除CAR1和过表达DUR1,2基因的基础上过表达DUR3基因,获得工程菌S.cerevisiae Na DUR1,2/DUR3-Δcar1。实验室黄酒发酵实验结果表明,与亲本菌株S.cerevisiae Na相比,工程菌S.cerevisiae Na DUR1,2/DUR3-Δcar1所酿黄酒发酵液中尿素含量降低了92.1%,EC含量降低了58.6%;与出发菌株S.cerevisiae Na DUR1,2-Δcar1相比,工程菌S.cerevisiae Na DUR1,2/DUR3-Δcar1所酿黄酒发酵液中尿素含量降低了43.4%,EC含量降低了16.2%。过表达DUR3的工程菌S.cerevisiae Na DUR1,2/DUR3-Δcar1具有“尿素吸收”的能力,减少EC的形成。借助CRISPR/Cas9系统,构建的酵母工程菌无外源抗性基因的引入,具有工业化应用的潜在可能性。
