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题名易错PCR提高粘质沙雷氏菌磷脂酶A1活性
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作者
王玉满
薛正莲
王洲
苏燕南
朱昊
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机构
安徽工程大学生物与化学工程学院
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出处
《安徽工程大学学报》
CAS
2016年第4期6-11,共6页
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基金
国家自然科学基金资助项目(31471615)
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文摘
利用易错PCR技术对来自粘质沙雷氏菌PL-06的磷脂酶A1基因plaB进行定向改造,通过引入不同浓度Mg^(2+)、Mn^(2+)得到的易错PCR产物与表达型质粒pET-28a(+)重组,构建磷脂酶A1突变文库,筛选出高酶活突变株EPB8.该突变酶相对野生酶酶活提高了22.5%,并对突变株EPB8产酶条件进行优化,优化后酶活较野生酶酶活提高41%.序列分析表明:plaB基因有11个碱基发生突变,导致7个氨基酸发生突变,其中磷脂酶A1蛋白有3个氨基酸突变,分别是Y^(97) C、P^(98)S、X^(228) L,辅助蛋白有4个氨基酸突变,分别是P^(46) L、Q^(58) L、N1^(36) D、H^(233) R.该实验结果为进一步在分子水平定向提高磷脂酶A1的活性奠定了基础,也为该酶在其他高表达系统中的表达提供了素材.
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关键词
粘质沙雷氏菌
磷脂酶A1
易错PCR
产酶条件优化
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Keywords
Serratia marcescens
phospholipase A1
error-prone per
optimization of fermentation condi- tions
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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