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D型产气荚膜梭菌ε毒素研究进展 被引量:7
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作者 高洁 张聪敏 +2 位作者 刘伟 赵宇亮 赵宝华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第10期101-105,共5页
D型产气荚膜梭菌常引起新生羔羊痢疾和山羊、牛等家畜的肠毒血症,致死性强,对畜牧业造成很大的危害。ε毒素是D型产气荚膜梭菌的主要致死性毒力因子和保护性抗原,从分子生物学的角度对该毒素的研究具有重要实际意义。论文主要对国内外关... D型产气荚膜梭菌常引起新生羔羊痢疾和山羊、牛等家畜的肠毒血症,致死性强,对畜牧业造成很大的危害。ε毒素是D型产气荚膜梭菌的主要致死性毒力因子和保护性抗原,从分子生物学的角度对该毒素的研究具有重要实际意义。论文主要对国内外关于D型产气荚膜梭菌ε毒素分子生物学结构与性质,ε毒素引起的家畜肠毒血症以及对其作用靶器官肾脏和脑组织破坏的致病机理进行了介绍,对国内外D型产气荚膜梭菌ε毒素预防措施进行了综述,为研究D型产气荚膜梭菌ε毒素结构与功能的关系以及预防治疗动物肠毒血症提供参考。 展开更多
关键词 D型产气荚膜梭菌 ε毒素 毒性分子基础 肠毒血症 预防
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基于镧系高敏荧光的生物毒素现场快速检测方法的研究 被引量:4
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作者 刘军波 金志颖 +7 位作者 白雪欣 万伟 杨浩 李岩伟 吴俊清 章健 高姗 王景林 《军事医学》 CAS 2021年第7期537-542,547,共7页
目的利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法。方法首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效... 目的利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法。方法首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效价最高的捕获抗体,分别与相应检测抗体平行组合,确定最优的配伍组合条件建立检测方法。其次,对该法的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价。结果所建立的时间分辨荧光免疫层析法(TRFIC)可在20 min内完成对3种生物毒素的定性/定量检测。3种毒素的最低检出限均可达0.5 ng/ml,定量范围为0.5~50 ng/ml,3种毒素间及与黄曲霉毒素B_(1)、T-2毒素均无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15%。结论该研究建立了一种基于可见光激发的TRFIC,在生物毒素的检测中获得了较高的最低检测限,与配套的小型便携式检测仪器一起使用,具有检测快速、可远程传输结果的优势,未来在生物反恐、生物武器核查等领域具有较高的应用价值和应用前景。 展开更多
关键词 蓖麻毒素 A型肉毒毒素 产气荚膜梭菌ε毒素 镧系荧光 免疫层析 生物安全
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产气荚膜梭菌ε毒素及其疫苗研究进展 被引量:5
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作者 王光华 黄生莲 +1 位作者 周继章 邱昌庆 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第5期73-75,共3页
产气荚膜梭菌病是由产气荚膜梭菌引起的一种重要的人兽共患传染病,可导致山羊、绵羊等动物的肠毒血症或坏死性肠炎,并且可引起动物脑、心、肺和肾组织的水肿。B型和D型产气荚膜梭菌所产生的ε毒素是引起动物上述病理变化和死亡的重要因... 产气荚膜梭菌病是由产气荚膜梭菌引起的一种重要的人兽共患传染病,可导致山羊、绵羊等动物的肠毒血症或坏死性肠炎,并且可引起动物脑、心、肺和肾组织的水肿。B型和D型产气荚膜梭菌所产生的ε毒素是引起动物上述病理变化和死亡的重要因素之一。虽然甲醛灭活的毒素疫苗能对动物产生保护性抗体,但是,灭活苗潜在的安全性原因使其在应用上受到限制。因此,基于ε毒素基因的重组疫苗和弱毒疫苗就成为人们研究的目标。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 ε毒素 疫苗
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产气荚膜梭菌ε毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备 被引量:5
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作者 田冬青 彭小兵 +4 位作者 蒋玉文 杨京岚 陈小云 丁家波 屠伟英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期365-369,共5页
PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株ε毒素完整基因,并将其插入到pGEM-TEasy载体中,构建克隆载体pGEM-T-ε。对克隆载体pGEM-T-ε进行双酶切,将得到的918bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21(DE3)... PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株ε毒素完整基因,并将其插入到pGEM-TEasy载体中,构建克隆载体pGEM-T-ε。对克隆载体pGEM-T-ε进行双酶切,将得到的918bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21(DE3)中,在37℃1mmol/LIPTG诱导下该基因获得良好表达。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为36600,与预期值一致。Western-blotting试验显示,该重组蛋白可被D型产气荚膜梭菌血清识别,表明该重组蛋白具备天然毒素相似的反应原性。重组ε毒素蛋白在菌液上清、超声波裂解上清和包涵体中均有分布,表明重组蛋白可同时以胞外、周质和胞浆的形式表达,且以周质方式为主。重组蛋白在胰酶活化前后均可致死小鼠,活化后毒力可为原来的150倍。以重组ε毒素蛋白作为抗原免疫家兔制备血清,效价测定结果表明,重组ε毒素蛋白抗血清每毫升可中和30000个小鼠MLD。毒素-抗毒素中和试验和琼脂扩散试验均表明,该抗血清具有ε毒素特异性。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 ε毒素 克隆表达 抗血清
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产气荚膜梭菌ε毒素蛋白高效表达体系的构建及其免疫保护性的研究 被引量:3
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作者 卢田粉 柴同杰 +4 位作者 孙玲玉 李欣贤 郝海玉 吕长辉 杨延伟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第9期59-62,共4页
ε毒素是由B和D型产气荚膜梭菌产生的,能够引起牛、羊肠毒血症,给畜牧业造成巨大的经济损失。本试验将ε毒素基因片段(972bp)以正确的阅读框架定向连接到pET-28a(+)质粒上,然后将重组质粒导入受体菌株,成功构建重组菌株BL21(DE3)。SDS-P... ε毒素是由B和D型产气荚膜梭菌产生的,能够引起牛、羊肠毒血症,给畜牧业造成巨大的经济损失。本试验将ε毒素基因片段(972bp)以正确的阅读框架定向连接到pET-28a(+)质粒上,然后将重组质粒导入受体菌株,成功构建重组菌株BL21(DE3)。SDS-PAGE和Western blotting检测结果表明,重组的菌株BL21(DE3)能以包涵体的形式高效表达ε毒素(占菌体总蛋白的32.83%)。在此基础上,用有效剂量0.2mg包涵体粗提物免疫家兔,抗血清间接ELISA检测结果显示,在第4周抗体效价达到最高值为8.7log2。因此,在本研究中构建的重组菌株BL21(DE3)能高效表达ε毒素,而且该毒素具有较高的免疫保护性。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 ε毒素 表达 免疫保护性
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产气荚膜梭菌ε毒素的细胞毒机制及致病机理的研究进展
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作者 李庆伟 石碧玥 +1 位作者 韩英伦 刘欣 《辽宁师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2015年第2期219-224,共6页
产气荚膜梭菌ε毒素(Epsilon toxin,ETX)由B、D型产气荚膜梭菌产生并分泌至宿主动物体内,在临床上主要症状为肠毒血症.ETX属于以七聚体形式存在的β-样成孔毒素,它能够形成由14个β折叠片组成的"β-桶状"结构,这个"β-桶... 产气荚膜梭菌ε毒素(Epsilon toxin,ETX)由B、D型产气荚膜梭菌产生并分泌至宿主动物体内,在临床上主要症状为肠毒血症.ETX属于以七聚体形式存在的β-样成孔毒素,它能够形成由14个β折叠片组成的"β-桶状"结构,这个"β-桶状"结构可以插入真核细胞的质膜形成穿孔.在细胞水平,ETX能够迅速使细胞膜肿胀、多种细胞器破坏,最终导致靶细胞的坏死.在哺乳动物体内,ETX能够使哺乳动物血管产生水肿,从而穿透血脑屏障而聚积在动物肾和脑中,导致机体随着谷氨酸盐的释放而产生过度兴奋,这一系列反应的发生可以引起机体出现脑水肿和肾衰竭,最终导致动物的死亡.目前,ETX备受关注的主要原因不仅仅因为它是一种β-样成孔毒素,而是可以作为潜在的一种工具类药物,经改造后可以携带治疗药物在短时间内靶向性地到达哺乳动物脑和中枢神经系统,继而为脑和中枢神经系统疾病的治疗提供新的方向.结合国内外相关研究,对ETX细胞毒机制及致病机理进行了综和评述. 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌ε毒素 细胞毒作用机制 致病机理 产气荚膜梭菌
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产气荚膜梭菌ε毒素的研究进展
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作者 岳楠 康琳 +4 位作者 李佳欣 王菁 高姗 辛文文 王景林 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2289-2300,共12页
产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)ε毒素(epsilon toxin,ETX)可导致牛羊等宿主动物的坏死性肠炎,以及肺脏、肾脏和脑部等多器官的损伤,导致感染动物的生产效能下降,还因为毒性较强被列入生物战剂和生物恐怖剂清单。ETX通过在靶细... 产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)ε毒素(epsilon toxin,ETX)可导致牛羊等宿主动物的坏死性肠炎,以及肺脏、肾脏和脑部等多器官的损伤,导致感染动物的生产效能下降,还因为毒性较强被列入生物战剂和生物恐怖剂清单。ETX通过在靶细胞膜上形成孔道,导致内容物的异常释放,从而损伤细胞,其中髓鞘和淋巴细胞蛋白(myelin and lymphocyte,MAL)是ETX发挥毒性效应的特异性受体。目前ETX的防治手段有限,仅适用于动物的粗制疫苗,适用于人类的疫苗仍在研发之中,并且潜在治疗药物在探索中。近年来,研究者在ETX的成孔机制、特异性受体、疫苗和治疗药物的研究方面取得了较多的进展。本文对上述几个方面进行综述,旨在为ETX的进一步研究提供有价值的参考。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌ε毒素 成孔毒素 髓鞘和淋巴细胞蛋白 疫苗
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D型产气荚膜梭菌ε毒素基因表达及其免疫保护作用的初步研究 被引量:10
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作者 王光华 蔺国珍 +4 位作者 郑福英 曹小安 宫晓炜 周继章 邱昌庆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期36-41,共6页
利用PCR技术,从D型产气荚膜梭菌标准株(C60-2)染色体DNA中扩增出ε毒素基因。该基因产物大小为906bp,序列分析结果表明,与GenBank报道的产气荚膜梭菌参考菌株ε毒素基因序列同源性大于99%。将扩增的ε毒素基因定向克隆到原核表达载体pET... 利用PCR技术,从D型产气荚膜梭菌标准株(C60-2)染色体DNA中扩增出ε毒素基因。该基因产物大小为906bp,序列分析结果表明,与GenBank报道的产气荚膜梭菌参考菌株ε毒素基因序列同源性大于99%。将扩增的ε毒素基因定向克隆到原核表达载体pET32a中,得到重组质粒pET32a-ETX,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plys中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析可见大小为54ku的特异条带;经Western blotting和ELISA检测结果表明,表达的ε毒素能与抗天然ε毒素抗体发生特异性反应,说明ε毒素蛋白具有较好的反应原性。将表达的ε毒素蛋白用0.4%的甲醛溶液制成类毒素疫苗,免疫小鼠后,具有一定的保护力,这表明该重组菌株有望成为产气荚膜梭菌基因工程类毒素疫苗的候选菌株。 展开更多
关键词 D型产气荚膜梭菌 ε毒素 类毒素 免疫保护
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D型产气荚膜梭菌贵州分离株ε毒素的DNA序列测定与分析
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作者 王璇 张晓可 +3 位作者 余波 史开志 李干洲 徐景峨 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第10期197-200,204,共5页
为研究产气荚膜梭菌ε毒素的结构与功能,以及对该病的防治提供基础依据,利用D型产气荚膜梭菌贵州分离株(CP02株),根据GenBank中登记的产气荚膜梭菌ε毒素基因设计特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化后测定核苷酸序列并与NCBI登录的... 为研究产气荚膜梭菌ε毒素的结构与功能,以及对该病的防治提供基础依据,利用D型产气荚膜梭菌贵州分离株(CP02株),根据GenBank中登记的产气荚膜梭菌ε毒素基因设计特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化后测定核苷酸序列并与NCBI登录的参考毒株进行相似性比较。结果表明:D型产气荚膜梭菌CP02株基因片段大小为456bp,与CWD_CN_409、NCTC_8533、NCTN_6121、ETX21512、KurCpD1、CtrCpD2、IVRI_Vac1和IVRI_49菌株的核苷酸序列相似性在98.5%~100%,推导的氨基酸序列相似性在98.4%~100%。碱基突变以A-G、C-T间的转换为主,也发生低频率的A-C、G-T间颠换,但突变均为点突变。 展开更多
关键词 D型产气荚膜梭菌 ε毒素 相似性 贵州
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