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题名EB病毒潜伏膜蛋白2的B细胞表位免疫原性研究
被引量：3
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作者
李文姝
郑美霞
欧琴
朱珊丽
张丽芳
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机构
温州医学院微生物学与免疫学教研室
郧阳医学院微生物学教研室
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出处
《中华传染病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期587-592,共6页
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基金
国家自然科学基金资助项目（30671882）
温州市科技局科技计划项目（Y20090248）
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文摘
目的 分析EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白2（LMP2）B淋巴细胞表位的免疫原性.方法 利用生物信息学技术筛选出EBV LMP2可能的优势B淋巴细胞表位LMP2199-209、LMP2318-322和LMP2381-391,将其相应基因片段分别克隆至pET32a（＋）载体并转化至大肠埃希菌BL21（DE3）菌株诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白免疫印迹分析鉴定,通过Ni-NTA离子螯合亲和层析柱纯化.分别以纯化的表位蛋白作为免疫原,皮下多点注射BALB/c小鼠,设pET32a（＋）蛋白和PBS为对照.分别以3个表位蛋白作包被抗原,ELISA法检测第0、3、6周小鼠血清中相应表位特异性抗体IgG,并于免疫后第6周检测各免疫组小鼠血清抗体识别天然EBV抗原的能力.结果 在原核表达体系中分别获得了表位LMP2199-209、LMP2318-322和LMP2381-391融合表达产物.纯化的表位蛋白免疫小鼠,血清中分别能检测到相应的表位特异性抗体IgG,其抗体水平随着免疫次数的增加而呈现逐渐升高的趋势,表位LMP2318-322免疫组第3、6周小鼠血清抗体显著高于pET32a（＋）蛋白对照组（F=493.85、773.99,均P＜0.05）,LMP2381-391免疫组第3、6周抗体水平亦显著高于pET32a（＋）蛋白对照组（F=926.33、309.14,均P＜0.05）,而表位LMP2199 209免疫组至第6周特异性抗体高于pET32a（＋）蛋白对照组（F=87.27,P＜0.05）.3个表位蛋白免疫小鼠血清抗体IgG均能识别EBV天然抗原,以表位LMP2199-209和LMP2381-391免疫组抗EBV-IgG生成水平尤为显著.结论 筛选的EBV LMP2可能的优势B淋巴细胞表位LMP2199-209、LMP2318-322和LMP2381-391通过原核表达体系中制备的表位蛋白,具有较好的免疫原性,可进一步用于EBV感染及其相关肿瘤表位疫苗的研究.
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关键词
疱疹病毒4型
人
病毒包膜蛋白质类
表位
b淋巴细胞
遗传载体
基因表达
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Keywords
Herpesvirus 4, human
Viral envelope proteins
epitopes b-lymphocyte
Genetic vectors
Gene expression
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分类号
R686
[医药卫生—骨科学]
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