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γ-环糊精糖基转移酶在毕赤酵母中高效表达
被引量：
5
1
作者
张燕
李梦腊
张建国
《工业微生物》
CAS
2017年第1期24-30,共7页
本论文通过密码子优化、表达质粒的比较、发酵条件优化,将来源于Bacillus pseudalcaliphilus的环糊精糖基转移酶基因在毕赤酵母中高效表达。在诱导初始p H 6.0、发酵温度28℃、接种量6%、甲醇添加量1%时,γ环化活力最终达到了83.65 U/m...
本论文通过密码子优化、表达质粒的比较、发酵条件优化,将来源于Bacillus pseudalcaliphilus的环糊精糖基转移酶基因在毕赤酵母中高效表达。在诱导初始p H 6.0、发酵温度28℃、接种量6%、甲醇添加量1%时,γ环化活力最终达到了83.65 U/m L,比活力296.49 U/mg。通过硫酸铵分步沉淀法即可有效将上清粗蛋白盐析制备,得到68.28%γ-环糊精糖基转移酶。
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关键词
γ-环糊精糖基转移酶
密码子优化
毕赤酵母
发酵优化
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职称材料
甲型流感病毒核蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化
被引量：
4
2
作者
黄保英
王文玲
+3 位作者
王秀平
蒋涛
谭文杰
阮力
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期50-57,共8页
为了在大肠杆菌中高效表达甲型流感病毒A/京科/30/95(H3N2)核蛋白NP,以便对原核表达的NP蛋白进行免疫原性研究,本研究通过密码子优化及全基因合成等方法,将3种形式的NP基因:与6×His标签融合的NP基因NP(His)、非融合的野生型NP基因N...
为了在大肠杆菌中高效表达甲型流感病毒A/京科/30/95(H3N2)核蛋白NP,以便对原核表达的NP蛋白进行免疫原性研究,本研究通过密码子优化及全基因合成等方法,将3种形式的NP基因:与6×His标签融合的NP基因NP(His)、非融合的野生型NP基因NPwt及非融合的按大肠杆菌优势密码子改造的基因NP(O)分别插入原核表达载体pET-30a,构建了表达3种形式NP基因的3种原核表达质粒并研究不同质粒中NP蛋白的表达形式、条件、纯化工艺及抗原性。限制性酶切反应与测序表明,三种形式的NP基因均正确插入原核表达质粒pET-30a;SDS-PAGE凝胶电泳显示,三种形式的NP基因均能在大肠杆菌中表达,NP(O)基因的表达量最高;在不同温度诱导条件下,NP蛋白呈现可溶性表达,NP(O)基因可溶性高效表达的条件为:T=25℃,t=10 h;经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化,可溶性表达的NP蛋白纯度可达90%;Western blot检测显示,纯化的NP能与流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株感染小鼠的血清发生特异性结合。这些结果表明,非融合表达的密码子优化甲型流感病毒NP蛋白能在大肠杆菌中高效表达和纯化,同时保持良好的免疫反应活性。
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关键词
甲型流感病毒
核蛋白
原核系统
密码子优化
蛋白质表达
原文传递
密码子优化的HPV16 L2E7基因在大肠杆菌中高效表达
被引量：
4
3
作者
高见
赵莉
+3 位作者
任皎
张卉
阮力
田厚文
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期579-583,共5页
目的提高HPV16L2E7融合基因在大肠杆菌中的表达水平,为中试研究提供高表达量的疫苗候选株。方法根据大肠杆菌偏爱密码子,利用Synthetic Gene Designer软件对L2E7全基因进行密码子优化,将分段合成的基因分部插入到pET9a中,经酶切和测序...
目的提高HPV16L2E7融合基因在大肠杆菌中的表达水平,为中试研究提供高表达量的疫苗候选株。方法根据大肠杆菌偏爱密码子,利用Synthetic Gene Designer软件对L2E7全基因进行密码子优化,将分段合成的基因分部插入到pET9a中,经酶切和测序鉴定无误后转化BL21(DE3+)中,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。表达的融合蛋白进行SDS-PAGE胶和Western blot鉴定。同时还进行梯度实验分别对诱导的温度、时间和IPTG诱导时菌体浓度进行优化,并对蛋白的纯化方案进行摸索。结果优化后的pET9aSL2E7AB在大肠杆菌中得到高效表达,诱导条件优化后的目的蛋白占全菌60%左右。结论成功得到了具有较高表达水平的疫苗候选株。
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关键词
人乳头瘤病毒
密码子优化
疫苗
大肠杆菌
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职称材料
题名
γ-环糊精糖基转移酶在毕赤酵母中高效表达
被引量：
5
1
作者
张燕
李梦腊
张建国
机构
上海理工大学食品科学与工程研究所
出处
《工业微生物》
CAS
2017年第1期24-30,共7页
基金
国家自然科学基金(No.21306112)
上海市自然科学基金资助项目(No.13ZR1429100)
+1 种基金
上海高校青年教师培养资助计划(No.slg14037)
教育部留学回国人员科研启动基金
文摘
本论文通过密码子优化、表达质粒的比较、发酵条件优化,将来源于Bacillus pseudalcaliphilus的环糊精糖基转移酶基因在毕赤酵母中高效表达。在诱导初始p H 6.0、发酵温度28℃、接种量6%、甲醇添加量1%时,γ环化活力最终达到了83.65 U/m L,比活力296.49 U/mg。通过硫酸铵分步沉淀法即可有效将上清粗蛋白盐析制备,得到68.28%γ-环糊精糖基转移酶。
关键词
γ-环糊精糖基转移酶
密码子优化
毕赤酵母
发酵优化
Keywords
γ-cyclodextrin
glycosyhransferase
eodon
optimization
Pichia
pastoris
culture
optimization
.
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
甲型流感病毒核蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化
被引量：
4
2
作者
黄保英
王文玲
王秀平
蒋涛
谭文杰
阮力
机构
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒病应急技术中心
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期50-57,共8页
基金
国家863计划资助(2006AA02A203)
文摘
为了在大肠杆菌中高效表达甲型流感病毒A/京科/30/95(H3N2)核蛋白NP,以便对原核表达的NP蛋白进行免疫原性研究,本研究通过密码子优化及全基因合成等方法,将3种形式的NP基因:与6×His标签融合的NP基因NP(His)、非融合的野生型NP基因NPwt及非融合的按大肠杆菌优势密码子改造的基因NP(O)分别插入原核表达载体pET-30a,构建了表达3种形式NP基因的3种原核表达质粒并研究不同质粒中NP蛋白的表达形式、条件、纯化工艺及抗原性。限制性酶切反应与测序表明,三种形式的NP基因均正确插入原核表达质粒pET-30a;SDS-PAGE凝胶电泳显示,三种形式的NP基因均能在大肠杆菌中表达,NP(O)基因的表达量最高;在不同温度诱导条件下,NP蛋白呈现可溶性表达,NP(O)基因可溶性高效表达的条件为:T=25℃,t=10 h;经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化,可溶性表达的NP蛋白纯度可达90%;Western blot检测显示,纯化的NP能与流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株感染小鼠的血清发生特异性结合。这些结果表明,非融合表达的密码子优化甲型流感病毒NP蛋白能在大肠杆菌中高效表达和纯化,同时保持良好的免疫反应活性。
关键词
甲型流感病毒
核蛋白
原核系统
密码子优化
蛋白质表达
Keywords
influenza
A
virus
nucleoprotein
prokaryotic
system
eodon
optimization
protein
expression
分类号
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
Q78 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
密码子优化的HPV16 L2E7基因在大肠杆菌中高效表达
被引量：
4
3
作者
高见
赵莉
任皎
张卉
阮力
田厚文
机构
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所应急技术中心
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期579-583,共5页
基金
国家高技术研究发展计划项目(863项目)(2002AA216041)~~
文摘
目的提高HPV16L2E7融合基因在大肠杆菌中的表达水平,为中试研究提供高表达量的疫苗候选株。方法根据大肠杆菌偏爱密码子,利用Synthetic Gene Designer软件对L2E7全基因进行密码子优化,将分段合成的基因分部插入到pET9a中,经酶切和测序鉴定无误后转化BL21(DE3+)中,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。表达的融合蛋白进行SDS-PAGE胶和Western blot鉴定。同时还进行梯度实验分别对诱导的温度、时间和IPTG诱导时菌体浓度进行优化,并对蛋白的纯化方案进行摸索。结果优化后的pET9aSL2E7AB在大肠杆菌中得到高效表达,诱导条件优化后的目的蛋白占全菌60%左右。结论成功得到了具有较高表达水平的疫苗候选株。
关键词
人乳头瘤病毒
密码子优化
疫苗
大肠杆菌
Keywords
human
papillomavirus
eodon
optimization
vaccine
Escherichia
coil
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
Q784 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
γ-环糊精糖基转移酶在毕赤酵母中高效表达
张燕
李梦腊
张建国
《工业微生物》
CAS
2017
5
下载PDF
职称材料
2
甲型流感病毒核蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化
黄保英
王文玲
王秀平
蒋涛
谭文杰
阮力
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
4
原文传递
3
密码子优化的HPV16 L2E7基因在大肠杆菌中高效表达
高见
赵莉
任皎
张卉
阮力
田厚文
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
下载PDF
职称材料
已选择
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