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重组人CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定 被引量：29
1
作者 刘新光 梁念慈 马涧泉 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期201-205,共5页
将构建成功的人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下表达 .表达蛋白大多数以不溶形式存在 .6L (约 10 2g)表达菌抽提得到约 2 0mg的可溶性表达产物 ,通过P11磷酸纤维素一步层析分离 ,得到 6 8mg... 将构建成功的人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下表达 .表达蛋白大多数以不溶形式存在 .6L (约 10 2g)表达菌抽提得到约 2 0mg的可溶性表达产物 ,通过P11磷酸纤维素一步层析分离 ,得到 6 8mg纯化蛋白 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化的蛋白为一分子质量2 6ku的单一蛋白带 .蛋白质印迹结果证明 :纯化的表达产物与抗人CK2 β抗体可发生特异性免疫反应 .CK2 β亚基对CK2α有激活作用 ,纯化的CK2α和β亚基在等摩尔混合时即可组成有最大生物活性的全酶 .实验结果有力地证明了克隆表达与纯化的重组蛋白是人蛋白激酶CK2 β亚基 . 展开更多
关键词 人蛋白激酶 CK2β亚基 蛋白质纯化 基因表达
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反式曲马朵在大鼠肝微粒体O-去甲基代谢中的立体选择性 被引量：7
2
作者 王娜 刘会臣 +1 位作者 刘长锁 侯艳宁 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期169-174,共6页
目的　研究反式曲马朵O 去甲基代谢的立体选择性。方法　高效毛细管电泳法测定大鼠肝微粒体孵育液中反式曲马朵和O 去甲基曲马朵对映体的浓度 ,酶促动力学方法研究O 去甲基曲马朵对映体的生成。结果(- ) O 去甲基曲马朵生成有较大的Vm... 目的　研究反式曲马朵O 去甲基代谢的立体选择性。方法　高效毛细管电泳法测定大鼠肝微粒体孵育液中反式曲马朵和O 去甲基曲马朵对映体的浓度 ,酶促动力学方法研究O 去甲基曲马朵对映体的生成。结果(- ) O 去甲基曲马朵生成有较大的Vmax;反式曲马朵两对映体间存在相互作用 ,使 (+) O 去甲基曲马朵生成的Vmax明显减慢 ;奎宁及奎尼丁对 (+) O 去甲基曲马朵生成的抑制作用较强。结论　反式曲马朵O 去甲基代谢有立体选择性 ,对映体间的相互作用及酶抑制剂使其立体选择性程度加强。 展开更多
关键词 反式曲马朵 肝微粒体 高效毛细管电泳法 酶促动力学 O-去甲基代谢 立体选择性
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绵羊乳酪蛋白血管紧张素转换酶抑制肽的制备与鉴定 被引量：1
3
作者 张艳 葛武鹏 +4 位作者 宋宇轩 谢玉霞 汤海霞 王海燕 王爽爽 《乳业科学与技术》 2021年第3期19-23,共5页
以绵羊乳酪蛋白为原料,采用中性蛋白酶水解制备生物活性肽,研究酶解时间对酶解产物水解度和血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率的影响,利用液相色谱-质谱联用技术对水解产物进行分析和鉴定,筛选具有潜在ACE抑... 以绵羊乳酪蛋白为原料,采用中性蛋白酶水解制备生物活性肽,研究酶解时间对酶解产物水解度和血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率的影响,利用液相色谱-质谱联用技术对水解产物进行分析和鉴定,筛选具有潜在ACE抑制作用的生物活性肽。结果表明:酶解时间达到300 min时,水解度最高值达9.65%,ACE抑制率为84.55%;当ACE抑制率达到50%时,所需肽段YYQQRP浓度为5~10μmol/L;利用超高效液相色谱飞行时间质谱仪对酶解后的多肽进行序列分析,与蛋白数据库比对筛选出1个新的具有潜在ACE抑制活性的肽段YYQQRP,推测YYQQRP结构可能与底物结构相似,通过与ACE的活性位点相结合,从而降低ACE的催化活性。 展开更多
关键词 绵羊乳 酪蛋白 血管紧张素转换酶抑制肽 酶动力学分析 液相色谱-质谱联用技术
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速率法检测尿中N－乙酰－β－D－氨基葡萄糖苷酶 被引量：1
4
作者 段勇 张秋霞 +3 位作者 王玉明 王成芬 刘爱萍 韩林 《昆明医学院学报》 1995年第2期36-39,共4页
用新色原氯硝氨基苯基葡萄糖苷（ＣＮＰ－ＮＡＧ）速率法测定尿ＮＡＧ．尿ＮＡＧ测定的最适ｐＨ４．４～５．０．最佳呈色反应的ｐＨ４．６～５．０，在４００ｓ观察期内吸光度变化与时间成止比例．ε＝３．７９×１０３Ｌ·ｍ... 用新色原氯硝氨基苯基葡萄糖苷（ＣＮＰ－ＮＡＧ）速率法测定尿ＮＡＧ．尿ＮＡＧ测定的最适ｐＨ４．４～５．０．最佳呈色反应的ｐＨ４．６～５．０，在４００ｓ观察期内吸光度变化与时间成止比例．ε＝３．７９×１０３Ｌ·ｍｏｌ－１·ｃｍ－１，Ｋｍ＝０．５ｌｍｍｏｌ·Ｌ－１．ＴｒｉｎｔｏｎＸ－１００可促进底物的溶解．尿ＮＡＧ正常参考范围：１．２５～１１．３３Ｕ／ｇＣｒｅ． 展开更多
关键词 尿 速率法 自动生化分析仪 氨基葡萄糖苷酶
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