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高效液相色谱/质谱法识别不同明胶酶解产物中特征多肽 被引量:22
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作者 张贵锋 刘涛 +3 位作者 王前 雷建都 马光辉 苏志国 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1499-1504,共6页
在不同动物胶原蛋白序列比对基础上,利用高效液相色谱/质谱联用技术(HPLC/MS)建立一种通过特征多肽进行明胶鉴别的方法。实验以牛明胶和猪明胶为对象,序列比对结果表明,牛和猪的Ⅰ型胶原蛋白α1链和α2链均存在氨基酸序列差异。利用胰... 在不同动物胶原蛋白序列比对基础上,利用高效液相色谱/质谱联用技术(HPLC/MS)建立一种通过特征多肽进行明胶鉴别的方法。实验以牛明胶和猪明胶为对象,序列比对结果表明,牛和猪的Ⅰ型胶原蛋白α1链和α2链均存在氨基酸序列差异。利用胰蛋白酶将牛明胶和猪明胶降解,通过HPLC/MS分析了两种明胶酶解产物中的多肽片段。结果表明:牛明胶和猪明胶酶解产物中均可检测出存在序列差异的特征性多肽,其氨基酸序列差异与两种胶原蛋白序列比对结果中的序列差异一致;酶解产物中特征多肽上的脯氨酸存在不同程度的羟基化修饰,特征多肽的相对含量主要受明胶分子量范围影响。利用HPLC/MS检测明胶酶解产物中的特征多肽是一种鉴别牛明胶和猪明胶的有效方法。 展开更多
关键词 明胶 酶解 特征多肽 高效液相色谱质谱联用 多肽识别
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Start-up performances of dry anaerobic mesophilic and thermophilic digestions of organic solid wastes 被引量:19
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作者 LU Shu-guang IMAI Tsuyoshi +1 位作者 UKITA Masao SEKINE Masahiko 《Journal of Environmental Sciences》 SCIE EI CAS CSCD 2007年第4期416-420,共5页
Two dry anaerobic digestions of organic solid wastes were conducted for 6 weeks in a lab-scale batch experiment for investigating the start-up performances under mesophilic and thermophilic conditions. The enzymatic a... Two dry anaerobic digestions of organic solid wastes were conducted for 6 weeks in a lab-scale batch experiment for investigating the start-up performances under mesophilic and thermophilic conditions. The enzymatic activities, i.e., β-glucosidase, N-α-benzoyl-Largininamide (BAA)-hydrolysing protease, urease and phosphatase activities were analysed. The BAA-hydrolysing protease activity during the first 2-3 weeks was low with low pH, but was enhanced later with the pH increase. β-Glucosidase activity showed the lowest values in weeks 1-2, and recovered with the increase of BAA-hydrolysing protease activity. Acetic acid dominated most of the total VFAs in thermophilic digestion, while propionate and butyrate dominated in mesophilic digestion. Thermophilic digestion was confirmed more feasible for achieving better performance against misbalance, especially during the start-up period in a dry anaerobic digestion process. 展开更多
关键词 anaerobic digestion enzymatic activity MESOPHILIC solid wastes THERMOPHILIC
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酶解胶原蛋白研究进展 被引量:18
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作者 菅景颖 张志胜 《浙江化工》 CAS 2007年第1期18-20,共3页
阐述了近年来国内外关于酶法水解胶原蛋白所做的研究工作,并对胶原多肽的应用前景进行了分析。
关键词 酶解 胶原蛋白 胶原多肽
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酶处理强化污泥厌氧消化效能及脱水性能的研究进展 被引量:9
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作者 徐友 陈思思 +2 位作者 董滨 杨殿海 戴晓虎 《工业水处理》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期6-11,共6页
用酶处理污泥能够有效提高污泥的厌氧消化效率,改善污泥脱水性能。主要从酶对污泥的作用机理、影响因素、处理效果以及提高厌氧消化性能的策略等方面对国内外污泥的酶处理进行了归纳,重点介绍了污泥的酶处理效果,包括酶对污泥的溶解作... 用酶处理污泥能够有效提高污泥的厌氧消化效率,改善污泥脱水性能。主要从酶对污泥的作用机理、影响因素、处理效果以及提高厌氧消化性能的策略等方面对国内外污泥的酶处理进行了归纳,重点介绍了污泥的酶处理效果,包括酶对污泥的溶解作用、厌氧消化性能、脱水性能的影响。最后提出了酶处理研究中存在的问题,并展望了今后的发展趋势。 展开更多
关键词 酶处理 溶解作用 厌氧消化 脱水性能 联合预处理
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芡实淀粉的酶解特性及体外消化模拟分析 被引量:9
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作者 张汆 魏兆军 +1 位作者 袁怀波 张曼 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第3期23-27,共5页
研究芡实淀粉的酶解特性及其在模拟过程中的消化特性。采用α-淀粉酶水解法,以酶解液中还原糖释放率为指标,对芡实淀粉的酶解特性进行分析。结果表明,α-淀粉酶的最优酶解条件为:α-淀粉酶用量350U/g、底物质量浓度为10g/100mL、pH值为6... 研究芡实淀粉的酶解特性及其在模拟过程中的消化特性。采用α-淀粉酶水解法,以酶解液中还原糖释放率为指标,对芡实淀粉的酶解特性进行分析。结果表明,α-淀粉酶的最优酶解条件为:α-淀粉酶用量350U/g、底物质量浓度为10g/100mL、pH值为6,于50℃水浴中水解60~80min。在此条件下,芡实淀粉酶解液中还原糖释放率可达79.61%。体外消化模拟结果显示,芡实淀粉在模拟消化中的还原糖和可溶性糖释放率均远低于酶解过程;且与米淀粉相比,芡实淀粉较难消化。研究认为,芡实淀粉在α-淀粉酶作用下,较易水解;消化模拟过程中,芡实淀粉的可消化性稍低于米淀粉,可能与其中残留的植物多酚类物质有关。 展开更多
关键词 芡实淀粉 Α-淀粉酶 酶解 消化模拟
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一种高效的小鼠肺单细胞悬液制备方法的研究 被引量:9
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作者 刘军 张朋书 +1 位作者 于晴 邱海波 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2012年第2期143-146,共4页
目的:应用胶原酶Ⅴ酶消化法建立一种高效的小鼠肺单细胞悬液制备方法。方法:小鼠处死后取出肺脏,将其剪碎,应用胶原酶Ⅴ(175 U.ml-1)消化,37℃孵育1 h,随后进行细胞计数、活细胞百分率和流式细胞仪检测。结果:(1)光镜下见胶原酶Ⅴ消化... 目的:应用胶原酶Ⅴ酶消化法建立一种高效的小鼠肺单细胞悬液制备方法。方法:小鼠处死后取出肺脏,将其剪碎,应用胶原酶Ⅴ(175 U.ml-1)消化,37℃孵育1 h,随后进行细胞计数、活细胞百分率和流式细胞仪检测。结果:(1)光镜下见胶原酶Ⅴ消化所得小鼠肺细胞多种多样,大小不一,细胞形态完整,分散度好;(2)30 mg小鼠肺组织可提取细胞数量为(1~3)×106个,肺单细胞悬液中活细胞百分率均在95%以上;(3)流式细胞术检测可见大量的肺细胞。结论:应用胶原酶Ⅴ酶消化法制备小鼠肺单细胞悬液高效、简便,为肺细胞生物学及肺部疾病发病机制研究提供了有效的肺单细胞制备方法。 展开更多
关键词 肺单细胞悬液 酶消化法 胶原酶Ⅴ 小鼠
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组织块法培养大鼠颌下腺细胞的实验研究 被引量:9
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作者 黄巍巍 谭学新 +4 位作者 李波 王哲 李欣宇 马丽 黄丹丹 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期194-196,共3页
目的探讨组织块法培养大鼠颌下腺细胞(RSGC)的方法与细胞生长的特点。方法采用组织块法培养RSGC,使用酶消化法和差速贴壁法进行细胞纯化,免疫组织化学SABC方法进行细胞角蛋白-8免疫组化染色,进行细胞来源鉴定。倒置显微镜下进行形态学观... 目的探讨组织块法培养大鼠颌下腺细胞(RSGC)的方法与细胞生长的特点。方法采用组织块法培养RSGC,使用酶消化法和差速贴壁法进行细胞纯化,免疫组织化学SABC方法进行细胞角蛋白-8免疫组化染色,进行细胞来源鉴定。倒置显微镜下进行形态学观察,取第2代RSGC,FDA-PI双色荧光法检测细胞活力,MTT法绘制生长曲线。结果细胞角蛋白-8染色阳性。倒置显微镜下,细胞主要呈3种形态,为圆形亮细胞、多角形暗细胞、梭形暗细胞。细胞活力>95%,生长曲线表示细胞5d开始进入对数生长期。结论此方法简便,易操作,获得了大量的RSGC,为颌下腺细胞作为种子细胞的颌下腺组织工程研究提供了实验基础和理论依据。 展开更多
关键词 颌下腺细胞 组织块培养方法 酶消化法 差速贴壁法 组织工程
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响应面法优化酶法制备薏苡仁寡糖工艺研究 被引量:4
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作者 郑舒怡 左佳昕 +3 位作者 戴鑫 高淑娟 张怡 卢旭 《化学试剂》 CAS 北大核心 2023年第2期90-97,共8页
以薏苡仁为原料,选取酶解温度、料液比、α-淀粉酶添加量以及酶解时间4个因素进行单因素试验,利用响应面法建立数学模型,根据所得模型分析4个因素对寡糖得率的影响,最后对提取工艺进行优化。结果表明最佳工艺条件为:料液比1∶16.41(g/mL... 以薏苡仁为原料,选取酶解温度、料液比、α-淀粉酶添加量以及酶解时间4个因素进行单因素试验,利用响应面法建立数学模型,根据所得模型分析4个因素对寡糖得率的影响,最后对提取工艺进行优化。结果表明最佳工艺条件为:料液比1∶16.41(g/mL)、酶添加量0.91 g、酶解时间111.49 min、酶解温度45.46℃,其中对薏苡仁寡糖得率影响最大的因素条件为酶解温度。在该条件下,薏苡仁寡糖得率为33.01%,与模型预测值33.19%接近,该工艺条件切实可行,可用于预测薏苡仁寡糖的提取。 展开更多
关键词 薏苡仁 寡糖 酶解 响应面 提取过程
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多宝鱼不同水解物肽段组成及体外抗氧化活性比较 被引量:3
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作者 李小锋 张露 +3 位作者 马天新 谢作桦 李金林 涂宗财 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第3期95-101,共7页
为研究熟化、模拟消化和酶解对多宝鱼肉水解物抗氧化活性的影响,本研究分别采用碱性蛋白酶和胃蛋白酶-胰蛋白酶水解多宝鱼生肉和熟肉,制备生肉碱性蛋白酶水解物、熟肉碱性蛋白酶水解物、生肉体外模拟消化产物和熟肉模拟消化产物,并评价... 为研究熟化、模拟消化和酶解对多宝鱼肉水解物抗氧化活性的影响,本研究分别采用碱性蛋白酶和胃蛋白酶-胰蛋白酶水解多宝鱼生肉和熟肉,制备生肉碱性蛋白酶水解物、熟肉碱性蛋白酶水解物、生肉体外模拟消化产物和熟肉模拟消化产物,并评价其水解度、相对分子质量分布、氨基酸组成、肽段组成和体外抗氧化活性的差异。结果表明:生肉碱性蛋白酶水解物的水解度最高,为20.18%;4种水解物的分子质量分布差异明显,共有肽段仅有1条,但氨基酸组成没有显著性差异;碱性蛋白酶水解物以肽段小于1000 Da的组分为主,2~4肽的含量达64.57%~51.73%,而模拟消化产物中1000~3000 Da的组分占比超过50%,以多肽(>10)为主,熟化过程会减少小肽(<6)的比例;体外抗氧化活性分析显示,碱性蛋白酶水解物的抗氧化活性均高于模拟消化样品,熟化会降低生肉碱性蛋白酶水解物的抗氧化能力,生肉碱性蛋白酶水解物具有最高的超氧阴离子和羟基自由基清除能力,以及最佳的铁离子还原能力。因此,碱性蛋白酶是优于模拟消化的多宝鱼蛋白水解方式,鱼肉的熟化总体上会降低水解物的抗氧化能力。 展开更多
关键词 多宝鱼 酶解 水解物 抗氧化 氨基酸组成 生物活性肽
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复合酶处理对活性污泥溶解的动力学机制研究 被引量:7
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作者 白润英 陈湛 +1 位作者 张伟军 王东升 《环境工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期5840-5846,共7页
研究了酶(蛋白酶和α-淀粉酶)处理过程中污泥溶解效率及动力学特征。研究表明,酶处理可以有效地溶解污泥絮体,上清液有机物含量明显上升,经淀粉酶处理的污泥上清液中的蛋白质和多糖浓度分别增长了268%和1 100%。同时,污泥的溶解过程遵... 研究了酶(蛋白酶和α-淀粉酶)处理过程中污泥溶解效率及动力学特征。研究表明,酶处理可以有效地溶解污泥絮体,上清液有机物含量明显上升,经淀粉酶处理的污泥上清液中的蛋白质和多糖浓度分别增长了268%和1 100%。同时,污泥的溶解过程遵循一阶反应动力学方程,蛋白酶与α淀粉酶的酶促水解动力学反应速率常数分别为0.146和0.306。复合酶(蛋白酶和α-淀粉酶)投加方式对污泥酶促水解效能有着重要的影响。淀粉酶先于蛋白酶投加的水解效率明显高于其他2种投加方式(蛋白酶先于淀粉酶投加和同时投加)。该研究成果为复合酶在污泥处理过程中的应用提供了理论依据。 展开更多
关键词 活性污泥 酶处理 动力学 絮体形态 厌氧消化
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酶解法制备花生肽及其抗氧化活性分析
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作者 牛家乐 田青 +1 位作者 伊艳杰 惠明 《河南工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第4期19-28,共10页
为提高花生粕利用价值,开发健康安全的花生肽功能食品,采用碱提酸沉法提取花生蛋白,利用碱性蛋白酶酶解制备花生抗氧化肽,通过单因素试验、 Plackett-Burman试验和响应面试验优化花生抗氧化肽的制备工艺,并对其酶解前后的成分和结构进... 为提高花生粕利用价值,开发健康安全的花生肽功能食品,采用碱提酸沉法提取花生蛋白,利用碱性蛋白酶酶解制备花生抗氧化肽,通过单因素试验、 Plackett-Burman试验和响应面试验优化花生抗氧化肽的制备工艺,并对其酶解前后的成分和结构进行测定,通过体外模拟胃肠道消化评价其抗氧化稳定性。结果表明:酶解花生蛋白制备花生抗氧化肽的最佳工艺条件为酶解pH9.5、温度50℃、碱性蛋白酶添加量6 100 U/g、底物浓度4%、时间4 h,在此条件下制备的花生抗氧化肽ABTS自由基清除率可达90.31%±0.53%、水解度可达35.06%±1.29%,与预测值无显著性差异;采用此工艺制备的花生肽抗氧化活性较花生蛋白提升约50%;体外模拟消化后,花生肽仍保持了较高的抗氧化活性。研究结果为花生抗氧化肽的高效制备及推动花生粕在食品加工行业的应用提供了理论依据。 展开更多
关键词 花生粕 酶解法 抗氧化肽 工艺优化 体外消化
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九香虫的营养评价及酶解多肽制备工艺优化
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作者 李家旭 杨扬 +2 位作者 王璧莹 黎攀 杜冰 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2024年第4期158-164,共7页
目的:探究九香虫营养成分组成与九香虫多肽的最佳酶解工艺条件。方法:按照国标法测定脂肪、蛋白质、总糖含量和脂肪酸组成,采用标准曲线法测定总黄酮和多酚含量;以九香虫多肽得率为指标,采用响应面法优化九香虫的酶解工艺条件;采用氨基... 目的:探究九香虫营养成分组成与九香虫多肽的最佳酶解工艺条件。方法:按照国标法测定脂肪、蛋白质、总糖含量和脂肪酸组成,采用标准曲线法测定总黄酮和多酚含量;以九香虫多肽得率为指标,采用响应面法优化九香虫的酶解工艺条件;采用氨基酸分析仪、高效凝胶渗透色谱法测定九香虫酶解物的氨基酸组成和相对分子质量分布;考察九香虫酶解物对DPPH自由基和ABTS+自由基的清除能力及总还原能力。结果:九香虫粗脂肪含量为43.40%,蛋白质含量为37.08%,总糖含量为7.64%,总黄酮含量为1.67%,总酚含量为1.90%;九香虫最佳酶解工艺为蒸煮时间5 h,酶解pH 10,酶解时间6 h,酶解温度55℃,该条件下多肽得率为35.74%;九香虫酶解物必需氨基酸和非必需氨基酸的比值为70.46%,九香虫酶解物相对分子质量<1000所占比例为88.1%;九香虫酶解物质量浓度为1.0 mg/mL时ABTS+自由基清除率达到88.44%。结论:在最佳酶解工艺下,九香虫多肽得率为35.74%,具有较高的营养价值和较好的抗氧化活性。 展开更多
关键词 九香虫 酶解 氨基酸组成 相对分子质量 抗氧化 多肽
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固定化酶ESM-BAP酶解制备甜杏仁ACE抑制肽及其工艺优化
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作者 张凯 刘媛 +3 位作者 王健 朱旭冉 宋丽军 王秀荣 《农产品加工》 2024年第10期47-52,56,共7页
为优化固定化酶酶解甜杏仁蛋白制备ACE抑制肽的工艺,采用交联法固定蛋壳膜(ESM)和碱性蛋白酶(BAP)后对甜杏仁蛋白进行酶解,通过单因素试验和响应面分析法对酶解条件进行优化。得到的最佳酶解工艺参数为加酶量7200 U/g,酶解时间4.1 h,酶... 为优化固定化酶酶解甜杏仁蛋白制备ACE抑制肽的工艺,采用交联法固定蛋壳膜(ESM)和碱性蛋白酶(BAP)后对甜杏仁蛋白进行酶解,通过单因素试验和响应面分析法对酶解条件进行优化。得到的最佳酶解工艺参数为加酶量7200 U/g,酶解时间4.1 h,酶解温度56.1℃,pH值10.7,在此条件下甜杏仁的ACE抑制率可达65.14%。该条件适合甜杏仁蛋白ACE抑制肽的制备,为实际生产和应用提供理论依据。 展开更多
关键词 固定化酶 酶解 ACE抑制肽 工艺
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海洋生物活性肽的制备、分离纯化及构效关系研究进展 被引量:5
14
作者 唐鹏杰 韩秋煜 +2 位作者 包斌 包春玲 吴文惠 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第24期488-495,共8页
海洋生物活性肽是一类结构多样且具有多种功能和活性的肽类,其制备、分离纯化和生物活性受到了广泛关注。已有不少相关研究证明海洋生物活性肽是一类很具开发潜力的新型药物来源。然而,整合海洋生物活性肽制备技术和生物应用的研究还较... 海洋生物活性肽是一类结构多样且具有多种功能和活性的肽类,其制备、分离纯化和生物活性受到了广泛关注。已有不少相关研究证明海洋生物活性肽是一类很具开发潜力的新型药物来源。然而,整合海洋生物活性肽制备技术和生物应用的研究还较缺乏,为此本文综述了近年来海洋生物活性肽制备、分离纯化的方法,并阐述了其原理、优缺点、适用对象和未来发展趋势,介绍了海洋生物活性肽的抗氧化、抗糖尿病、降血压、抗菌、抗癌等功能活性,并深入探讨了其构效关系和未来发展方向,以便为开发新型海洋药物提供有力理论依据。 展开更多
关键词 海洋生物活性肽 酶解 超滤 制备 分离纯化 构效关系
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响应面法优化罂粟科植物叶片原生质体的制备条件
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作者 邵瑛瑛 唐其 +2 位作者 彭晓英 黄子豪 郑亚杰 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期119-129,共11页
【目的】系统优化罂粟科(Papaveraceae)植物叶片原生质体提取的影响因素,建立其高效的原生质体提取体系。【方法】以花菱草(Eschscholtzia californica Cham.)幼苗为罂粟科模式植物,通过单因素试验对影响原生质体产量和活力的预制液浓... 【目的】系统优化罂粟科(Papaveraceae)植物叶片原生质体提取的影响因素,建立其高效的原生质体提取体系。【方法】以花菱草(Eschscholtzia californica Cham.)幼苗为罂粟科模式植物,通过单因素试验对影响原生质体产量和活力的预制液浓度、酶解液组成、酶解时间进行考察,借助响应面Box-Behnken设计预测最佳提取方案,并将最佳方案在罂粟亚科(Papaveroideae)、角茴香亚科(Hypecooideae)和荷包牡丹亚科(Fumarioideae)的代表性植物中进行验证。【结果】当预制液浓度为0.8 mol/L、酶解时间6 h、酶解液组成为1.5%纤维素酶+0.4%离析酶+0.3%果胶酶时,花菱草原生质体的产量和活力最为理想,与响应面法的预测结果一致,能够成功获取罂粟科植物叶片的原生质体。【结论】本研究方法可实现罂粟科植物叶片原生质体的高效提取,为后续瞬时表达体系、亚细胞定位、单细胞测序等研究提供技术支撑。 展开更多
关键词 罂粟科 原生质体 酶解法 单因素试验 Box-Behnken响应面法
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奶牛乳腺上皮细胞的原代培养及其生物学特性分析 被引量:5
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作者 孙培皓 赵鑫哲 +3 位作者 吴涵潇 吕策 杨利国 梁爱心 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期447-458,共12页
旨在从奶牛乳腺组织中分离原代乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)并传代培养后探究其生物学特性。本研究从屠宰场采集健康泌乳奶牛乳腺并采用改进的酶消化法从乳腺中分离得到原代奶牛乳腺上皮细胞,通过形态学观察、... 旨在从奶牛乳腺组织中分离原代乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)并传代培养后探究其生物学特性。本研究从屠宰场采集健康泌乳奶牛乳腺并采用改进的酶消化法从乳腺中分离得到原代奶牛乳腺上皮细胞,通过形态学观察、免疫荧光以及染色体核型分析的方法对其进行鉴定。同时,研究第3、第6和第9代乳腺上皮细胞的生长曲线、群体倍增时间和冻存复苏活力,检测不同代次细胞分泌乳蛋白、乳脂、乳糖的功能及泌乳相关基因的表达。结果表明,所分离的奶牛乳腺上皮细胞纯度较好,细胞生长呈现S型,3个代次细胞的群体倍增时间依次为34.87、41.45和65.04 h,冻存复苏活力为88%~93%;在细胞分泌功能方面,诱导培养2 d后均能检测到酪蛋白、甘油三酯和乳糖,且各代次间无显著差异;此外,3个代次的细胞诱导后均能表达乳成分合成相关基因。本研究成功培养了原代奶牛乳腺上皮细胞,并证明直到第9代细胞仍然具有正常的生物学功能,为体外探究乳腺细胞增殖与分化机制提供了良好的试验材料和技术支撑。 展开更多
关键词 酶消化 原代培养 生物学特性 奶牛乳腺上皮细胞
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人胎盘源间充质干细胞的分离、培养及生物学鉴定 被引量:6
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作者 赖平 陈懿建 +3 位作者 罗耀玲 张敏鸿 杨建琼 邱悦群 《赣南医学院学报》 2016年第2期183-186,共4页
目的:探讨机械剪碎组织加酶液消化法分离、培养人胎盘间充质干细胞的可行性,并对间充质干细胞进行生物学鉴定。方法:取足月产人胎盘,采用机械剪碎组织加酶液消化法分离,密度梯度离心法提纯胎盘组织中的细胞,利用细胞生长特性对细胞进行... 目的:探讨机械剪碎组织加酶液消化法分离、培养人胎盘间充质干细胞的可行性,并对间充质干细胞进行生物学鉴定。方法:取足月产人胎盘,采用机械剪碎组织加酶液消化法分离,密度梯度离心法提纯胎盘组织中的细胞,利用细胞生长特性对细胞进行进一步分离、纯化并传代培养,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术鉴定细胞表面标记。结果:在倒置显微镜下,细胞为贴壁生长,形态呈长梭形,少数为多角形,胎盘组织来源间充质干细胞在体外可稳定长期传代培养,应用流式细胞仪检测结果显示CD73、CD90、CD105表达阳性,CD34、CD45、HLADR表达阴性。结论:联合利用机械剪碎胎盘组织和酶消化法可高效获取胎盘间充质干细胞,获取的胎盘间充质干细胞在体外培养过程中生长稳定,增殖能力强,可长期传代或冻存。 展开更多
关键词 人胎盘间充质干细胞 机械剪碎 酶消化 干细胞培养
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双酶联合消化法培养人皮肤成纤维细胞 被引量:5
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作者 孔杰 刘原君 +4 位作者 范丽云 齐蔓莉 王敬 韩珑 刘全忠 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期772-775,共4页
目的建立一种便捷、高效的人皮肤成纤维细胞体外培养技术,获得大量高纯度原代细胞。方法取健康成年男性包皮标本,去除皮下组织,将皮肤剪成小皮片,以0.25%的胰蛋白酶溶液4 ℃消化过夜后分离去除表皮;将真皮组织剪碎,加入0.1%胶原酶Ⅱ溶... 目的建立一种便捷、高效的人皮肤成纤维细胞体外培养技术,获得大量高纯度原代细胞。方法取健康成年男性包皮标本,去除皮下组织,将皮肤剪成小皮片,以0.25%的胰蛋白酶溶液4 ℃消化过夜后分离去除表皮;将真皮组织剪碎,加入0.1%胶原酶Ⅱ溶液后于37 ℃ CO2孵育箱中消化3~4 h,筛网过滤,收集滤液后离心、培养。绘制细胞生长曲线,HE染色观察细胞形态,细胞免疫荧光、Western blot检测Vimentin鉴定成纤维细胞,取第3代、第6代细胞以流式细胞术检测细胞纯度。结果获得原代人皮肤成纤维细胞;细胞生长周期:0~2 d为潜伏期,2~5 d为指数生长期,之后进入平台期;细胞为梭形或星形;Vimentin表达呈阳性,鉴定为成纤维细胞;第3代、第6代成纤维细胞纯度分别为95.82%、99.51%。结论利用双酶联合消化法成功培养高纯度原代人皮肤成纤维细胞,为进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 皮肤 成纤维细胞 原代培养 酶消化法
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挤压-酶解大豆蛋白结构与特性关系及其乳液乳化活性评价 被引量:1
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作者 朱秀清 扈钦淋 +3 位作者 刘燕清 朱颖 刘琳琳 黄雨洋 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第22期279-286,共8页
以低温冷榨豆粕粉为原料,研究挤压-酶解处理对大豆蛋白酶解物蛋白结构及其乳液界面特性的影响,并探究酶解物乳液对蛋液稳定性的改善作用。结果表明,经挤压预处理的大豆蛋白酶解物柔性和表面疏水性随着酶解时间的延长呈现先增加后减少的... 以低温冷榨豆粕粉为原料,研究挤压-酶解处理对大豆蛋白酶解物蛋白结构及其乳液界面特性的影响,并探究酶解物乳液对蛋液稳定性的改善作用。结果表明,经挤压预处理的大豆蛋白酶解物柔性和表面疏水性随着酶解时间的延长呈现先增加后减少的变化趋势,在酶解30 min时分别达到最大值0.40和44.96;挤压大豆蛋白酶解物的二级结构由有序向无序状态转变,表现为β-转角和无规则卷曲的含量增加,β-折叠和α-螺旋的含量减少。挤压大豆蛋白酶解物乳液的储能模量G'和损耗模量G''及界面肽含量均随着酶解程度的增强呈现先增大后减小的趋势,乳化活性和乳化稳定性也在酶解30 min时分别达到最佳值28.45 m^(2)/g和61.05 min。挤压大豆蛋白酶解物乳液与蛋液以3:3质量比混合时,采用多重光散射分析乳液的稳定性,其不稳定性系数(thermal instability index,TSI)较小,乳液体系呈现较好稳定性,表明挤压大豆蛋白酶解物乳液可以有效改善蛋液的稳定性。该研究为大豆蛋白酶解物在乳化食品领域中应用提供理论基础。 展开更多
关键词 大豆蛋白 酶解 挤压 界面特性 乳液 稳定性
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改良联合酶消化法制备人瘢痕疙瘩组织单细胞悬液的实验研究 被引量:5
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作者 黄昕 徐祥文 +4 位作者 高雅姗 李海洲 顾舒晨 邝依敏 昝涛 《组织工程与重建外科杂志》 2019年第6期398-402,共5页
目的探讨改良的联合酶消化法对于瘢痕疙瘩真皮组织的消化效果,并探究最佳消化时间。方法收集瘢痕疙瘩样本8例,去除表皮后用剪刀将真皮组织匀浆。真皮匀浆采用A、B两种方案进行消化。A方案采用传统的联合酶消化法(Ⅰ型胶原酶+Ⅱ型胶原酶... 目的探讨改良的联合酶消化法对于瘢痕疙瘩真皮组织的消化效果,并探究最佳消化时间。方法收集瘢痕疙瘩样本8例,去除表皮后用剪刀将真皮组织匀浆。真皮匀浆采用A、B两种方案进行消化。A方案采用传统的联合酶消化法(Ⅰ型胶原酶+Ⅱ型胶原酶+Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶);B方案采用改良联合酶消化法,在A方案的基础上添加了DNaseⅠ。采用显微镜计数单细胞占比和单细胞数,台盼蓝染色和流式细胞检测细胞活性,比较A、B两种消化方案的消化效率,同时探究B方案的最佳消化时间。结果消化2 h和4 h后,B方案相比A方案获得的单细胞比例显著升高(P<0.05),单细胞数显著增多(P<0.01)。应用B方案,消化时间延长至6 h,相比消化4 h得到的单细胞比例和单细胞数显著增加(P<0.05),细胞活性无明显改变(P>0.05)。消化时间延长至8 h和10 h,与6 h相比,单细胞比例和单细胞数无明显增加(P>0.05),细胞活性显著下降(P<0.05)。结论在传统联合酶消化液中添加DNaseⅠ能够提高消化效率,有效制备疤痕疙瘩组织的单细胞悬液。组织消化6 h能够在保持细胞活性的同时达到较好的消化效果。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 酶消化法 单细胞悬液制备 流式细胞技术
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