目的探讨8型腺相关病毒的制备方法,初步检测其在体内的表达。方法采用载体质粒、辅助质粒和包装质粒三质粒磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,包装病毒,经超声破碎-饱和硫酸铵沉淀-氯化铯梯度离心提取并纯化病毒。肌肉注射感染肌肉组织,...目的探讨8型腺相关病毒的制备方法,初步检测其在体内的表达。方法采用载体质粒、辅助质粒和包装质粒三质粒磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,包装病毒,经超声破碎-饱和硫酸铵沉淀-氯化铯梯度离心提取并纯化病毒。肌肉注射感染肌肉组织,检测报告基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresent prote in,EGFP)在体内的表达活性。结果成功包装制备出8型腺相关病毒,重组病毒能够有效感染肌肉组织,绿色荧光蛋白在肌肉组织中稳定高效表达。结论此实验方法制备病毒的质量能够满足小动物体内实验的要求,为进一步应用其进行基因治疗打下基础。展开更多
目的研究腺病毒携带目的基因经小鼠耳后入路圆窗膜显微注射途径耳蜗转导的可行性,为以小鼠作为动物模型的内耳基因治疗提供实验基础和解剖学依据。方法12只C57BL/6J小鼠分为2组,实验组(8只)以重组腺病毒携带的增强型绿色荧光蛋白基因(en...目的研究腺病毒携带目的基因经小鼠耳后入路圆窗膜显微注射途径耳蜗转导的可行性,为以小鼠作为动物模型的内耳基因治疗提供实验基础和解剖学依据。方法12只C57BL/6J小鼠分为2组,实验组(8只)以重组腺病毒携带的增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、对照组(4只)以人工外淋巴液经耳后入路圆窗膜显微注射注入耳蜗内。分别于术后5、14天取双侧耳蜗标本做基底膜铺片,在激光共聚焦显微镜下观察GFP表达。结果术后动物存活10只(每组死亡1只)。实验组转染后耳蜗底回基底膜及螺旋神经节上目的基因有表达,14天组强于5天组。对照组耳蜗未见荧光表达。结论耳后入路操作简单、损伤小、易于暴露圆窗龛。耳后入路圆窗膜显微注射腺病毒携带目的基因转导的方法能够将目的基因成功转导至耳蜗组织并表达。展开更多
文摘目的探讨8型腺相关病毒的制备方法,初步检测其在体内的表达。方法采用载体质粒、辅助质粒和包装质粒三质粒磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,包装病毒,经超声破碎-饱和硫酸铵沉淀-氯化铯梯度离心提取并纯化病毒。肌肉注射感染肌肉组织,检测报告基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresent prote in,EGFP)在体内的表达活性。结果成功包装制备出8型腺相关病毒,重组病毒能够有效感染肌肉组织,绿色荧光蛋白在肌肉组织中稳定高效表达。结论此实验方法制备病毒的质量能够满足小动物体内实验的要求,为进一步应用其进行基因治疗打下基础。
文摘目的研究腺病毒携带目的基因经小鼠耳后入路圆窗膜显微注射途径耳蜗转导的可行性,为以小鼠作为动物模型的内耳基因治疗提供实验基础和解剖学依据。方法12只C57BL/6J小鼠分为2组,实验组(8只)以重组腺病毒携带的增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、对照组(4只)以人工外淋巴液经耳后入路圆窗膜显微注射注入耳蜗内。分别于术后5、14天取双侧耳蜗标本做基底膜铺片,在激光共聚焦显微镜下观察GFP表达。结果术后动物存活10只(每组死亡1只)。实验组转染后耳蜗底回基底膜及螺旋神经节上目的基因有表达,14天组强于5天组。对照组耳蜗未见荧光表达。结论耳后入路操作简单、损伤小、易于暴露圆窗龛。耳后入路圆窗膜显微注射腺病毒携带目的基因转导的方法能够将目的基因成功转导至耳蜗组织并表达。
