Aspergillus ficuum菊粉酶的分离纯化及其酶解菊粉制备低聚果糖 被引量：12

1

作者 王静 金征宇 +1 位作者 江波 徐学明 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期5-9,20,共6页

采用硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、DEAE-Cellulose离子交换色谱等分离纯化技术，从Aspergillus ficuum菌株混合酶系中分离得到4种菊粉酶组分，应用薄层层析法分离各组分水解菊粉的产物，发现其中3种组分主要含外切菊粉酶，一种主要含有内... 采用硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、DEAE-Cellulose离子交换色谱等分离纯化技术，从Aspergillus ficuum菌株混合酶系中分离得到4种菊粉酶组分，应用薄层层析法分离各组分水解菊粉的产物，发现其中3种组分主要含外切菊粉酶，一种主要含有内切菊粉酶。进一步对所得到的内切菊粉酶组分酶解菊粉制备低聚果糖进行了研究，研究了底物浓度、加酶量、反应温度和反应pH对低聚果糖制备的影响，确定其最适反应条件为：底物浓度50g／L、加酶量10U／g底物，反应温度45℃，反应PH6．0。在此条件下反应72h，菊粉酶解率达74％，低聚果糖得率可达50％以上，酶解产物以DP2～DP4为主。 展开更多

关键词 ASPERGILLUS ficuum 菊粉酶 外切菊粉酶 内切菊粉酶 低聚果糖

下载PDF 职称材料

毛壳霉内切菊粉酶的纯化与性质 被引量：7

2

作者 张国青 崔福绵 +1 位作者 杨秀清 钱世钧 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期785-788,共4页

毛壳霉 (Chaetomiumsp .)C34发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE 纤维素 11离子交换层析、Q SepharoseFastFlow离子交换层析、SephacrylS 2 0 0凝胶过滤、PhenolSepharoseTM HP疏水层析 ,得到电泳纯的内切菊粉酶组分 ,纯化倍数为 30 8倍 ,... 毛壳霉 (Chaetomiumsp .)C34发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE 纤维素 11离子交换层析、Q SepharoseFastFlow离子交换层析、SephacrylS 2 0 0凝胶过滤、PhenolSepharoseTM HP疏水层析 ,得到电泳纯的内切菊粉酶组分 ,纯化倍数为 30 8倍 ,活力回收率为 7 7%。用SDS PAGE测得该酶亚基的分子量为 6 6kD。菊粉酶的最适pH为 6 0 ,最适温度为 5 0～ 5 5℃。菊粉酶在 5 0℃以下 ,pH5 0～ 8 0时较稳定。Cu2 + 完全抑制酶的活性 ,Mn2 + 、Zn2 + 、Fe2 + 、EDTA以及NBS(N bromosuccinimide ,N 溴代丁二酰亚胺 )对该酶有很强的抑制作用。该酶对菊粉有较强底物专一性 ,产物主要为低聚果糖 ,也可作用于蔗糖 ,I S值为 2 0。以菊粉为底物时 ,Km 为 0 199mmol L ,Vmax为 115 μmol (mg·min)。 展开更多

关键词 毛壳霉 内切菊粉酶 纯化 性质

下载PDF 职称材料

菊粉低聚糖生产的研究进展 被引量：7

3

作者 侯东军 曾凡坤 《广州食品工业科技》 2003年第1期41-43,共3页

菊粉低聚糖是一种功能性低聚糖 ,可以洋姜 ,菊苣等为原料 ,由菊粉内切酶酶解而生产 ,工艺简单 ,成本低。本文简单介绍了菊粉低聚糖的生产意义 ,基本生产过程 ,产物分析方法 ,及国内外开发现状 ;重点介绍了生产过程中技术新进展 ,主要包... 菊粉低聚糖是一种功能性低聚糖 ,可以洋姜 ,菊苣等为原料 ,由菊粉内切酶酶解而生产 ,工艺简单 ,成本低。本文简单介绍了菊粉低聚糖的生产意义 ,基本生产过程 ,产物分析方法 ,及国内外开发现状 ;重点介绍了生产过程中技术新进展 ,主要包括原料的预处理 ,菌种的选用 ,酶的固定化 ,细胞的固定化 。 展开更多

关键词 菊粉低聚糖 菊粉内切酶 生产方法 技术发展 开发

下载PDF 职称材料

微生物低聚果糖合成酶及其应用研究述评

4

作者 王建华 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2003年第6期544-551,共8页

综述了微生物低聚果糖合成酶来源 ,基因结构 ,酶学性质 ,反应机理 ,产酶发酵和低聚果糖合成机理等方面的研究进展。

关键词 低聚果糖 果糖基转移酶 菊粉内切酶 微生物 基因 酶学性质 合成

下载PDF 职称材料

Aspergillus ficuum菊粉酶酶学性质的研究 被引量：3

5

作者 王静 金征宇 +1 位作者 孙宝国 曹雁平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第4期272-277,共6页

本实验对Aspergillus ficuum产菊粉酶体系中的外切菊粉酶和内切菊粉酶的酶学性质进行了研究,研究表明二者酶学性质非常相似:两种酶的最适反应温度均在45℃左右;外切菊粉酶的最适反应pH为4.5,内切菊粉酶为pH5.0;Ag^+完全抑制两种酶的活性... 本实验对Aspergillus ficuum产菊粉酶体系中的外切菊粉酶和内切菊粉酶的酶学性质进行了研究,研究表明二者酶学性质非常相似:两种酶的最适反应温度均在45℃左右;外切菊粉酶的最适反应pH为4.5,内切菊粉酶为pH5.0;Ag^+完全抑制两种酶的活性,Fe^2+和Al^3+对两种酶有较强的抑制作用,尤其是外切菊粉酶,Mg^2+对两种酶有激活作用;实验还对两种酶的动力学常数进行了测定和比较。 展开更多

关键词 外切菊粉酶 内切菊粉酶 酶学性质 ASPERGILLUS ficuum

下载PDF 职称材料

菊粉低聚糖生产的研究进展 被引量：4

6

作者 侯东军 曾凡坤 《中国食品添加剂》 CAS 2003年第5期88-90,共3页

菊粉低聚糖是一种功能性低聚糖 ,可以洋姜 ,菊苣等为原料 ,由菊粉内切酶酶解而生产 ,工艺简单 ,成本低。本文简单介绍了菊粉低聚糖的生产意义 ,基本生产过程 ,产物分析方法 ,及国内外开发现状 ;重点介绍了生产过程中技术新进展 ,主要包... 菊粉低聚糖是一种功能性低聚糖 ,可以洋姜 ,菊苣等为原料 ,由菊粉内切酶酶解而生产 ,工艺简单 ,成本低。本文简单介绍了菊粉低聚糖的生产意义 ,基本生产过程 ,产物分析方法 ,及国内外开发现状 ;重点介绍了生产过程中技术新进展 ,主要包括原料的预处理 ,菌种的选用 ,酶的固定化 ,细胞的固定化 ,以及原料对产品的影响。 展开更多

关键词 菊粉低聚糖 菊粉内切酶酶解生产 原料预处理 菌种选用 酶固定化 产物分析

下载PDF 职称材料

内切菊糖酶的分离纯化及性质研究 被引量：2

7

作者 史贤俊 林影 吴晓英 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期65-69,共5页

采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析从Fructozyme (Aspergillus niger) 中分离得到三个菊糖酶组份EⅠ、EⅡ和EⅢ,其中EⅠ主要表现为内切菊糖酶,其分子量为65,000,以菊糖为底物其最适pH为4.6,最适温度为60℃,Km值为16mmol/L,对pH及... 采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析从Fructozyme (Aspergillus niger) 中分离得到三个菊糖酶组份EⅠ、EⅡ和EⅢ,其中EⅠ主要表现为内切菊糖酶,其分子量为65,000,以菊糖为底物其最适pH为4.6,最适温度为60℃,Km值为16mmol/L,对pH及温度有较高的稳定性,并利用液相色谱对菊糖酶EI催化水解菊糖的产物进行分析研究。 展开更多

关键词 内切菊糖酶 分离纯化 离子交换层析 动力学性质 稳定性

下载PDF 职称材料

一株产内切菊粉酶菌株培养条件的响应面优化 被引量：3

8

作者 苟亚峰 王丹 +3 位作者 孙丹 张岩 葛娟 高剑峰 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期135-140,共6页

从新疆石河子盐碱地菊芋生长根际土壤中,分离筛选得到10株具有内切菊粉酶活力的菌株,复筛得到1株高产内切菊粉酶活力菌株,将其命名为G-60。在单因素实验的基础上,采用Plackett-Burman实验法对8个因素进行了显著因素的筛选,结果表明,菊... 从新疆石河子盐碱地菊芋生长根际土壤中,分离筛选得到10株具有内切菊粉酶活力的菌株,复筛得到1株高产内切菊粉酶活力菌株,将其命名为G-60。在单因素实验的基础上,采用Plackett-Burman实验法对8个因素进行了显著因素的筛选,结果表明,菊粉浓度、蛋白胨浓度和装液量对内切菊粉酶酶活影响显著;通过最陡爬坡实验及Central Composite Design设计进一步优化,得到最佳发酵产酶条件为:菊粉浓度66.5g/L、蛋白胨浓度29.1g/L、装液量49.38mL,内切菊粉酶活力达24.62U/mL,与优化前相比提高了1.55倍。 展开更多

关键词 菌株G-60 内切菊粉酶 响应面法

下载PDF 职称材料

Aspergillus ficuum内切菊粉酶的酶解条件优化及酶解动力学研究 被引量：2

9

作者 王静 金征宇 +2 位作者 江波 曹雁平 孙宝国 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第21期161-165,共5页

采用Aspergillus ficuum内切型菊粉酶Endo-Ⅰ酶解商品菊粉制备低聚果糖,经正交试验确定其最适酶解条件为:pH5.0、温度45℃、底物浓度50g/L、加酶量10U/g,在此酶解条件下,低聚果糖得率可达70.37%,酶解产物以DP3和DP4为主,同时含有一定量... 采用Aspergillus ficuum内切型菊粉酶Endo-Ⅰ酶解商品菊粉制备低聚果糖,经正交试验确定其最适酶解条件为:pH5.0、温度45℃、底物浓度50g/L、加酶量10U/g,在此酶解条件下,低聚果糖得率可达70.37%,酶解产物以DP3和DP4为主,同时含有一定量的DP2、DP5、DP6、DP7、DP8;在此条件下酶解自制菊芋干粉时,低聚果糖得率为41.72%,酶解产物以DP3～DP6的低聚果糖为主,DP2含量很少,同时酶解液中还含有大量的果糖;在此条件下酶解自制菊芋提取液时,低聚果糖得率高达79.80%,酶解产物中除DP6含量较低外,其他各聚合度的低聚糖分布比较平均。在此相同酶解条件下酶解72h时,3种底物中,以菊芋提取液酶解后的低聚果糖得率最高。因此,应用Aspergillus ficuum内切型菊粉酶Endo-Ⅰ酶解菊芋制备低聚果糖宜选择菊芋提取液作底物。 展开更多

关键词 ASPERGILLUS ficuum 内切菊粉酶 酶解条件优化 动力学

下载PDF 职称材料

黑曲霉中内切菊粉酶基因及其全合成基因在解脂耶氏酵母中表达的比较 被引量：1

10

作者 祝林 王博 +3 位作者 陈晶 舒望云 蒋思婧 马立新 《氨基酸和生物资源》 CAS 2006年第2期32-34,44,共4页

利用酵母密码子偏爱性将黑曲霉(Aspergillus niger)中的内切菊粉酶(Endoinu linase)基因通过基因全合成的方式合成为酵母密码子偏爱性的内切菊粉酶基因。然后将原始和全合成的内切菊粉酶基因克隆到解脂耶氏酵母表达载体PINA1296上,得重... 利用酵母密码子偏爱性将黑曲霉(Aspergillus niger)中的内切菊粉酶(Endoinu linase)基因通过基因全合成的方式合成为酵母密码子偏爱性的内切菊粉酶基因。然后将原始和全合成的内切菊粉酶基因克隆到解脂耶氏酵母表达载体PINA1296上,得重组解脂耶氏酵母表达载体pHBM2020、pHBM2021,将两种质粒分别转化解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)CLIB725,筛选得到重组解脂耶氏酵母CLIB725(pHBM2020)、CLIB725(pHBM2021),将两种重组酵母摇瓶培养,经SDS-PAGE、测酶活检测表明两种基因在解脂耶氏酵母中都有表达,全合成菊粉酶比原始菊粉酶酶活要高。 展开更多

关键词 内切菊粉酶 解脂耶氏酵母 酵母密码子偏爱性

下载PDF 职称材料

Aspergillus ficuum产果聚糖酶体系的分析 被引量：1

11

作者 王静 金征宇 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2002年第4期424-427,共4页

采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳法对Aspergillusficuum产果聚糖酶体系进行了分离 ,获得8条谱带 ;进一步运用薄层色谱 (TLC)和高效液相色谱 (HPLC)法进行分析 ,发现 8条谱带中有 3条属于外切菊粉酶 ,2条属于内切菊粉酶 ,证明了Aspergillusfi... 采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳法对Aspergillusficuum产果聚糖酶体系进行了分离 ,获得8条谱带 ;进一步运用薄层色谱 (TLC)和高效液相色谱 (HPLC)法进行分析 ,发现 8条谱带中有 3条属于外切菊粉酶 ,2条属于内切菊粉酶 ,证明了Aspergillusficuum能同时产内切菊粉酶和外切菊粉酶 . 展开更多

关键词 果聚糖酶 外切菊粉酶 内切菊粉酶 活性聚丙烯酰胺凝胶电泳法 分离

下载PDF 职称材料

Aspergillus ficuum菊粉酶的化学修饰和荧光光谱

12

作者 陈晓明 陈寒青 +2 位作者 王静 金征宇 徐学明 《江苏大学学报（自然科学版）》 EI CAS 北大核心 2009年第4期334-337,361,共5页

选用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)、焦碳酸二乙酯(DEPC)、丁二酮(DIC)、氯氨-T(Ch-T)、碳二亚胺(EDC)、苯甲基磺酰氟(PMSF)和二硫苏糖醇(DTT)等化学修饰剂,通过对Aspergillus ficu-um内切和外切菊粉酶进行修饰,以研究菊粉酶分子中氨基酸侧链... 选用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)、焦碳酸二乙酯(DEPC)、丁二酮(DIC)、氯氨-T(Ch-T)、碳二亚胺(EDC)、苯甲基磺酰氟(PMSF)和二硫苏糖醇(DTT)等化学修饰剂,通过对Aspergillus ficu-um内切和外切菊粉酶进行修饰,以研究菊粉酶分子中氨基酸侧链基团对酶活性的影响.研究结果表明:内切菊粉酶和外切菊粉酶活性中心的必需氨基酸残基均含有色氨酸和羧基氨基酸,且内切和外切菊粉酶活性中心的色氨酸残基数目分别为1和2;组氨酸可能是酶活性中心的组成基团.荧光光谱法研究表明:内切菊粉酶的色氨酸残基比外切菊粉酶的色氨酸残基所处环境的极性大,对环境的变化更敏感,并且更加暴露,表明这两种酶具有不同的构象,这种构象上的差别可能是导致二者对底物菊粉作用机理不同的原因. 展开更多

关键词 内切菊粉酶 外切菊粉酶 酶活性 化学修饰 荧光光谱

下载PDF 职称材料

一株产菊粉内切酶酵母Kluveromyces NSY5发酵条件优化

13

作者 段学辉 王志园 李强 《南昌大学学报（工科版）》 CAS 2010年第1期14-19,共6页

在单因素实验基础上,采用Plackett-Burman实验设计对影响KluveromycesNSY5发酵产菊粉内切酶的碳源、氮源、无机盐、发酵时间等8个选择因素进行筛选,结果显示,培养基的菊芋汁浓度、摇瓶装液量和发酵时间对菌株发酵产酶具有显著影响。根... 在单因素实验基础上,采用Plackett-Burman实验设计对影响KluveromycesNSY5发酵产菊粉内切酶的碳源、氮源、无机盐、发酵时间等8个选择因素进行筛选,结果显示,培养基的菊芋汁浓度、摇瓶装液量和发酵时间对菌株发酵产酶具有显著影响。根据实验结果和经验方法对显著影响因素的优化取值范围进行预估,并选择适当的水平设计,用Box-Behnken中心组合实验和响应面寻优分析找出显著影响因素的极优值,验证实验结果表明,采用优化的菊芋汁浓度3.5%、装液量50 mL/250 mL、发酵时间56 h,KluveromycesNSY5摇瓶发酵液中的菊粉内切酶I/S比值达到18.29,比初始发酵条件下的菊粉内切酶I/S比值12.4提高47.5%,优化预测值和实验验证值的相对误差为0.26%。 展开更多

关键词 菊粉内切酶 单因子法 Plackett-Burman实验 Box-Behnken实验 响应面分析

下载PDF 职称材料

菊粉内切酶在毕赤酵母中的表达及酶学性质测定

14

作者 王淮 罗文浩 +2 位作者 普元倩 徐春萍 杨健康 《井冈山大学学报（自然科学版）》 2020年第3期34-38,共5页

为了实现菊粉内切酶在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高活性表达并对表达的菊粉内切酶酶学性质、水解菊粉的产物进行分析。通过下载无花果曲霉菊粉内切酶基因的编码序列,做了密码子优化后进行全基因合成,然后在毕赤酵母GS115中表达。对... 为了实现菊粉内切酶在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高活性表达并对表达的菊粉内切酶酶学性质、水解菊粉的产物进行分析。通过下载无花果曲霉菊粉内切酶基因的编码序列,做了密码子优化后进行全基因合成,然后在毕赤酵母GS115中表达。对表达的菊粉内切酶的酶活、最适反应温度、最适pH值、热稳定性进行了分析,最后对酶水解菊粉的产物进行了高效液相色谱(HPLC)分析。摇瓶表达的酶活力为420 U/mL,酶的最适反应温度为55℃,最适反应pH为6.0。HPLC分析表明:表达的菊粉内切酶酶解底物菊粉的主要产物为低聚果糖,聚合度为3~5之间。构建的工程酵母可以高效表达菊粉内切酶,可以用于生产低聚果糖。 展开更多

关键词 毕赤酵母 菊粉内切酶 表达 酶学性质 水解产物

下载PDF 职称材料

产内切菊粉酶的海洋放线菌菌株的筛选与鉴定

15

作者 宫颖 于基成 刘秋 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第21期171-174,共4页

获得高活性内切菊粉酶微生物菌株是以菊粉生产低聚果糖的基础。本研究采用以菊粉为唯一碳源的选择培养基从鸭绿江滨海湿地海泥样品中筛选获得14株产菊粉酶菌株。通过摇瓶复筛,获得3株产较高活力内切菊粉酶的放线菌菌株,其酶活力分别为14... 获得高活性内切菊粉酶微生物菌株是以菊粉生产低聚果糖的基础。本研究采用以菊粉为唯一碳源的选择培养基从鸭绿江滨海湿地海泥样品中筛选获得14株产菊粉酶菌株。通过摇瓶复筛,获得3株产较高活力内切菊粉酶的放线菌菌株,其酶活力分别为14.13、18.24、28.52U/m L。通过16S rRNA测序分析和形态观察确定该3株菌分别为孔雀石褐链霉菌(Streptomyces malachitofuscus)、棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora)、锂链霉菌(Streptomyces carpaticu)。其产酶活性均高于目前已报道产内切菊粉酶放线菌菌株,为内切菊粉酶工业化生产提供了依据。 展开更多

关键词 内切菊粉酶 海洋放线菌 筛选 鉴定

下载PDF 职称材料

酶法制备果寡糖的研究进展

16

作者 王建华 刘艳艳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 1999年第5期48-54,共7页

综述了20世纪90年代国际上关于果寡糖(FOS)合成酶系——果糖转移酶以及菊粉内切酶的基因结构、酶学性质、酶反应机理,介绍了果寡糖结构与性质、功能、生产与应用等方面研究的最新进展。

关键词 果寡糖 果糖转移酶 菊粉内切酶 酶学性质

下载PDF 职称材料

内切菊粉酶在大肠杆菌中的高效表达

17

作者 吴若凡 马江锋 +2 位作者 戴仲雪 王培培 姜岷 《生物加工过程》 CAS 2016年第5期45-50,共6页

内切菊粉酶可以有效地水解菊粉得到低聚果糖(IOS),低聚果糖是一种水溶性膳食纤维,应用广泛。为了实现内切菊粉酶的高效表达,通过无花果曲霉中的inu2基因,成功在大肠杆菌中重组表达。为提高表达水平,通过使用pel B和omp C代替本身的信号... 内切菊粉酶可以有效地水解菊粉得到低聚果糖(IOS),低聚果糖是一种水溶性膳食纤维,应用广泛。为了实现内切菊粉酶的高效表达,通过无花果曲霉中的inu2基因,成功在大肠杆菌中重组表达。为提高表达水平,通过使用pel B和omp C代替本身的信号肽序列,来研究不同的信号肽对菊粉内切酶表达的影响。此外,还通过正交试验的方法优化了IOS的催化条件。研究结果表明,用pel B代替本身的信号肽的E.coli INU2-A3的酶活最高,达到75.22 U/mg。在菊粉为150 g/L,纯化的菊粉内切酶为5 U/g菊粉,55℃,p H 4.6,反应24 h时,低聚果糖的收率达到了94.41%,主要的水解产物为DP3-DP7。 展开更多

关键词 内切菊粉酶 信号肽 大肠杆菌 低聚果糖

下载PDF 职称材料