胚胎大鼠神经干细胞的培养及鉴定 被引量：10

1

作者 张清勇 杨波 +5 位作者 赵新利 宋来君 李红伟 冯祖荫 王树凯 何炜 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第1期5-7,共3页

目的:探索胚胎大鼠神经干细胞培养、传代及鉴定方法。方法:从胚胎大鼠脑室下区(SVZ)组织分离得到神经干细胞,采用无血清培养技术进行培养,并诱导分化,采用SABC法对分化后的细胞进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸蛋白(GFAP)检... 目的:探索胚胎大鼠神经干细胞培养、传代及鉴定方法。方法:从胚胎大鼠脑室下区(SVZ)组织分离得到神经干细胞,采用无血清培养技术进行培养,并诱导分化,采用SABC法对分化后的细胞进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸蛋白(GFAP)检测及姬姆萨染色进行细胞鉴定。结果:成功培养出了胚胎大鼠神经干细胞,培养出的细胞具有自我更新能力和增殖能力,可分化为神经元、神经胶质细胞及少突胶质细胞。结论:胚胎大鼠神经干细胞在体外适宜的培养条件下具有自我更新、增殖和多向分化潜能。 展开更多

关键词 神经干细胞 细胞培养 碱性成纤维细胞生长因子 无血清培养技术

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BDNF和NT-3对胚胎大鼠脊髓神经元生长发育的影响 被引量：7

2

作者 刘丽敏 黄海霞 高建新 《首都医科大学学报》 CAS 2002年第3期202-205,共4页

为研究脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经营养因子 3(NT 3)对体外培养的胚胎大鼠脊髓神经元存活和生长发育的影响 ,在倒置相差显微镜下观察原代培养的神经细胞存活和生长发育情况 ,计数并进行显微测量。实验数据均以均数±标准差表... 为研究脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经营养因子 3(NT 3)对体外培养的胚胎大鼠脊髓神经元存活和生长发育的影响 ,在倒置相差显微镜下观察原代培养的神经细胞存活和生长发育情况 ,计数并进行显微测量。实验数据均以均数±标准差表示 ,进行方差分析和SNK检验。结果 :BDNF和NT 3均能促进培养的胚胎大鼠脊髓神经元的存活 ,BDNF的作用更显著。两者还促进脊髓神经元的生长发育 ,BDNF主要促进胞体的发育 ,NT 3主要促进突起的生长。提示 :BDNF和NT 3对培养的胚胎大鼠脊髓神经元的存活和生长发育有促进作用 。 展开更多

关键词 脑源性神经营养因子 神经营养因子-3 脊髓 神经元 胚胎大鼠

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BDNF和NT-3对体外培养胎鼠脊髓神经元生长发育的影响 被引量：6

3

作者 黄海霞 高建新 +1 位作者 刘克敬 周玉琴 《山东大学学报（医学版）》 CAS 2002年第6期492-494,共3页

目的:观察脑源性神经生长因子(BDNF)和神经营养因子-3(NT-3)单独及联合应用对体外培养胚胎大鼠脊髓神经元存活和生长发育的影响。方法:胚胎大鼠脊髓神经细胞原代培养,倒置相差显微镜下进行细胞记数和显微测量,观察神经元存活和生长分化... 目的:观察脑源性神经生长因子(BDNF)和神经营养因子-3(NT-3)单独及联合应用对体外培养胚胎大鼠脊髓神经元存活和生长发育的影响。方法:胚胎大鼠脊髓神经细胞原代培养,倒置相差显微镜下进行细胞记数和显微测量,观察神经元存活和生长分化的状况。结果:BDNF和NT-3均能促进培养胚胎大鼠脊髓神经元的存活,BDNF的作用效果更好。BDNF主要促进胞体发育;NT-3主要促进突出分化和伸长,二者有互补作用。结论:BDNF和NT-3能促进体外培养大鼠发育期脊髓神经元存活、分化和生长,其作用具有选择性。 展开更多

关键词 BDNF NT-3 体外培养 胎鼠 脊髓 神经元 生长发育 神经营养因子-3 脑源性神经生长因子

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胚胎大鼠神经干细胞的分离培养及鉴定研究 被引量：8

4

作者 孔令胜 张军臣 +3 位作者 张冉 赵万巨 邵彤 杨全祥 《济宁医学院学报》 2009年第2期96-99,共4页

目的建立胎鼠神经干细胞体外培养方法并鉴定神经干细胞,观察神经干细胞生长特点。方法采用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的无血清培养基对大鼠胚胎间脑组织细胞悬液进行培养。通过检测神经干细胞的特异性抗原、神经干细胞的... 目的建立胎鼠神经干细胞体外培养方法并鉴定神经干细胞,观察神经干细胞生长特点。方法采用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的无血清培养基对大鼠胚胎间脑组织细胞悬液进行培养。通过检测神经干细胞的特异性抗原、神经干细胞的自我增殖能力和分化能力来鉴定神经干细胞。结果分离培养出了大量具有不断增殖的能力、表达神经巢蛋白的神经干细胞,并能经过诱导分化为神经元和神经胶质细胞,并能稳定传代20代以上。结论无血清培养基分离培养的胎鼠脑组织神经干细胞具有自我更新和增殖能力,巢蛋白细胞免疫荧光鉴定为神经干细胞,成功建立了大鼠神经干细胞的分离培养方法。 展开更多

关键词 神经干细胞 细胞培养 免疫荧光 胎鼠

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新生鼠和胎鼠海马神经干细胞分离和培养方法的比较 被引量：5

5

作者 白连琴 刘娜 +4 位作者 李腾腾 张林 庄亚飞 袁宝强 董红燕 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期481-486,共6页

目的：探索大鼠海马神经于细胞离体培养的实验条件和方法，并建立一种简便且获得率较高的实验方法。方法：分别随机选取新生1—3dsD大鼠和孕18—19dSD胎鼠，并提取海马组织，采用机械吹打结合胰蛋白酶消化的方法获得单细胞悬液，然后对... 目的：探索大鼠海马神经于细胞离体培养的实验条件和方法，并建立一种简便且获得率较高的实验方法。方法：分别随机选取新生1—3dsD大鼠和孕18—19dSD胎鼠，并提取海马组织，采用机械吹打结合胰蛋白酶消化的方法获得单细胞悬液，然后对培养出的细胞进行鉴定和诱导分化，最后测定并分别比较两组原代细胞获得率和增殖率以及凋亡率之间的差异。结果：来源于两种不同发育阶段大鼠的海马组织培养出的细胞均呈Nestin阳性和BrdU阳性的神经球样结构，诱导分化后的细胞高表达βⅢ-tublin和GFAP。其中，胎鼠组原代细胞获得率较高、增殖能力较强，并有统计学差异（P〈0．05）；但两组神经干细胞的凋亡率无明显差异（P〉0．05）。结论：胎鼠和新生鼠海马组织均能培养出神经干细胞，而且胎鼠组细胞产出率更高。 展开更多

关键词 海马 神经干细胞 细胞培养 分化 细胞增殖 细胞凋亡 新生鼠 胎鼠

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胎鼠神经干细胞分离培养和鉴定 被引量：5

6

作者 田志红 黄国伟 +4 位作者 姬长珍 张绪梅 王广雷 张文治 苏心 《天津医科大学学报》 2007年第4期476-478,共3页

目的:建立胎鼠神经干细胞体外培养方法,观察神经干细胞生长特点。方法:采用含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的无血清培养基对大鼠胚胎大脑组织细胞悬液进行培养,细胞免疫荧光方法对神经干细胞鉴定,MTT法测定不同细... 目的:建立胎鼠神经干细胞体外培养方法,观察神经干细胞生长特点。方法:采用含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的无血清培养基对大鼠胚胎大脑组织细胞悬液进行培养,细胞免疫荧光方法对神经干细胞鉴定,MTT法测定不同细胞密度的OD值,绘制生长曲线。结果:从胎鼠脑组织分离培养的细胞巢蛋白阳性。MTT结果显示细胞接种密度以2(×104～105)/ml生长良好(r=0.95,P<0.05)。结论:无血清培养基分离培养的胎鼠脑组织神经干细胞具有自我更新和增殖能力,巢蛋白细胞免疫鉴定为神经干细胞。 展开更多

关键词 神经干细胞 细胞培养 免疫荧光 胎鼠

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胚胎大鼠神经干细胞的分离培养和鉴定及标记 被引量：4

7

作者 付勇 龚树生 +2 位作者 薛秋红 刘英鹏 鄢开胜 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期172-175,共4页

目的:探索胚胎大鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记的方法。方法:分离胚胎大鼠海马组织,用无血清培养技术培养神经干细胞,免疫组织化学荧光技术检测其巢蛋白(Nestin)的表达;5-溴脱氧尿嘧啶(BrDU)掺入试验,并用免疫荧光双标技术观测神... 目的:探索胚胎大鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记的方法。方法:分离胚胎大鼠海马组织,用无血清培养技术培养神经干细胞,免疫组织化学荧光技术检测其巢蛋白(Nestin)的表达;5-溴脱氧尿嘧啶(BrDU)掺入试验,并用免疫荧光双标技术观测神经干细胞的增殖状况。采用荧光染料Hoechest33342标记神经干细胞并诱导其分化,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学荧光染色鉴定分化细胞。结果:①获得大量未分化呈巢状悬浮生长的神经干细胞团,并能分化为神经元和神经胶质细胞,且经传代培养8代后仍具干细胞特性;②荧光染料的标记率可达97%,细胞传8代后荧光亮度无明显衰减,并且分化后的细胞核中仍有荧光表达。结论:成功培养出胚胎大鼠神经干细胞,培养出的细胞具有增殖、自我更新及核多潜能分化能力,可分化为神经元及神经胶质细胞;荧光染料的标记可获得较高的标记率,可作为神经干细胞移植实验研究的供体细胞。 展开更多

关键词 神经干细胞 细胞培养 胚胎大鼠

原文传递

宫内缺氧对胚胎大鼠神经干细胞增殖的影响 被引量：5

8

作者 余鸿 刘敦玉 +2 位作者 杨小红 刘广益 郭勇 《四川解剖学杂志》 2004年第4期263-266,共4页

目的　探讨宫内缺氧对胚胎大鼠神经干细胞 (neuralstemcell,NSC)增殖的影响。方法　用低张性缺氧模型致胎龄 15天大鼠宫内缺氧 ,将胎鼠脑组织作神经巢蛋白 (Nestin)和Fos蛋白免疫组化染色 ,并进行图像分析。结果　缺氧组胎鼠Nestin和Fo... 目的　探讨宫内缺氧对胚胎大鼠神经干细胞 (neuralstemcell,NSC)增殖的影响。方法　用低张性缺氧模型致胎龄 15天大鼠宫内缺氧 ,将胎鼠脑组织作神经巢蛋白 (Nestin)和Fos蛋白免疫组化染色 ,并进行图像分析。结果　缺氧组胎鼠Nestin和Fos免疫组化反应较对照组增强 ,阳性细胞数增多 (P <0 0 5 )。结论　 (1)缺氧可刺激神经干细胞进入增殖状态 ,Fos蛋白的表达可能是引起神经干细胞增殖的机制之一 ;(2 )可采用低张性缺氧方法使孕鼠缺氧来制造胚胎大鼠宫内缺氧模型。 展开更多

关键词 宫内缺氧 胎鼠 神经干细胞 增殖

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SD胚鼠心脏成纤维细胞的原代培养及鉴定 被引量：4

9

作者 沈俊 袁平 +8 位作者 唐俊明 杨建业 李兴元 张蕾 赵继先 张焕鑫 薛仕珍 冯怡 王家宁 《中国循证心血管医学杂志》 2016年第12期1441-1444,共4页

目的建立适用于胚胎大鼠心脏成纤维细胞体外分离、培养及鉴定的技术方法。方法从SD孕19 d大鼠子宫中分离出胚胎鼠,再从胎鼠中分离出心脏,将心脏剪成肉糜状,用胰蛋白酶加上Ⅱ型、Ⅳ胶原酶联合消化法分离心脏成纤维细胞,再通过差速贴壁分... 目的建立适用于胚胎大鼠心脏成纤维细胞体外分离、培养及鉴定的技术方法。方法从SD孕19 d大鼠子宫中分离出胚胎鼠,再从胎鼠中分离出心脏,将心脏剪成肉糜状,用胰蛋白酶加上Ⅱ型、Ⅳ胶原酶联合消化法分离心脏成纤维细胞,再通过差速贴壁分离法分别收集、培养胚胎大鼠心脏成纤维细胞。在光学显微镜下观察心脏成纤维细胞形态特征的变化,用第2代心脏成纤维细胞用波形蛋白（vimentin）、结蛋白（desmin）、血管性血友病因子（vWF）、平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光鉴定。结果差速贴壁法分离的心脏成纤维细胞原代培养120 min已经完全贴壁,培养第3-5代细胞生长良好,24 h心脏成纤维细胞波形蛋白免疫荧光鉴定纯度高达97%,培养2-3 d时心脏成纤维细胞增殖活力最强。结论差速贴壁分离法结合免疫荧光鉴定可分离胚胎大鼠心脏成纤维细胞,此种方法可得到产量大,纯度高,活力好的心脏成纤维细胞,适用于细胞水平上的心血管疾病发病机制的研究。 展开更多

关键词 心脏成纤维细胞 原代培养 胚鼠 鉴定

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碱性成纤维细胞生长因子对胚胎大鼠神经干细胞增殖分化的影响 被引量：4

10

作者 崔景彬 陈正跃 +2 位作者 李开荣 任秀花 阎爱华 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期435-436,T002,共3页

目的　探讨分离、培养及鉴定胚胎大鼠神经干细胞 (NSCs)方法 ,观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NSCs增殖、分化的影响。方法　从大鼠胚胎脑组织中分离出NSCs,用bFGF和胎牛血清诱导其增殖和分化 ,予BrdU以标记分裂细胞 ,采用免疫细胞... 目的　探讨分离、培养及鉴定胚胎大鼠神经干细胞 (NSCs)方法 ,观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NSCs增殖、分化的影响。方法　从大鼠胚胎脑组织中分离出NSCs,用bFGF和胎牛血清诱导其增殖和分化 ,予BrdU以标记分裂细胞 ,采用免疫细胞化学鉴定NSCs和分化神经细胞。结果　大鼠胚胎脑NSCs在无细胞因子和胎牛血清的培养基中无新生细胞形成 ,但能在bFGF和血清诱导下形成克隆 ,并产生nestin和Br dU阳性细胞 ,贴壁后分化为神经元和星形胶质细胞。结论　该方法从大鼠胚胎大脑分离出的细胞具有NSCs特性 ,即自我更新和多向分化潜能 ; 展开更多

关键词 神经干细胞 细胞培养 碱性成纤维细胞生长因子 细胞分化 胚胎大鼠

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维甲酸和EGF对大鼠脑胚胎神经干细胞增殖和分化的影响 被引量：2

11

作者 崔景彬 鄢文海 +2 位作者 王建枝 李开荣 王俊萍 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2003年第1期81-85,共5页

目的　观察全反式维甲酸 (RA)和表皮生长因子 (EGF)对大鼠胚胎神经干细胞增殖和分化的影响。方法从大鼠胚胎脑中分离神经干细胞 ,经RA和EGF处理后 ,用台盼蓝确定细胞数量 ,BrdU标记分析细胞生长能力 ,采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞... 目的　观察全反式维甲酸 (RA)和表皮生长因子 (EGF)对大鼠胚胎神经干细胞增殖和分化的影响。方法从大鼠胚胎脑中分离神经干细胞 ,经RA和EGF处理后 ,用台盼蓝确定细胞数量 ,BrdU标记分析细胞生长能力 ,采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和分化的神经细胞。结果　 2 0ng/mlEGF和 1μmol/LRA处理的培养细胞均显示增殖效应 ,但EGF处理组增殖速度明显高于RA组 ,悬浮细胞中有大量nestin和BrdU阳性细胞。用EGF和EGF/RA诱导的神经元分化率分别为 17%和 3 1% ,而RA处理的神经元分化率显著升高至 89%。由EGF、EGF/RA和RA诱导的星形胶质细胞分化率分别为 83 %、 69%和 11%。结论　EGF主要促进神经干细胞增殖并主要诱导星形胶质细胞的生成 ,RA主要诱导神经干细胞向神经元分化 。 展开更多

关键词 维甲酸 神经干细胞 表皮生长因子 细胞分化 胚胎大鼠 细胞增殖

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谷氨酸对胚胎大鼠神经干细胞巢蛋白表达的影响 被引量：2

12

作者 蔡瑞艳 张丽娜 +1 位作者 史瑞峰 钟根深 《中华脑科疾病与康复杂志（电子版）》 2012年第1期60-64,69,共6页

目的探讨谷氨酸对体外培养的大鼠神经干细胞巢蛋白(Nestin)的影响。方法取怀孕10 d的SD大鼠胚胎海马组织,分离神经干细胞进行体外培养,置于含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、B27的无血清培养基进行培养。传代至... 目的探讨谷氨酸对体外培养的大鼠神经干细胞巢蛋白(Nestin)的影响。方法取怀孕10 d的SD大鼠胚胎海马组织,分离神经干细胞进行体外培养,置于含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、B27的无血清培养基进行培养。传代至第2代,用免疫荧光细胞化学法检测神经干细胞特异性标志物Nestin的表达;培养液中添加5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)3 h后检测其在神经干细胞中的表达;含血清不含神经生长因子的培养液中培养7 d后经神经胶质酸性蛋白(GFAP)免疫荧光细胞化学法检测细胞分化情况。细胞传至第3代细胞后,经细胞计数后分为6组,A组为对照组,在B、C、D、E、F组培养液中分别加入浓度为200、400、600、800及1 000μmol/L的谷氨酸。观察各组神经干细胞的增殖情况,应用聚合酶链式反应(PCR)技术检测各组中Nestin表达量的不同,应用统计学软件进行分析。结果 (1)细胞培养:胎鼠海马区分离培养的神经干细胞能很快增殖形成悬浮生长的圆形细胞球。经免疫荧光鉴定,细胞球Nestin抗体标记阳性。在培养液中加入BrdU后,BrdU能结合到细胞核中;诱导分化后,荧光鉴定GFAP标记阳性。(2)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR):Nestin mRNA在各组之间表达亦具有显著差异(P<0.05),其表达程度由高到低顺序与谷氨酸在各组中的浓度高低相一致:F组(2.21±0.42)、E组(1.99±0.37)、D组(1.58±0.26)、C组(1.36±0.41)、B组(1.05±0.34)、A对照组(0.83±0.21)。结论谷氨酸可以促进神经干细胞Nestin的表达,且在一定范围内表达量与谷氨酸浓度存在剂量依赖性。 展开更多

关键词 谷氨酸 神经干细胞 胚胎大鼠 巢蛋白

原文传递

银杏内酯对大鼠基底前脑神经元生长发育的影响 被引量：1

13

作者 黄海霞 高建新 +1 位作者 刘克敬 周玉琴 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期274-277,共4页

目的:观察银杏内酯对培养的胚胎大鼠基底前脑胆碱能神经元和NADPH-d阳性神经元生长发育的作用。方法:取E17Wistar大鼠胚胎基底前脑进行体外细胞培养,并给予银杏内酯。进行乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)和NADPH-d酶组织化学染... 目的:观察银杏内酯对培养的胚胎大鼠基底前脑胆碱能神经元和NADPH-d阳性神经元生长发育的作用。方法:取E17Wistar大鼠胚胎基底前脑进行体外细胞培养,并给予银杏内酯。进行乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)和NADPH-d酶组织化学染色,并在光镜下进行阳性细胞计数和显微测量胞体及突起发育状况。结果:给予银杏内酯处理后,培养物中乙酰胆碱酯酶阳性神经元和NADPH-d阳性神经元数量均较对照组显著增加,且神经元发育状况好于对照组,胞体大,突起多且长。结论:银杏内酯可以促进体外培养的基底前脑神经元中乙酰胆碱酯酶和NADPH-d的表达,并能促进表达这两种酶的神经元生长发育。 展开更多

关键词 银杏内酯 大鼠 基底前脑 神经元 细胞培养 乙酰胆碱酯酶

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高纯度大鼠胚胎背根神经节神经元的培养与鉴定 被引量：2

14

作者 韩创业 赵春节 +1 位作者 刘锦愉 杨劲松 《广西医科大学学报》 CAS 2014年第3期358-361,共4页

目的:建立一种取材容易、存活时间长、纯度高的原代大鼠胚胎背根神经节神经元(DRGn)的培养模型。方法:在解剖显微镜下取得胎鼠背根神经节(DRG),通过胰蛋白酶消化,使用Neurobasal(NB)培养基联合抗有丝分裂药物纯化等方法获得DRGn。采用... 目的:建立一种取材容易、存活时间长、纯度高的原代大鼠胚胎背根神经节神经元(DRGn)的培养模型。方法:在解剖显微镜下取得胎鼠背根神经节(DRG),通过胰蛋白酶消化,使用Neurobasal(NB)培养基联合抗有丝分裂药物纯化等方法获得DRGn。采用神经丝蛋白免疫细胞化学染色法和hoechst染核鉴定并测定DRGn的纯度。结果:原代培养的DRGn在含有神经生长因子(NGF)的NB培养基中生长良好,存活时间可达45d,纯度可达到95%以上。结论:该培养模型简单易行,培养稳定,可获得大量高纯度和存活时间长的DRGn。 展开更多

关键词 背根神经节神经元 原代培养 大鼠胚胎

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大鼠胚胎小脑提取液神经营养活性成分的分析 被引量：1

15

作者 吕捷 姚振宇 吕永利 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期185-191,共7页

本实验观察了不同胎龄大鼠的小脑提取液（ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｓ， ＣＥ）对体外培养小脑及脊髓神经细胞的影响。并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）法鉴定了各胎龄的ＣＥ 的蛋白成分差异。制备不同蛋白浓... 本实验观察了不同胎龄大鼠的小脑提取液（ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｓ， ＣＥ）对体外培养小脑及脊髓神经细胞的影响。并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）法鉴定了各胎龄的ＣＥ 的蛋白成分差异。制备不同蛋白浓度的１４、１６、１８、２０ ｄ 胎鼠（Ｅ１４，Ｅ１６，Ｅ１８，Ｅ２０）及新生１ ｄ 鼠（Ｐ１）的ＣＥ，加入原代培养的Ｅ１８ 胎鼠小脑及脊髓神经细胞悬液中，２４ ｈ 后以微量快速自动比色法检测细胞活性，发现实验各胎龄鼠的ＣＥ均能促进培养小脑及脊髓神经元的存活，并有蛋白浓度依赖关系，各胎龄都有各自不同的最适浓度，Ｅ１４、Ｅ１６ 和Ｅ１８ 的ＣＥ 显示了更强的神经营养活性，与对照组及其它实验组相比有极显著性差异（Ｐ＜ ０．００１）。以蛋白浓度为０．４ ｇ／Ｌ的Ｅ１８ 的ＣＥ培养新生３ ｄ 鼠（Ｐ３）脊髓细胞的结果表明，此ＣＥ可促进培养脊髓神经元的成熟和分化，抑制胶质细胞的增殖。电泳结果表明，Ｅ１６ 与Ｅ１８ 的ＣＥ中含有Ｐ１ 的ＣＥ中所没有的蛋白带，分子量分别约为２５．８ ｋＤ、４５．１ ｋＤ、８９．１ｋＤ 和１７９．５ ｋＤ，为寻找新的神经营养因子提供了线索。 展开更多

关键词 靶源性 神经营养因子 小脑提取液 胎鼠

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胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组图谱的构建及其差异分析

16

作者 刘玲 张世强 +4 位作者 杨天祝 贾宇峰 赵敏 张英泽 潘进社 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期554-558,610,共6页

目的初步建立并优化用于脊髓组织蛋白质组分析的双向电泳技术。应用双向电泳技术建立胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组图谱,并对两者的差异进行比较,从整体水平上探究成鼠脊髓丧失再生能力的蛋白质基础。方法以大鼠脊髓为研究对象,应用以固相pH... 目的初步建立并优化用于脊髓组织蛋白质组分析的双向电泳技术。应用双向电泳技术建立胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组图谱,并对两者的差异进行比较,从整体水平上探究成鼠脊髓丧失再生能力的蛋白质基础。方法以大鼠脊髓为研究对象,应用以固相pH梯度等电聚焦为第一向、均一水平十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向的双向电泳体系,对样品制备、电泳参数、染色等技术环节中影响双向电泳分辨率的关键因素进行一系列的优化。采用ImageMaster 2D Elite图像分析软件对获得的胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组2-DE图谱进行图像分析,比较两者在蛋白质组表达上的差异。结果在此优化的实验条件下,获得了质量较好的脊髓组织蛋白质组双向电泳图谱。胎鼠脊髓蛋白质组图谱经图像分析后,可检测到838个蛋白点,成鼠脊髓蛋白质组图谱可检测到847个蛋白点。对胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组匹配差示图谱的分析发现,两者间存在813个差示蛋白。结论通过对各种条件的优化,初步建立了脊髓组织2-DE技术。对胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组的比较发现,两者存在明显差异。胎鼠与成鼠脊髓蛋白质组差示图谱的建立,为进一步筛选、鉴定与脊髓再生能力丧失有关的蛋白,并探究其作用机制打下了基础。 展开更多

关键词 胎鼠 脊髓 蛋白质组 双向电泳 差示蛋白

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胚胎大鼠脑室下区神经细胞体外培养和向黑质细胞定向诱导的实验研究 被引量：1

17

作者 李劲涛 马以骝 +1 位作者 冯忠堂 王廷华 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期479-486,共8页

本研究目的在于探寻体外培养和定向诱导胚胎大鼠脑室下区(SVZ)神经细胞向黑质细胞分化的新方法.采用成年大鼠黑质匀浆上清液(HSN)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及HSN+ bFGF对取自胎龄期12～16 d(E12～E16)胚胎大鼠SVZ培养的神经细胞(... 本研究目的在于探寻体外培养和定向诱导胚胎大鼠脑室下区(SVZ)神经细胞向黑质细胞分化的新方法.采用成年大鼠黑质匀浆上清液(HSN)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及HSN+ bFGF对取自胎龄期12～16 d(E12～E16)胚胎大鼠SVZ培养的神经细胞(经nestin抗体免疫组化及透射电镜识别)进行体外诱导培养48 h后,以TH单抗免疫组化方法检测其是否向黑质细胞分化;并用荧光分光光度法测定HSN+bFGF诱导后0、24、48 h SVZ神经细胞培养液中多巴胺含量.结果显示:(1)HSN+bFGF诱导组,TH单抗免疫组化出现阳性细胞;(2)HSN+bFGF诱导后0、24、48 h多巴胺含量对比分析:48 h与24 h(P<0.01)、48 h与0 h(P<0.05)相比,多巴胺含量明显增加,而24 h与0 h相比则无增加趋势(P>0.05).以上结果表明:(1)用成年大鼠HSN+ bFGF能定向诱导胚胎大鼠SVZ神经细胞向黑质细胞分化,诱导而成的黑质细胞已具有多巴胺分泌功能,诱导后24～48 h为多巴胺分泌的一个高峰;(2)透射电镜显示胚胎大鼠SVZ神经细胞超微结构是除免疫组化外识别该神经细胞的另一种新方法. 展开更多

关键词 体外定向诱导 碱性成纤维细胞生长因子 黑质匀浆液 脑室下区 胚胎大鼠 神经细胞 定向诱导 体外培养 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 黑质

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BDNF ,NT-3对体外培养的胚鼠脊髓AChE和NADPH-d阳性神经元生长发育的影响 被引量：1

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作者 黄海霞 高建新 +2 位作者 刘克敬 周玉琴 彭海燕 《中国神经科学杂志》 CSCD 2002年第4期673-677,共5页

利用AChE和NADPH d酶组织化学染色法研究了脑源性神经营养因子 (brain derivedneurotrophicfac tor ,BDNF)和神经营养因子 3(neurotrophin 3,NT 3)对离体培养的胚胎大鼠脊髓胆碱能神经元和一氧化氮能神经元生长发育的影响。结果显示 :B... 利用AChE和NADPH d酶组织化学染色法研究了脑源性神经营养因子 (brain derivedneurotrophicfac tor ,BDNF)和神经营养因子 3(neurotrophin 3,NT 3)对离体培养的胚胎大鼠脊髓胆碱能神经元和一氧化氮能神经元生长发育的影响。结果显示 :BDNF处理组和NT 3处理组AChE阳性神经元数和NADPH d阳性神经元数均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。BDNF组AChE阳性神经元和NADPH d阳性神经元胞体平均直径、每细胞突起数和最长突起长度均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。NT 3组NADPH d阳性神经元的生长发育与对照组无明显差异 ,仅AChE阳性神经元的每细胞突起数和最长突起长度显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,对胞体发育无影响。结果提示 :BDNF ,NT 3促进脊髓神经元的存活和生长发育 ,二者的作用具有选择性和特异性。 展开更多

关键词 脑源性神经营养因子 BDNF 神经营养因子-3 NT-3 脊髓 神经细胞培养 ACHE NADPH-D 组织化学染色法 神经元生长发育

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坐骨神经外植块对脊神经节的感觉神经元高亲和力神经生长因子受体表达的影响 被引量：1

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作者 赵莉 秦建强 +2 位作者 尹方明 钟世镇 徐达传 《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 1998年第3期247-250,共4页

用细胞培养及trkA免疫组化染色方法，观察了坐骨神经外植块及巨噬细胞和雪旺氏细胞条件培养基对胚鼠脊神经节感觉神经元高亲和力神经生长因子受体表达的影响。结果显示：各组感觉神经元均产生免疫阳性反应，雪旺氏细胞条件培养基和巨噬... 用细胞培养及trkA免疫组化染色方法，观察了坐骨神经外植块及巨噬细胞和雪旺氏细胞条件培养基对胚鼠脊神经节感觉神经元高亲和力神经生长因子受体表达的影响。结果显示：各组感觉神经元均产生免疫阳性反应，雪旺氏细胞条件培养基和巨噬细胞条件培养组免疫反应强度与对照组相同，联合培养组免疫反应为强阳性，与巨噬细胞条件培养组相比差别高度显著（P＜0.005）。免疫反应阳性神经元可分为2类：一类形状为圆形或椭圆形，另一类为多角形。实验组神经元和非神经元生长状况明显优于对照组。本研究结果提示：坐骨神经的溃变轴突有促进脊神经节内感觉神经元trkA表达的作用;雪旺细胞条件培养和巨噬细胞条件培养组的某些因子可直接或间接地维持感觉神经元的生存，但不促进其trkA的表达。 展开更多

关键词 联合培养 HNGFR 免疫组织化学 脊神经节 胚鼠

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不同胎龄大鼠大脑神经干细胞的分布比较 被引量：1

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作者 吴雨岭 余鸿 +2 位作者 郭勇 程基焱 杨晓红 《四川解剖学杂志》 2005年第2期1-3,共3页

目的探讨正常状态下不同胎龄大鼠神经干细胞(neuralstemeells,NSCs)在大脑中的分布。方法将孕鼠随机分为胎龄11天组、15天组和19天组,用免疫组织化学方法检测其大脑神经干细胞中的巢蛋白(Nestin),经图像分析比较其差异。结果胎龄11天组N... 目的探讨正常状态下不同胎龄大鼠神经干细胞(neuralstemeells,NSCs)在大脑中的分布。方法将孕鼠随机分为胎龄11天组、15天组和19天组,用免疫组织化学方法检测其大脑神经干细胞中的巢蛋白(Nestin),经图像分析比较其差异。结果胎龄11天组Nestin阳性细胞分布于整个神经管上皮层,随着胎龄的增加,Nestin阳性细胞主要在室管膜上皮层,细胞数逐渐增加,并向周围迁移;结论大鼠在正常胚胎发育过程中,随着胎龄的增加,其脑室室管膜及室管膜下区神经干细胞逐渐增多。 展开更多

关键词 胎鼠 神经干细胞

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