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p21基因的saRNA表达质粒的构建及功能研究 被引量：2
1
作者 龚化 陈忠 +4 位作者 胡嘏 吴嘉 李龙承 杨为民 叶章群 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2011年第5期283-286,共4页
目的构建可表达具有RNA激活功能的小激活RNA(saRNA)质粒表达载体,并对其激活前列腺癌细胞PC-3中p21WAF1/CIP1(p21)基因表达的功能进行相关研究。方法人工合成与p21基因启动子特定序列相应的DNA片段及同样长度的随机DNA序列,利用DNA重组... 目的构建可表达具有RNA激活功能的小激活RNA(saRNA)质粒表达载体,并对其激活前列腺癌细胞PC-3中p21WAF1/CIP1(p21)基因表达的功能进行相关研究。方法人工合成与p21基因启动子特定序列相应的DNA片段及同样长度的随机DNA序列,利用DNA重组技术将这些片段构建到真核小分子双链RNA(dsRNA)表达质粒pGenesil-1中,构建成能表达dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNAp21-pGenesil-1)和随机对照dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNACon-pGenesil-1)。采用脂质体介导方法,分别将dsRNAp21-pGenesil-1(实验组)、dsRNACon-pGenesil-1(随机对照组)及空白质粒pGenesil-1(空白对照组)转染到体外培养的PC-3细胞,通过荧光染色检测转染效率,采用RT-PCR和免疫组化技术检测各组细胞p21蛋白表达的差异。结果成功构建目的表达载体dsRNAp21-pGenesil-1及随机对照载体dsRNACon-pGenesil-1,将各组质粒转染到PC-3细胞后,实验组p21基因表达明显增强,而随机对照组和空白对照组无明显变化。结论本研究构建的dsRNA表达质粒载体能成功表达saRNA分子,并激活p21基因及蛋白的表达,为研究的激活效应提供有效工具。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 RNA激活 dsrna表达质粒
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番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白基因dsRNA载体的构建及其表达 被引量：2
2
作者 唐前君 肖启明 +4 位作者 刘勇 李基光 谢丙炎 谭新球 张德咏 《湖南农业科学》 2010年第7期99-101,共3页
将中国番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)外壳蛋白基因(coat protein,CP)同源的部分片段双链RNA重组至植物表达载体pBIN19,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株LBA4404导入本氏烟(Nicotianaben... 将中国番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)外壳蛋白基因(coat protein,CP)同源的部分片段双链RNA重组至植物表达载体pBIN19,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株LBA4404导入本氏烟(Nicotianabenthamiana)。PCR筛选表明,目的片段已整合至转基因植株的基因组DNA中,引起与其同源的基因发生沉默,从而可抑制病毒复制,达到抗该病毒的目的,为防治这类病毒病害提供了新的可能。 展开更多
关键词 中国番茄黄花曲叶病毒 dsrna 植物表达载体
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番木瓜环斑病毒CP基因dsRNA原核表达载体的快速构建 被引量：2
3
作者 陈瑶 沈文涛 +2 位作者 言普 黎小瑛 周鹏 《热带生物学报》 2011年第2期113-116,共4页
重点介绍了一种快速构建dsRNA原核表达载体的方法。以番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)3'端-279 bp保守区段为基础,通过OZ-LIC法构建861 bp,432 bp和279 bp 3种不同长度的发卡结构,再通过XhoⅠ和ClaⅠ双酶切,将其连接到pSP73原... 重点介绍了一种快速构建dsRNA原核表达载体的方法。以番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)3'端-279 bp保守区段为基础,通过OZ-LIC法构建861 bp,432 bp和279 bp 3种不同长度的发卡结构,再通过XhoⅠ和ClaⅠ双酶切,将其连接到pSP73原核表达载体上,构建成PRSV-CP基因dsRNA原核表达载体。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因 dsrna RNA沉默 OZ-LIC法 原核表达载体
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大白菜开花基因LFY的克隆及dsRNA抑制载体的构建 被引量：5
4
作者 夏广清 何启伟 +1 位作者 赵双宜 王翠花 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期615-619,共5页
以中国大白菜花蕾为材料,通过RT-PCR方法,参照GeneBank公布的序列克隆了Leafy(简称LFY)基 因片段,测序分析结果表明,该基因与国外已经报道的序列具有94％的同源性。将此序列以相反方向插入到 植物表达载体pROK2 35S启动子之间,并在2反... 以中国大白菜花蕾为材料,通过RT-PCR方法,参照GeneBank公布的序列克隆了Leafy(简称LFY)基 因片段,测序分析结果表明,该基因与国外已经报道的序列具有94％的同源性。将此序列以相反方向插入到 植物表达载体pROK2 35S启动子之间,并在2反向重复片段之间插入小麦乙酰辅酶A羧化酶的第20内含子, 从而构建了dsRNA抑制双元载体,该载体的构建为通过农杆菌介导转化大白菜进而解决早春和反季栽培大 白莱的先期抽薹问题创造了条件。 展开更多
关键词 大白菜 开花基因 先期抽薹 反季栽培 农杆菌介导转化 早春 小麦 RNA 抑制 克隆
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