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芳香化酶抑制剂筛选模型的研究进展 被引量:2
1
作者 周雯迪 苏梦翔 狄斌 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第22期1961-1965,共5页
芳香化酶是生物体催化雄性激素转变为雌性激素的限速酶,以其为靶点筛选芳香化酶抑制剂,在雌激素受体阳性乳腺癌患者的治疗中具有重要地位。本文综述了芳香化酶抑制剂筛选模型的研究进展,讨论后发现,现有的各筛选模型优劣共存,通过深入研... 芳香化酶是生物体催化雄性激素转变为雌性激素的限速酶,以其为靶点筛选芳香化酶抑制剂,在雌激素受体阳性乳腺癌患者的治疗中具有重要地位。本文综述了芳香化酶抑制剂筛选模型的研究进展,讨论后发现,现有的各筛选模型优劣共存,通过深入研究,可建立新型的高通量筛选模型,发展前景广阔。 展开更多
关键词 芳香化酶 芳香化酶抑制剂 药物筛选模型 乳腺癌 研究进展
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PDGFR-β抑制剂细胞筛选模型的构建及应用
2
作者 付水 山松 +5 位作者 刘孝荣 李志斌 吕建新 鲁先平 宁志强 王小宁 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期688-691,共4页
目的建立针对以血小板衍生生长因子受体-β(plate-let-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)为靶标的特异及灵敏的细胞模型体系,用于酪氨酸激酶受体(receptor tyro-sine kinase,RTK)抑制剂的筛选和研究。方法构建人的PDGFR-β... 目的建立针对以血小板衍生生长因子受体-β(plate-let-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)为靶标的特异及灵敏的细胞模型体系,用于酪氨酸激酶受体(receptor tyro-sine kinase,RTK)抑制剂的筛选和研究。方法构建人的PDGFR-β真核表达载体pcDNA3.1-PDGFR-β,将其转染至NIH 3T3细胞,获得稳定转染的细胞克隆,并对其进行功能学鉴定及应用;应用瞬时转染PDGFR-β的HeLa细胞,建立PDGF依赖性的受体磷酸化细胞模型。结果在无血清培养条件下,稳定转染人PDGFR-β的NIH 3T3细胞获得了PDGF依赖性的细胞增殖特征;HeLa细胞经瞬时转染PDG-FR-β后,可以检测出明显的PDGF依赖性的受体酪氨酸磷酸化。通过应用已知PDGFR-β抑制剂及自行合成化合物,确证了以上细胞模型具有机制针对性特征。结论所构建并确证的细胞模型具有特异性和灵敏性,适用于较高通量的PDGFR-β和其它RTK抑制化合物的体外筛选与研究。 展开更多
关键词 酪氨酸激酶受体 血小板衍生生长因子 血小板衍生生长因子受体 NIH 3T3细胞 HeLa细胞 药物筛选模型 酪氨酸激酶受体抑制剂
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抗癌药物筛选模型与筛选方法的研究 被引量:10
3
作者 王兴旺 胥彬 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期39-43,共5页
主要介绍用于抗癌药物筛选的人癌裸鼠移植模型和人癌小鼠肾包膜下移植模型;对细胞毒活性的4种体外检测方法进行了比较;还对分化诱导剂、拓扑异构酶抑制剂、抗微管药和生物反应调节剂的筛选方法进行了评述。
关键词 抗癌药物 筛选模型 筛选方法
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基于报告基因的雌激素受体α亚型配体筛选模型的建立和应用 被引量:17
4
作者 孙哲 吕秋军 +3 位作者 温利青 郭绍明 陈媛媛 刘卫京 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期747-751,共5页
目的 建立基于报告基因的雌激素受体α亚型配体的筛选模型 ,用此模型对收集到的化合物进行筛选 ,以发现具有新结构的雌激素受体配体。方法 构建诱导性表达载体并转染入ERα +HepG2细胞中 ,筛选报告基因CAT表达受雌二醇诱导的阳性克隆... 目的 建立基于报告基因的雌激素受体α亚型配体的筛选模型 ,用此模型对收集到的化合物进行筛选 ,以发现具有新结构的雌激素受体配体。方法 构建诱导性表达载体并转染入ERα +HepG2细胞中 ,筛选报告基因CAT表达受雌二醇诱导的阳性克隆。采用ELISA法检测化合物对CAT表达的影响 ,体外细胞存活实验对化合物进行功能性检测。结果 ERα +HepG2细胞中CAT的表达受雌二醇的诱导并呈现剂量依赖关系。化合物三羟基二苯乙烯诱导CAT表达的最大活性为雌二醇的 1 75倍。结论 利用此模型通过测定CAT基因的诱导表达水平可筛选得到新结构的雌激素受体配体。 展开更多
关键词 雌激素应答序列 报告基因 药物筛选模型
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高通量筛选技术在药物发现中的应用进展 被引量:2
5
作者 方莲花 王月华 杜冠华 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期289-295,共7页
药物筛选是新药研发的重要手段和基础环节,高通量筛选(high throughput screening,HTS)是一种为寻找新药先导物而对大量样品进行药理活性评价分析的技术手段。HTS技术体系综合应用药理学技术、分子生物学技术、细胞生物学技术、计算机... 药物筛选是新药研发的重要手段和基础环节,高通量筛选(high throughput screening,HTS)是一种为寻找新药先导物而对大量样品进行药理活性评价分析的技术手段。HTS技术体系综合应用药理学技术、分子生物学技术、细胞生物学技术、计算机技术、管理技术以及自动化控制技术等多种技术,实现了药物筛选的快速、高效、微量化、自动化和规模化。经过几十年的实践和发展,HTS已成为新药研究和开发的重要技术方法,在新药研发中发挥了重要作用。本文将对HTS技术在药物研发中的应用进展进行综述,为新药发现和研究提供参考。 展开更多
关键词 药物筛选 高通量筛选 药物发现 药物靶点 筛选模型 先导化合物
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人高密度脂蛋白受体表达上调剂筛选模型的建立 被引量:6
6
作者 刘晓辉 洪斌 +3 位作者 王丽非 杨媛 司书毅 李元 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期354-358,共5页
目的 建立靶向人高密度脂蛋白受体基因(CLA-1)调控序列的药物筛选模型,为筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂奠定基础。方法 PCR扩增CLA-1上游调控序列,构建重组报告基因质粒pGL3-CLAP,瞬时转染人肝癌细胞BEL-7402,通过检测荧光素酶报告... 目的 建立靶向人高密度脂蛋白受体基因(CLA-1)调控序列的药物筛选模型,为筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂奠定基础。方法 PCR扩增CLA-1上游调控序列,构建重组报告基因质粒pGL3-CLAP,瞬时转染人肝癌细胞BEL-7402,通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂。结果 建立了CLA-1表达上调剂筛选模型,pGL3-CLAP与阴性对照pGL3-Basic组间差异显著(P<0.001),变异系数(CV)不超过10%。对124个化合物和800个微生物次级代谢产物进行初筛和复筛,1个化合物和3个菌株发酵液为阳性。结论 该系统可有效地应用于人高密度脂蛋白受体表达上调剂的高通量筛选。 展开更多
关键词 高密度脂蛋白受体 药物筛选模型 报告基因
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α7烟碱型乙酰胆碱受体分子伴侣Tmem35a的克隆及其功能研究
7
作者 王紫涵 于津鹏 +2 位作者 长孙东亭 朱晓鹏 罗素兰 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1993-2001,共9页
烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)属于配体门控离子通道受体,其中α7nAChR亚型广泛分布于大脑皮层、丘脑和海马体等区域。此外,在小胶质细胞、巨噬细胞、骨髓细胞等也有分布,研究发现其与胆碱能抗炎通路... 烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)属于配体门控离子通道受体,其中α7nAChR亚型广泛分布于大脑皮层、丘脑和海马体等区域。此外,在小胶质细胞、巨噬细胞、骨髓细胞等也有分布,研究发现其与胆碱能抗炎通路的功能密切相关,是阿尔茨海默症和精神分裂症药物开发的重要靶标。建立稳定的体外药物筛选体系,对于靶向α7 nAChR新药的高效筛选至关重要。在非洲爪蟾卵母细胞膜上,重组表达nAChRs的不同亚型,并通过电生理技术进行电流检测,是一种先进而复杂的新药筛选模型。分子伴侣可以协助部分nAChRs亚基组装形成功能性受体,为靶向该受体的化合物筛选提供稳定表达的模型。为此,本研究从大鼠体内分离克隆了α7 nAChR的一个分子伴侣基因,其名称为Tmem35a(transmembrane protein 35A),进一步构建了该基因的重组表达载体,再利用体外转录技术获得了该基因的cRNA,将之与α7 nAChR的cRNA混合后同时注射到非洲爪蟾卵母细胞中进行表达。然后,利用双电极电压钳检测该分子伴侣对α7 nAChR电流表达和通道药理活性的影响。结果显示,TMEM35A(也被称为novel acetylcholine receptor chaperone,NACHO)可有效提高α7 nAChR蛋白在卵母细胞膜上的表达,受体蛋白表达量提高了约1倍;其配体乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)刺激诱发的峰值电流提高了约10倍。注入Tmem35a cRNA后的卵母细胞,其表达的α7 nAChR对激动剂ACh的半数效应浓度为228.5μmol·L^(-1),和本体223.3μmol·L^(-1)基本一致,维持了α7受体正常功能特性。研究结果表明,分子伴侣NACHO有效协助了α7 nAChR在非洲爪蟾卵母细胞的异源表达,稳定表达的α7 nAChR可以为靶向该受体的先导化合物活性筛选提供模型。本研究所有动物实验过程经广西大学伦理委员会审查批准(批准号:GXU-2023-0249)。 展开更多
关键词 Α7烟碱型乙酰胆碱受体 分子伴侣NACHO 基因克隆 双电极电压钳 药物筛选模型
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基于STAT3转录调节的筛药模型的建立 被引量:5
8
作者 刘卫京 吕秋军 +2 位作者 温利青 郭绍明 陈媛媛 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期103-106,共4页
目的 依据造血生长因子信号转导途径中重要转录因子STAT3的转录调节作用建立基于报告基因的靶向STAT3转录调节的筛药模型 ,用此模型筛选具有G CSF样活性的化合物。方法 构建诱导性表达载体 pTKS3 CAT并转染入表达G CSF受体的NFS 6 0... 目的 依据造血生长因子信号转导途径中重要转录因子STAT3的转录调节作用建立基于报告基因的靶向STAT3转录调节的筛药模型 ,用此模型筛选具有G CSF样活性的化合物。方法 构建诱导性表达载体 pTKS3 CAT并转染入表达G CSF受体的NFS 6 0不依赖细胞 ,筛选报告基因CAT表达受rhG CSF诱导的阳性克隆 ,采用ELISA法检测化合物对CAT表达活性的影响。同时 ,对模型的特异性和灵敏性进行检测。结果 在转染有重组质粒的NFS 6 0不依赖细胞中 ,CAT表达受rhG CSF诱导并呈剂量依赖关系 ,EC50 等于 0 0 44nmol·L-1,而rhEPO不能诱导CAT表达。结论 以上模型的CAT基因表达活性能够被其特异性配体强诱导表达 ,利用此模型在 96孔板上用ELISA法测定CAT基因的诱导表达水平可筛选具有G CSF样活性的化合物。 展开更多
关键词 STAT3 G-CSF 药物筛选模型 报告基因
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基于tyrp1a转基因斑马鱼构建色素障碍性疾病药物筛选模型 被引量:5
9
作者 刘力 裴思然 +3 位作者 吴华丽 赵庆顺 彭继先 尚靖 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期740-743,共4页
为了能够有效地筛选治疗色素障碍性疾病药物,建立一种转基因斑马鱼药物筛选模型。采用斑马鱼酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1a,tyrp1a)基因启动子驱动绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),构建出tyrp1a转基因... 为了能够有效地筛选治疗色素障碍性疾病药物,建立一种转基因斑马鱼药物筛选模型。采用斑马鱼酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1a,tyrp1a)基因启动子驱动绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),构建出tyrp1a转基因斑马鱼,使绿色荧光能够特异性表达在斑马鱼黑素细胞部位。分别给予斑马鱼促进黑素合成的药物N-苯基硫脲(Nphenylthiourea,PTU)和抑制黑素合成的药物黑素细胞刺激素(alpha-melnaocyte stimulating hormone,α-MSH),检测药物对斑马鱼黑素合成和绿色荧光蛋白表达影响。结果显示,PTU可以抑制斑马鱼黑素细胞黑素合成作用,并且降低转基因斑马鱼绿色荧光蛋白表达。α-MSH可以促进斑马鱼黑素细胞黑素合成作用,并促进转基因斑马鱼绿色荧光蛋白表达。本研究成功地建立了一种新的可以用于色素性障碍疾病药物筛选的转基因斑马鱼模型。 展开更多
关键词 斑马鱼 tyrp1a 色素障碍性疾病 药物筛选模型
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耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立及应用 被引量:4
10
作者 黄晓会 徐阿晶 +3 位作者 俞静 陈其琪 费爱华 卜书红 《药学服务与研究》 CAS 2020年第2期107-110,共4页
目的:通过建立耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)模型,筛选对耐药鲍曼不动杆菌敏感的抗菌药物。方法:从临床患者标本中分离到的耐药鲍曼不动杆菌用于感染秀丽隐杆线虫后,加入哌拉西林钠、头孢噻肟钠、氨苄西林... 目的:通过建立耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)模型,筛选对耐药鲍曼不动杆菌敏感的抗菌药物。方法:从临床患者标本中分离到的耐药鲍曼不动杆菌用于感染秀丽隐杆线虫后,加入哌拉西林钠、头孢噻肟钠、氨苄西林钠舒巴坦钠、亚胺培南、头孢曲松钠、头孢吡肟、美罗培南、头孢他啶、头孢哌酮钠、阿米卡星、左氧氟沙星、环丙沙星、米诺环素、两性霉素B 14种抗菌药物治疗,观察并记录秀丽隐杆线虫的存活情况,绘制感染耐药鲍曼不动杆菌后秀丽隐杆线虫的生存曲线。结果:美罗培南、亚胺培南、氨苄西林钠舒巴坦钠及米诺环素对耐药鲍曼不动杆菌感染的秀丽隐杆线虫有明显的治疗效果。结论:利用耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型,可以为临床选择抗菌药物治疗耐药鲍曼不动杆菌感染提供参考。 展开更多
关键词 秀丽隐杆线虫 鲍曼不动杆菌 药物筛选模型 抗菌药物
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Screening of natural compounds with neuronal differentiation promoting effects in a cell-based model 被引量:1
11
作者 CHEN Tao WANG Juan +2 位作者 LIU Mei ZHANG Lu-Yong LIAO Hong 《Chinese Journal of Natural Medicines》 SCIE CAS CSCD 2015年第8期602-608,共7页
The purpose of this study was to establish a drug screening method for small molecules extracted from traditional Chinese medicines(TCM) that have neuronal differentiation promoting effects, using P19 embryonic carcin... The purpose of this study was to establish a drug screening method for small molecules extracted from traditional Chinese medicines(TCM) that have neuronal differentiation promoting effects, using P19 embryonic carcinoma cell as a cell-based model. First, the constructed plasmid(p Tα1-Luc) was transfected into P19 cells to establish a screening model. Second, several TCMs were screened using the established model and all-trans-retinoic acid as a positive control. Finally, the underlying molecular mechanism was explored using immunofluorescence staining, q T-PCR, and Western blot analysis. Our results indicated that the drug screen model was established successfully and that both honokiol and hyperoside induced P19 differentiation into neurons, with the possible molecular mechanism being modulating the Wnt signaling pathway. In conclusion, the drug screening model developed in the present study provides a rapid, cell-based screening platform for identifying natural compounds with neuronal differentiation effects. 展开更多
关键词 drug screening model NEURONAL differentiation P19 EMBRYONIC carcinoma cells Wnt signaling pathway Traditional Chinese Medicine
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α3β4乙酰胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞上的表达 被引量:2
12
作者 李宝珠 陈心 +5 位作者 朱晓鹏 胡远艳 于海鹏 邴晖 长孙东亭 罗素兰 《药物生物技术》 CAS CSCD 2011年第6期471-474,共4页
建立以哺乳动物α3β4乙酰胆碱受体(nAChR)为分子靶标的药物筛选模型。将大鼠乙酰胆碱受体的α3与β4亚基基因分别进行体外转录,获得α3与β4亚基基因的cRNA,按1∶1的比例将适量α3与β4的cRNA混合后,显微注射到新鲜分离的非洲爪蟾卵母... 建立以哺乳动物α3β4乙酰胆碱受体(nAChR)为分子靶标的药物筛选模型。将大鼠乙酰胆碱受体的α3与β4亚基基因分别进行体外转录,获得α3与β4亚基基因的cRNA,按1∶1的比例将适量α3与β4的cRNA混合后,显微注射到新鲜分离的非洲爪蟾卵母细胞中,在ND96溶液中、17℃下培养24 h后,通过双电极电压钳技术(TEVC)检测受体α3β4 nAChR的乙酰胆碱(Ach)门控电流。同时注入α3、β4 cRNA的非洲爪蟾卵母细胞孵育24h后,可记录到明显的Ach门控内向电流,未注射或只注射ddH2O的对照组细胞则没有任何电流产生。α3β4乙酰胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞膜上成功表达,以此为药物作用靶点,可用于大量生物毒素等物质的活性筛选实验模型。 展开更多
关键词 α3β4乙酰胆碱受体 双电极电压钳 非洲爪蟾卵母细胞 药物筛选模型
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基于抗氧化反应元件的药物筛选模型的建立 被引量:2
13
作者 谢玲 黄海潇 +5 位作者 张浩 熊国林 邢爽 华平 从玉文 罗庆良 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1525-1528,共4页
目的建立基于抗氧化反应元件(antioxident responseelement,ARE)和SEAP报告基因的细胞筛选模型,用此模型对金雀异黄素、芹菜苷配基、儿茶素、茨非醇4种化合物进行活性比较,观察上述化合物拮抗过氧化氢损伤的作用,寻找具有强抗氧化活性... 目的建立基于抗氧化反应元件(antioxident responseelement,ARE)和SEAP报告基因的细胞筛选模型,用此模型对金雀异黄素、芹菜苷配基、儿茶素、茨非醇4种化合物进行活性比较,观察上述化合物拮抗过氧化氢损伤的作用,寻找具有强抗氧化活性作用的黄酮类化合物。方法构建重组报告基因表达载体pARE-TAL-SEAP与对照载体分别转染HEK-293细胞,检测上述黄酮类化合物作用后对SEAP的活性和抗氧化作用的影响。结果在加入25μmol.L-1H2O2进行氧化损伤的HEK-293细胞中,加入100μmol.L-1的4种化合物进行比较时金雀异黄素的抗氧化作用最强,金雀异黄素诱导SEAP的最大表达水平较对照孔升高1.3倍;加入25μmol.L-14种化合物的抗氧化作用时茨非醇的抗氧化作用最强,茨非醇诱导SEAP的最大表达水平较对照孔升高1.5倍。结论利用此模型可以检测H2O2的氧化应激反应并可筛选到抗氧化活性强的黄酮类化合物。 展开更多
关键词 抗氧化反应元件 报告基因 药物筛选模型 黄酮类化合物
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秀丽隐杆线虫作为Ras/MAPK信号通路的抗肿瘤药物筛选模型研究 被引量:2
14
作者 刘东玲 支德娟 +2 位作者 白彦丽 周婷 李红玉 《甘肃中医药大学学报》 2018年第2期1-5,共5页
目的采用秀丽隐杆线虫Ras/有丝分裂原蛋白活化酶(MAPK)信号通路上的过度激活系列突变体研究该模式生物作为Ras/MAPK信号通路的抗肿瘤药物筛选模型的可行性及其分子机制。方法采用96孔板将索拉菲尼和依托泊苷作用于L1期秀丽隐杆线虫(每孔... 目的采用秀丽隐杆线虫Ras/有丝分裂原蛋白活化酶(MAPK)信号通路上的过度激活系列突变体研究该模式生物作为Ras/MAPK信号通路的抗肿瘤药物筛选模型的可行性及其分子机制。方法采用96孔板将索拉菲尼和依托泊苷作用于L1期秀丽隐杆线虫(每孔80~100条),并设空白对照,每个处理设3个重复。培养秀丽隐杆线虫4~5 d后,于倒置生物显微镜下观察秀丽隐杆线虫野生型和突变体数目。与空白对照比较,野生型比例越高,说明药物效果越好。结果索拉菲尼能够剂量依赖性地逆转let-60/ras(gf)和mek/erk(gf)双突变体多阴门表型,对其下游转录因子lin-1(lf)和lin-31(gf)多阴门突变体几乎没有影响;依托泊苷对信号通路上游因子let-60/ras(gf)及下游转录因子突变体lin-31(gf)均有明显的抑制作用,不依赖细胞信号通路。结论秀丽隐杆线虫模型不但能够筛选靶向Ras/MAPK信号通路的抑制剂,还能评价肿瘤细胞毒药物。 展开更多
关键词 秀丽隐杆线虫 Ras/有丝分裂原蛋白活化酶(MAPK)信号通路 抗肿瘤 药物筛选模型
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异柠檬酸裂解酶的制备及其抑制剂筛选模型的建立 被引量:1
15
作者 王旸 郝雪秦 +2 位作者 高鹏 杨延辉 肖春玲 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期467-470,511,共5页
目的制备结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶(isocitrate lyase,ICL)并建立ICL抑制剂筛选模型。方法通过四步层析法或金属螯合层析法纯化大肠埃希菌BL21(DE3)表达的ICL,并以异柠檬酸为底物,用纯化的ICL裂解异柠檬酸,生成乙醛酸可与苯肼反应生... 目的制备结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶(isocitrate lyase,ICL)并建立ICL抑制剂筛选模型。方法通过四步层析法或金属螯合层析法纯化大肠埃希菌BL21(DE3)表达的ICL,并以异柠檬酸为底物,用纯化的ICL裂解异柠檬酸,生成乙醛酸可与苯肼反应生成苯腙,苯腙在324nm波长下产生光吸收峰,测定酶促反应体系在324nm波长下光吸收检测异柠檬酸裂解酶的活性,根据待测样品对酶活性的抑制程度,筛选异柠檬酸裂解酶抑制剂。结果用金属螯和层析法得到纯度为90%、比活力为2.8U/mg的ICL,建立并优化ICL抑制剂筛选模型,模型的信噪比(S/N)远大于3,变异系数(CV)远小于10%。结论通过金属螯合层析法获得了特异性高、稳定性好的ICL抑制剂筛选模型,该模型可有效的应用于异柠檬酸裂解酶抑制剂的高通量筛选。 展开更多
关键词 柠檬酸裂解酶 筛选模型 异柠檬酸裂解酶抑制剂 高通量筛选
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基于荧光素酶的抗巨细胞病毒体外药物筛选模型的建立及应用 被引量:1
16
作者 周丹云 吴俊文 +3 位作者 蒋情 王庆林 刘如石 全梅芳 《激光生物学报》 CAS 2021年第6期526-532,共7页
人巨细胞病毒(HCMV)感染是常见的病毒性疾病,目前无有效的疫苗,故抗病毒药物筛选对HCMV的治疗具有重要意义。为了构建一种抗巨细胞病毒体外药物快速筛选模型,本研究以带有荧光素酶标签的鼠巨细胞病毒细菌人工染色体(Luc-MCMV-BAC)为基础... 人巨细胞病毒(HCMV)感染是常见的病毒性疾病,目前无有效的疫苗,故抗病毒药物筛选对HCMV的治疗具有重要意义。为了构建一种抗巨细胞病毒体外药物快速筛选模型,本研究以带有荧光素酶标签的鼠巨细胞病毒细菌人工染色体(Luc-MCMV-BAC)为基础,将其转染至小鼠成纤维细胞NIH-3T3,成功获得重组病毒Luc-MCMV,且其能够在细胞中稳定发光。噬斑法测定的病毒生长曲线显示,Luc-MCMV与野生型病毒Wt-MCMV具有相似的生长动力学,说明Luc-MCMV能够反映Wt-MCMV的生长状况,可用于后续抗病毒药物的筛选评价。进一步选用更昔洛韦(Ganciclovir)作为阳性对照药物,应用该体系对6种中药单体进行了筛选,结果显示黄芩素和黄芪甲苷具有抗MCMV活性,为抗HCMV药物的筛选奠定了前期基础。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 重组病毒 抗病毒药物筛选 荧光素酶 筛选模型
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GABA_B受体变构剂药学研究进展 被引量:1
17
作者 蒋明 黄思罗 +6 位作者 林昕 春雷 皮振钧 孙兵 张文华 赵菡 刘剑峰 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第14期2775-2778,共4页
γ-氨基丁酸B受体(GABAB receptor,GABABR)是最具有药理学意义的药物靶点之一,具有复杂而精细的激活机制。传统的GABABR靶点药物开发集中于激动剂和拮抗剂,这类药物受到多种因素的制约,包括较强的副作用、药物代谢困难、机体耐药性明显... γ-氨基丁酸B受体(GABAB receptor,GABABR)是最具有药理学意义的药物靶点之一,具有复杂而精细的激活机制。传统的GABABR靶点药物开发集中于激动剂和拮抗剂,这类药物受到多种因素的制约,包括较强的副作用、药物代谢困难、机体耐药性明显等。变构剂结合于正构位点之外,能够调节GABABR异源二聚体亚基或结构域间的相互作用。正向变构剂(positiveallosteric modulators,PAMs)和负向变构剂(negative allosteric modulators,NAMs)分别可以提高或降低GABABR的活性,并具有较高的特异性和药物安全性,同时还能够保持GABABR信号在时间和空间上的可控性。变构剂为GABABR靶点药物开发提供了新思路。 展开更多
关键词 GABAB受体 药物靶点 变构剂 药物开发 筛选模型
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一种靶向Wee1蛋白激酶的小分子抑制剂体外筛选模型的建立
18
作者 周秋华 苗雷 +3 位作者 季晓君 左锐 吴舰 徐丹 《中国医药生物技术》 2022年第2期138-144,共7页
目的建立靶向Wee1激酶的小分子抑制剂体外筛选模型,为Wee1抑制剂的筛选提供评价方法。方法使用ADP-Glo法检测Wee1的激酶活性;在p53突变型人结直肠癌细胞(WiDr)上优化了损伤剂的作用时间与浓度以及Wee1抑制剂的作用时间,建立了评价Wee1... 目的建立靶向Wee1激酶的小分子抑制剂体外筛选模型,为Wee1抑制剂的筛选提供评价方法。方法使用ADP-Glo法检测Wee1的激酶活性;在p53突变型人结直肠癌细胞(WiDr)上优化了损伤剂的作用时间与浓度以及Wee1抑制剂的作用时间,建立了评价Wee1抑制剂MK-1775单用以及与化疗药物吉西他滨联用的细胞活性评价模型;使用Odyssey in-cell Western方法检测细胞内Wee1的下游蛋白Cdc2及HH3的磷酸化水平,在细胞水平验证Wee1抑制剂的作用机制。结果优化了DNA损伤剂吉西他滨的作用浓度(4.5 nmol/L)与作用时间(48 h)以及Wee1抑制剂MK-1775的作用时间(72h)。使用MK-1775对筛选模型进行验证,吉西他滨或MK-1775单用对细胞均表现出较弱的增殖抑制作用,而在联用实验中,MK-1775能明显增加吉西他滨对细胞的损伤作用,且3次重复实验结果稳定。结论成功建立了一种简单、新颖、有效的Wee1激酶小分子抑制剂体外筛选模型。 展开更多
关键词 MK-1775 Wee1激酶 DNA损伤 体外活性 药物联用 筛选模型
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以绿脓杆菌外排泵外膜蛋白OprM为靶点的药物筛选模型 被引量:1
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作者 田睿 余利岩 +3 位作者 肖春玲 左联 姚天爵 杨丽霞 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期359-363,共5页
目的 以绿脓杆菌主动外排系统中MexAB-OprM型外排泵的外膜蛋白OprM为靶点,建立外排泵抑制剂筛选模型。方法 利用PCR法从标准绿脓杆菌PA01菌株中得到外排泵外膜蛋白基因oprM,利用T-easy载体作为克隆载体,pMMB67EH为表达载体在大肠杆菌HS... 目的 以绿脓杆菌主动外排系统中MexAB-OprM型外排泵的外膜蛋白OprM为靶点,建立外排泵抑制剂筛选模型。方法 利用PCR法从标准绿脓杆菌PA01菌株中得到外排泵外膜蛋白基因oprM,利用T-easy载体作为克隆载体,pMMB67EH为表达载体在大肠杆菌HS151中进行OprM蛋白的诱导表达。为检测OprM蛋白的功能,采用液闪计数法测定胞内四环素浓度,纸片法进行抑菌圈测定实验,并以此为基础建立筛选模型。结果 可见OprM蛋白的高表达,以其为主要检定菌,建立了一个作用于外排泵外膜OprM蛋白的药物筛选模型。累计应用此模型筛选放线菌和真菌发酵液样品1 600个,其中获得阳性菌株56个,阳性率约为3.5%。结论 本研究验证了OprM蛋白对外排作用的重要性,通过筛选实验表明该模型有较好的特异性和可操作性。 展开更多
关键词 绿脓杆菌 外排泵 OprM 药物筛选
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基于原代细胞培养的三维肿瘤药筛模型的初步研究
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作者 王健 张荟蓉 +2 位作者 赵盼 王光锁 邹畅 《海南医学》 CAS 2021年第14期1778-1781,共4页
目的以原代培养的肺癌肿瘤细胞为基础,建立一种体外肿瘤药筛模型。方法通过将分离得到的肿瘤细胞与饲养层细胞共培养,使肿瘤细胞在体外得到初步扩增。培养得到的肿瘤细胞与海藻酸钠溶液混合后滴进氯化钙溶液中形成稳定的海藻酸钙凝胶微... 目的以原代培养的肺癌肿瘤细胞为基础,建立一种体外肿瘤药筛模型。方法通过将分离得到的肿瘤细胞与饲养层细胞共培养,使肿瘤细胞在体外得到初步扩增。培养得到的肿瘤细胞与海藻酸钠溶液混合后滴进氯化钙溶液中形成稳定的海藻酸钙凝胶微球(水凝胶),凝胶微球为细胞提供一个模拟的三维生长环境,通过传统的CCK8细胞毒性实验进行药物筛选。结果基于原代细胞培养建立的三维模型中,形成的海藻酸钙凝胶微球大小均一,形态完整,该凝胶微球可用CCK8细胞毒性实验进行药物筛选,细胞毒性实验提示顺铂、卡铂及盐酸吉西他滨对该原代细胞的抑制率相对较高。结论海藻酸钙凝胶微球三维体系的形成表明基于原代培养的三维肿瘤模型已初步建立,并且该模型可用作药物筛选,为临床用药提供一定的指导。 展开更多
关键词 原代肺癌细胞 共培养 三维培养 海藻酸钠 氯化钙 药物筛选模型
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