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靶向ERCC1 RNA干扰对人肺腺癌细胞顺铂耐药的逆转 被引量：7
1
作者 夏莹 胡成平 +3 位作者 张梅春 杨红忠 杨华平 周东波 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第6期531-535,共5页
目的:探讨利用RNA干扰技术切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-completion gene 1,ERCC1)逆转耐顺铂(cisplatin,CDDP)人肺腺癌细胞A549/CDDP的耐药性。方法:(1)常规体外培养A549/CDDP细胞,以脂质体包裹的ERCC1-siRNA转染细胞... 目的:探讨利用RNA干扰技术切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-completion gene 1,ERCC1)逆转耐顺铂(cisplatin,CDDP)人肺腺癌细胞A549/CDDP的耐药性。方法:(1)常规体外培养A549/CDDP细胞,以脂质体包裹的ERCC1-siRNA转染细胞,转染浓度分别为100、200、300 nmol/L,并设空白转染、Lip转染对照组,观察转染效果。(2)采用免疫组化SABC法及RT-PCR法分别检测肿瘤细胞转染siRNA后ERCC1基因和蛋白的表达。(3)MTT法检测肿瘤细胞耐药指数,观察ERCC1靶向siRNA逆转A549/CDDP细胞顺铂耐药的效果。结果:(1)Lip组、siRNA-neg组转染效率分别为(56.38±9.82)%、(63.54±4.87)%,SiRNA-ERCC1①组、siRNA-ERCC1②组、siRNA-ERCC1③组转染效率分别为(43.62±6.08)%、(65.85±9.61)%和(78.93±4.86)%。(2)针对ERCC1的siRNA转染A549/CDDP后,细胞ERCC1 mRNA及蛋白表达均下调,siRNA-ERCC1(300 nmol/L)组效应最强,分别下降至(11.19±6.82)%和(20.88±6.57)%(P<0.01)。(3)A549/CDDP细胞转染后耐药倍数减为6.05、4.64、2.94,空载体对照组细胞的耐药倍数为9.6。结论:RNA干扰技术封闭ERCC1基因可较大程度逆转耐顺铂人肺腺癌细胞的耐药性,且呈一定的浓度依赖性;ERCC1基因可作为逆转肺癌耐药治疗的有效靶点。 展开更多
关键词 肺癌细胞 顺铂耐药 逆转 修复交叉互补基因1 RNA干扰
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miR-590-5p通过靶向PTEN调控胃腺癌细胞SGC7901对顺铂敏感性的影响 被引量：3
2
作者 陈莹 章海斌 +2 位作者 刘玉 丁晓娇 王子安 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第12期1635-1639,共5页
目的探讨miR-590-5p通过下游靶基因磷酸酶及张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)调节人胃癌SGC7901细胞对顺铂敏感性的作用。方法通过Targetscan等生物信息学软件预测miR-590-5p下游... 目的探讨miR-590-5p通过下游靶基因磷酸酶及张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)调节人胃癌SGC7901细胞对顺铂敏感性的作用。方法通过Targetscan等生物信息学软件预测miR-590-5p下游靶基因,并用Western blot以及qRT-PCR验证其下游靶基因的表达;通过脂质体Lipofectamine 2000将miR-590-5p mimics及miR-590-5p inhibitor分别转染至人胃腺癌细胞SGC701和SGC7901/DDP,MTT检测转染后的胃癌细胞在不同顺铂浓度(0,2,4,8,16,32μmol/L)时对细胞增殖抑制作用。结果生物信息学软件预测到miR-590-5p与PTEN能够靶向互补。Western blot以及qRT-PCR结果提示,SGC7901细胞和SGC7901/DDP分别过表达和抑制miR-590-5p后PTEN的表达分别相应降低和升高(P<0.05)。人胃腺癌细胞SGC7901上调miR-590-5p mimics后较亲本细胞SGC7901对顺铂的敏感性升高,而转染miR-590-5p inhibitor后的SGC7901/DDP细胞对顺铂敏感性降低(P<0.05)。结论miR-590-5p可能通过调节下游靶基因PTEN的表达而影响胃癌细胞对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 胃癌 miR-590-5p 顺铂耐药性 PTEN
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RNA干扰沉默黏蛋白1基因表达对食管癌细胞株Eca109顺铂耐药性的影响 被引量：2
3
作者 王衍泽 管向臣 +2 位作者 史墨 辛钟伟 刘相燕 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第9期1476-1478,共3页
目的观察RNA干扰沉默黏蛋白1（MUC1）表达，食管癌细胞株Eca109在顺铂作用下的增殖差异，探讨MUC1表达与肿瘤顺铂耐药性的关系。方法设计靶向MUC1基因的慢病毒载体pGC-LV-MUC1小干扰RNA（siRNA），并以感染复数（MOI）＝100转染人食管... 目的观察RNA干扰沉默黏蛋白1（MUC1）表达，食管癌细胞株Eca109在顺铂作用下的增殖差异，探讨MUC1表达与肿瘤顺铂耐药性的关系。方法设计靶向MUC1基因的慢病毒载体pGC-LV-MUC1小干扰RNA（siRNA），并以感染复数（MOI）＝100转染人食管癌细胞株Eca109，用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白（GFP）表达，用Western blot方法检测细胞内MUC1蛋白含量，验证siRNA对MUC1基因抑制作用。设置浓度梯度0、5、15、30、45、60 μmol/L，分别作用0、12、24、48 h，应用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞抑制率，计算顺铂半数抑制浓度（IC50）。用Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关X蛋白（bax）的表达，验证凋亡通路激活。结果与对照组比较，转染了重组慢病毒颗粒pGC-LV-MUC1 siRNA的Eca109细胞（实验组）内MUC1蛋白水平（0.566±0.202比1.252±0.323，t＝3.119，P＝0.036）；顺铂作用12 h实验组IC50（μmol/L）（66.860±4.749比30.203±0.341，t＝13.335，P＝0.000）明显下降；顺铂作用24 h实验组细胞IC50（μmol/L）明显下降（13.710±0.617比33.680±1.737，t＝18.759，P＝0.000）；实验组凋亡相关蛋白bcl-2表达减少（0.551±0.190比1.416±0.139，t＝6.362，P＝0.003），bax的表达增加（0.553±0.055比1.345±0.155，t＝8.335，P＝0.001）。结论人食管癌细胞株Eca109沉默MUC1基因表达，可以导致细胞对顺铂耐药性下降。MUC1基因可能通过抑制凋亡激活途径，增加食管癌细胞对顺铂的耐药。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 黏蛋白1 顺铂耐药性 RNA干扰
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上皮性卵巢癌中Bax、Gal-3及GST-π表达与顺铂化疗耐药的关系 被引量：7
4
作者 王小玉 唐寅 +1 位作者 孔佑虔 朱梦一 《西部医学》 2021年第10期1544-1548,共5页
目的探讨上皮性卵巢癌中细胞凋亡相关因子Bax、半乳糖凝集素-3(Gal-3)及谷胱甘肽转移酶-π(GST-π)表达与顺铂化疗耐药的关系。方法选取2018年4月~2019年12月黑龙江中医药大学附属第一医院收治的94例上皮性卵巢癌患者(卵巢癌组)为研究对... 目的探讨上皮性卵巢癌中细胞凋亡相关因子Bax、半乳糖凝集素-3(Gal-3)及谷胱甘肽转移酶-π(GST-π)表达与顺铂化疗耐药的关系。方法选取2018年4月~2019年12月黑龙江中医药大学附属第一医院收治的94例上皮性卵巢癌患者(卵巢癌组)为研究对象,按其对化疗是否敏感分为化疗敏感组(敏感组)58例和化疗耐药组(耐药组)36例。另选取同期进行健康体检的53例女性体检者作为对照组。比较各组Bax、Gal-3及GST-π表达情况及上述因子与上皮性卵巢癌病理特征的关系,并分析上述因子预测上皮性卵巢癌患者顺铂化疗耐药的价值。结果卵巢癌组Bax、Gal-3及GST-π阳性表达率均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Bax阳性表达率与上皮性卵巢癌患者临床分期、病理分级具有显著相关性(P<0.05);Gal-3阳性表达率与上皮性卵巢癌患者临床分期、淋巴结转移及病理分级具有显著相关性(P<0.05);GST-π阳性表达率仅与病理分级具有相关性(P<0.05)。敏感组Bax阳性表达率显著高于耐药组,Gal-3、GST-π阳性表达率显著低于耐药组,差异具有统计学意义(P<0.05)。ROC结果示:Bax、Gal-3及GST-π单项检测曲线下面积(AUC)分别为0.655、0.691、0.773,联合检测AUC为0.803,明显高于单独检测。结论Bax低表达、Gal-3及GST-π高表达与上皮性卵巢癌患者顺铂化疗耐药相关,联合检测上述因子可预测患者化疗的敏感性。 展开更多
关键词 上皮性卵巢癌 BAX 半乳糖凝集素-3 谷胱甘肽转移酶-π 顺铂化疗耐药
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卵巢癌细胞中hCTR1的表达与细胞对顺铂耐药的相关研究 被引量：6
5
作者 于海林 姜燕 +1 位作者 赵亮 鹿欣 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期934-939,共6页
目的:探讨人铜离子转运蛋白1(humanc opper transporter1,hCTR1)与卵巢癌细胞对铂类药物耐药的关系。方法:构建重组反转录病毒载体pBABEpuro-hCTR1,转染包装细胞后感染人卵巢癌细胞株SKOV-3,用嘌呤霉素筛选得到稳定表达hCTR1的pBABEpuro... 目的:探讨人铜离子转运蛋白1(humanc opper transporter1,hCTR1)与卵巢癌细胞对铂类药物耐药的关系。方法:构建重组反转录病毒载体pBABEpuro-hCTR1,转染包装细胞后感染人卵巢癌细胞株SKOV-3,用嘌呤霉素筛选得到稳定表达hCTR1的pBABEpuro-hCTR1/SKOV-3细胞。应用实时荧光定量.PCR(real time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测pBABEpuro-hCTR1/SKOV-3细胞中hCTR1mRNA和蛋白的表达,MTT法检测顺铂(cisplatin,DDP)对pBABEpuro/SKOV-3和pBABEpuro-hCTR1/SKOV-3细胞的增殖抑制率,FCM检测DDP对上述细胞周期的影响,电感耦合等离子质谱法(ion-coupled plasma-mass spectroscopy,ICP-MS)测定细胞内的铂含量。结果:成功构建了hCTR1高表达的SKOV-3稳定细胞株。DDP对pBABEpuro-hCTR1/SKOV-3细胞的IC50值为(18.97±1.24)μmol/L,对pBABEpuro/SKOV-3细胞的IC50值为(29.35±2.12)μmol/L(P<0.01)。DDP对pBABEpuro-hCTR1/SKOV-3细胞的S期阻滞作用大于pBABEpuro/SKOV-3细胞。pBABEpuro-hCTR1/SKOV-3细胞对DDP的摄入能力大于pBABEpuro/SKOV-3细胞。结论:hCTR1参与卵巢癌细胞对DDP的转运,其高表达可增强SKOV-3细胞对DDP的摄入能力和敏感性。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 抗药性 肿瘤 顺铂 人铜离子转运蛋白
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银杏内酯B下调切除修复交叉互补基因1表达及增加耐药卵巢癌细胞对顺铂敏感性体外研究 被引量：6
6
作者 姜伟 徐丛剑 +3 位作者 丛青 王宜生 孙霞 BINYle 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期615-618,共4页
目的:研究银杏叶提取物银杏内酯B(GB)增加耐顺铂卵巢癌细胞株(SKOV3/DDP-luc)对顺铂(CDDP)敏感性的作用及相关机制。方法:分别以DMSO及25μmol/L的GB处理SKOV3/DDP-luc细胞3、7及14d,溴化噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞经不同浓度CDDP作用72... 目的:研究银杏叶提取物银杏内酯B(GB)增加耐顺铂卵巢癌细胞株(SKOV3/DDP-luc)对顺铂(CDDP)敏感性的作用及相关机制。方法:分别以DMSO及25μmol/L的GB处理SKOV3/DDP-luc细胞3、7及14d,溴化噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞经不同浓度CDDP作用72h后的活性,并据此计算出各组细胞对CDDP的IC50;同时提取上述作用时间点各组细胞的总蛋白,Western Blot检测DNA损伤修复相关蛋白ERCC1的表达情况。结果:GB作用3、7、14d后,SKOV3/DDP-luc细胞对CDDP的IC50分别降为24.2(与对照组相比P=0.07)、18.2(与对照组相比P=0.001)、11.6μmol/L(与对照组相比P=0.0004);在上述处理过程中,肿瘤细胞中ERCC1的表达逐渐下降(P<0.01)。结论:GB可显著增加耐药卵巢癌细胞株对CDDP的敏感性,这一作用通过下调肿瘤细胞中ERCC1蛋白的表达而实现,提示GB可能成为临床卵巢癌化疗过程中的一种辅助药物。 展开更多
关键词 卵巢癌 耐药 顺铂 银杏内酯B 切除修复交叉互补基因1
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