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菜豆晕疫病菌的检测技术研究 被引量：7
1
作者 崔汝强 胡学难 +2 位作者 冯黎霞 赵立荣 钟国强 《植物检疫》 北大核心 2010年第4期25-27,共3页
通过选择性培养基的筛选,利用菜豆萎蔫毒素基因序列扩增引物和菜豆萎蔫毒素基因缺失菌株独有的ORF6序列的扩增引物,采用双重PCR技术实现了菜豆晕疫病菌的快速检测。
关键词 菜豆晕疫病菌 选择性培养基 双重pcr 检测
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鸡白痢与鸡伤寒沙门菌双重PCR方法的建立和初步应用 被引量：5
2
作者 朱春红 陶志云 +5 位作者 刘宏祥 徐文娟 章双杰 李非 唐燕飞 蒋莲华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第8期74-76,共3页
分析不同血清型/生物型沙门菌全基因组序列筛选出鸡白痢和鸡伤寒沙门菌特异性基因组序列,设计两对引物,建立双重PCR方法鉴别检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌不同生物型,并进行初步的临床应用。双重PCR方法结果显示,鸡白痢沙门菌显示417 bp条带... 分析不同血清型/生物型沙门菌全基因组序列筛选出鸡白痢和鸡伤寒沙门菌特异性基因组序列,设计两对引物,建立双重PCR方法鉴别检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌不同生物型,并进行初步的临床应用。双重PCR方法结果显示,鸡白痢沙门菌显示417 bp条带,鸡伤寒沙门菌显示417 bp和636 bp两个条带,而阴性对照未出现条带,与预期设计相符。双重PCR体系对56株不同血清型沙门菌鉴定结果与细菌学分离的血清型鉴定结果完全一致,说明本试验建立的双重PCR体系特异性良好,应用上述方法检测鸡场疑似20份临床样本,结果发现8株鸡白痢沙门菌阳性,1株鸡伤寒沙门菌阳性。上述结果表明,已建立双重PCR方法特异性检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌。本试验为鸡白痢和鸡伤寒不同生物型沙门菌的检测提供了一种简洁、敏感、特异的新方法。 展开更多
关键词 鸡白痢沙门菌 鸡伤寒沙门菌 检测 双重-pcr
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快速鉴别奶牛乳腺炎细菌或真菌的双重PCR方法 被引量：1
3
作者 戈胜强 柴同杰 +5 位作者 马保臣 李晓霞 蔡玉梅 吕静 秦梅 王炳晓 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1554-1561,共8页
综合多种细菌、真菌DNA模板的提取方法,采用β-巯基乙醇裂解细胞壁,利用蜗牛酶和溶菌酶消化细胞壁,再利用石英砂机械破壁,能彻底破坏细菌、真菌细胞壁,提取高质量的DNA,摸索出一套从奶样中同时提取细菌、真菌核酸的新方法。建立双重PCR... 综合多种细菌、真菌DNA模板的提取方法,采用β-巯基乙醇裂解细胞壁,利用蜗牛酶和溶菌酶消化细胞壁,再利用石英砂机械破壁,能彻底破坏细菌、真菌细胞壁,提取高质量的DNA,摸索出一套从奶样中同时提取细菌、真菌核酸的新方法。建立双重PCR方法,同时完成对细菌16S rRNA保守区特异性基因片段和真菌18S rRNA保守区特异性基因片段的扩增,快速诊断奶牛乳房炎是细菌感染还是真菌感染或是混合感染。对采自临床型乳腺炎和隐性乳腺炎病例的共计84个乳样分别用传统细菌学培养法和双重PCR方法对比鉴定。结果表明,双重PCR检测乳样细菌的最小浓度为102CFU/mL,检测乳样真菌的最小浓度为103CFU/mL。双重PCR方法对细菌的检测与平板培养检测方法比较差异不显著(P>0.05),对真菌的检测与平板培养检测方法比较具有更高的检出率(P<0.01)。 展开更多
关键词 奶牛乳腺炎 细菌 真菌 双重pcr
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双重式PCR检测鼠疫流行现场动物脏器的结果分析 被引量：3
4
作者 郭英 吴明寿 +2 位作者 张洪英 张丽云 董兴齐 《中国地方病防治》 2004年第2期77-78,共2页
目的　探讨双重式聚合酶链反应 (Pla -FI-PCR)技术在鼠疫流行现场检测动物脏器的应用。方法　应用双重式PCR技术 ,采用简单的加热法处理模板 ,对罗平县的 5 0份动物脏器进行检测。结果　检出阳性 2 2份 ,阳性率为44 %,其中活鼠脏器阳性... 目的　探讨双重式聚合酶链反应 (Pla -FI-PCR)技术在鼠疫流行现场检测动物脏器的应用。方法　应用双重式PCR技术 ,采用简单的加热法处理模板 ,对罗平县的 5 0份动物脏器进行检测。结果　检出阳性 2 2份 ,阳性率为44 %,其中活鼠脏器阳性 11份。 展开更多
关键词 动物脏器 鼠疫 阳性 流行 结果分析 早期发现 FI pcr检测 加热法 罗平县
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乳品中致病大肠杆菌荧光双重PCR技术建立 被引量：2
5
作者 郭清泉 廖如燕 曾旸 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2012年第2期131-133,共3页
建立乳及乳制品中致病性大肠杆菌(EPEC)的快检方法。以EPEC特异的微绒毛粘连基因(eae gene)和茵毛束形成编码基因(bfp gene)为模板,设计两对引物,荧光探针对EPEC进行特异性扩增。该方法快速,特异性好,对EPEC的最低检出量为1 cfu/μL(纯... 建立乳及乳制品中致病性大肠杆菌(EPEC)的快检方法。以EPEC特异的微绒毛粘连基因(eae gene)和茵毛束形成编码基因(bfp gene)为模板,设计两对引物,荧光探针对EPEC进行特异性扩增。该方法快速,特异性好,对EPEC的最低检出量为1 cfu/μL(纯菌),检出时间为3 h,同一样品重复检测3次ct值的变异系数均小于5%。建立可快速特异检测乳及乳制品中EPEC的双重荧光PCR方法。 展开更多
关键词 两重荧光pcr 乳及乳制品 致病性大肠杆菌
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利用双重数字PCR方法检测进口粮谷中携带地肤的EPSPS基因拷贝数 被引量：2
6
作者 吴晶 伏建国 +5 位作者 刘晓宇 许忠祥 李洋 郭静 杨晓军 李井干 《安徽农业科学》 CAS 2022年第9期179-181,184,共4页
建立了双重数字PCR检测地肤EPSPS基因拷贝数的方法,对进口粮谷中携带的8个地肤样品进行检测,发现2个样品的EPSPS相对拷贝数小于1,6个样品EPSPS相对拷贝数大于5,其中一个样品EPSPS相对拷贝数高达45.67。由此可见,进口北美粮谷携带抗草甘... 建立了双重数字PCR检测地肤EPSPS基因拷贝数的方法,对进口粮谷中携带的8个地肤样品进行检测,发现2个样品的EPSPS相对拷贝数小于1,6个样品EPSPS相对拷贝数大于5,其中一个样品EPSPS相对拷贝数高达45.67。由此可见,进口北美粮谷携带抗草甘膦地肤的比例很高。 展开更多
关键词 双重数字pcr 地肤 EPSPS基因拷贝数 进口粮谷
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甲型H1N1流感双重荧光PCR快速筛查方法的研究
7
作者 王佃鹏 朱玉兰 +5 位作者 李政良 刘胜牙 董瑞玲 黄宗炎 高朝贤 胡孔新 《热带医学杂志》 CAS 2010年第2期153-155,180,共4页
目的优化一种甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法。方法根据WHO推荐的甲型H1N1流感检测方案合成、标记引物和探针。通过改进反应条件与参数,优化了甲型H1N1流感的双重荧光PCR检测方法。结果该方法敏感度高,特异性强,重复性好。应用... 目的优化一种甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法。方法根据WHO推荐的甲型H1N1流感检测方案合成、标记引物和探针。通过改进反应条件与参数,优化了甲型H1N1流感的双重荧光PCR检测方法。结果该方法敏感度高,特异性强,重复性好。应用该方法检测患者实际样品,结果与WHO推荐方法的检测结果一致;应用该法可在4h内完成对样品中甲型H1N1流感的检验。结论本研究优化的甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法可用于甲型H1N1流感的诊断。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感 双重荧光pcr 检测
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在长期保存的DNA模板中用双重式PCR检测鼠疫特异性基因的结果分析
8
作者 张洪英 郭英 +1 位作者 吴明寿 董兴齐 《医学动物防制》 2007年第9期646-647,共2页
目的了解鼠、蚤材料DNA模板长期保存后鼠疫菌特异性基因的检出率。方法应用双重式PCR技术,以鼠疫菌特异性基因Pla和Fra作为引物,进行PCR实验,比较DNA模板在-20℃冰箱保存3d和5年的检测情况。结果实验感染的动物脏器模板,检出阳性率从100... 目的了解鼠、蚤材料DNA模板长期保存后鼠疫菌特异性基因的检出率。方法应用双重式PCR技术,以鼠疫菌特异性基因Pla和Fra作为引物,进行PCR实验,比较DNA模板在-20℃冰箱保存3d和5年的检测情况。结果实验感染的动物脏器模板,检出阳性率从100%降到25.00%,印鼠客蚤和缓慢细蚤的模板检出阳性率分别从100%降为16.22%和23.33%;现场采集的22份动物脏器模板阳性率从100%降为22.73%;纯菌模板对照阳性率100%。结论鼠疫PCR阳性检出率与模板中的鼠疫菌含菌量及模板保存的时间有关。 展开更多
关键词 鼠疫菌 DNA 长期保存 双重式pcr
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罗非鱼源无乳链球菌双重PCR快速检测方法的建立 被引量：24
9
作者 王均 汪开毓 +6 位作者 肖丹 黄锦炉 付希 王浩丞 陈德芳 耿毅 阳涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期496-502,共7页
根据GenBank中罗非鱼源无乳链球菌荚膜多糖的cpsF基因和CAMP因子的cfb基因序列,设计2对特异性引物,通过对反应体系和反应条件优化,并进行特异性试验、敏感性试验及人工感染罗非鱼组织样品检测,建立了快速检测无乳链球菌的双重PCR方法。... 根据GenBank中罗非鱼源无乳链球菌荚膜多糖的cpsF基因和CAMP因子的cfb基因序列,设计2对特异性引物,通过对反应体系和反应条件优化,并进行特异性试验、敏感性试验及人工感染罗非鱼组织样品检测,建立了快速检测无乳链球菌的双重PCR方法。结果显示,仅无乳链球菌能扩增出cpsF和cfb两条特异性条带,而海豚链球菌、金黄色葡萄球菌、鮰爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌、豚鼠气单胞菌、嗜麦芽寡养单胞菌无条带检出;经敏感性试验,最小模板检出量为7.632×10-2ng/μL;同时对30尾人工感染无乳链球菌的罗非鱼肝和肾组织中细菌DNA进行双重PCR检测和细菌分离鉴定,检出的阳性结果一致。证实,所建立的方法具有快速、特异、灵敏的优点,适用于对罗非鱼等无乳链球菌的感染病例进行流行病学监测。 展开更多
关键词 无乳链球菌 cpsF基因 cfb基因 双重聚合酶链反应 罗非鱼
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牛冠状病毒和轮状病毒的双重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：19
10
作者 柳强 侯喜林 +2 位作者 车车 刘双翼 刘合义 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期701-704,共4页
为建立一种快速诊断牛病毒性腹泻疾病的方法,利用本研究室分离鉴定的牛冠状病毒(BCV)和牛轮状病毒(BRV)毒株,根据GenBank中登录的BCV、BRV核苷酸序列分别设计并合成了两对能特异性扩增BCV、BRV的引物,经过条件优化,建立了检测BCV、BRV... 为建立一种快速诊断牛病毒性腹泻疾病的方法,利用本研究室分离鉴定的牛冠状病毒(BCV)和牛轮状病毒(BRV)毒株,根据GenBank中登录的BCV、BRV核苷酸序列分别设计并合成了两对能特异性扩增BCV、BRV的引物,经过条件优化,建立了检测BCV、BRV的双重PCR方法,扩增两种病毒的片段分别为244bp和382bp。该方法检测BCV和BRV的敏感度分别为1个和100个TCID50/100μL。应用这一方法能从病料中检测出这2种病毒。结果表明该双重RT-PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于这2种病毒性疾病的快速诊断。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 牛轮状病毒 双重pcr
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快速鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种双重PCR方法的建立 被引量：15
11
作者 李书光 李天芝 +2 位作者 李峰 胡琳琳 沈志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期43-46,共4页
本试验旨在建立一种快速、特异、敏感的双重PCR鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种病原检测方法。根据猪链球菌GDH蛋白和马链球菌类M蛋白的基因保守区分别设计引物,优化了该双重PCR检测方法的引物浓度及比例,并筛选了其最佳退火温度;用该双... 本试验旨在建立一种快速、特异、敏感的双重PCR鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种病原检测方法。根据猪链球菌GDH蛋白和马链球菌类M蛋白的基因保守区分别设计引物,优化了该双重PCR检测方法的引物浓度及比例,并筛选了其最佳退火温度;用该双重PCR反应体系以其他几株阴性菌株为对照,检测了该反应体系的特异性。以新鲜培养的猪链球菌倍比稀释后进行菌落计数,对该检测方法的敏感性进行了鉴定。M-like和GDH引物的加入量均为1μL(20pmol/L),最佳退火温度为52.3℃;该双重PCR反应体系有较高敏感性,检测马链球菌兽疫亚种和猪链球菌的敏感度分别达100和10CFU;特异性试验结果显示,常见的5种病原菌在该双重PCR体系中无特异性条带出现;临床应用该方法分离鉴定了1株猪链球菌和2株马链球菌兽疫亚种。本试验建立了一种能同时检测猪链球菌和马链球菌兽疫亚种的双重PCR方法,且该方法应用快速、特异且敏感。 展开更多
关键词 猪链球菌 马链球菌兽疫亚种 双重pcr
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PRV、PPV双重PCR检测方法的建立及其应用 被引量：11
12
作者 曲光刚 沈志强 +3 位作者 管宇 王金良 唐娜 谢金文 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第11期22-23,共2页
为建立一种能够快速诊断猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的方法,根据GenBank上发表的PRV、PPV核苷酸序列分别设计并合成了两对能特异性扩增PRV、PPV的引物,经过条件优化后,建立检测PRV、PPV的双重PCR方法,扩增两种病毒的片段分别为5... 为建立一种能够快速诊断猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的方法,根据GenBank上发表的PRV、PPV核苷酸序列分别设计并合成了两对能特异性扩增PRV、PPV的引物,经过条件优化后,建立检测PRV、PPV的双重PCR方法,扩增两种病毒的片段分别为570bp、748bp。试验证明,该方法具有良好的特异性和敏感性,省时、省力、快速、敏感、高效的特点,为PRV与PPV的快速诊断试剂盒组装及流行病学的研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 双重pcr 猪伪狂犬病毒 猪细小病毒
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猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二重PCR检测方法的建立 被引量：8
13
作者 路超 张莉 +2 位作者 王利丽 杨春蕾 韩伟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1377-1382,共6页
通过对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因和猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因进行序列分析,本试验利用DNAStar软件分别设计2对特异性引物,扩增片段长度分别为299和437bp,建立一种针对TGEV和PEDV感染的二重PCR鉴别诊断方法。该方法能同时检测到T... 通过对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因和猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因进行序列分析,本试验利用DNAStar软件分别设计2对特异性引物,扩增片段长度分别为299和437bp,建立一种针对TGEV和PEDV感染的二重PCR鉴别诊断方法。该方法能同时检测到TGEV和PEDV,而对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)等均无扩增,其检测TGEV、PEDV的极限为104拷贝/μL;用该方法对临床收集的68份疑似病毒性腹泻仔猪粪便和肠道组织样本进行检测,结果表明本试验建立的二重PCR方法具有特异性强、灵敏度高等特点,能用于临床诊断及流行病学调查。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 二重pcr 诊断
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疟疾双重PCR检测方法的建立和初步应用研究 被引量：8
14
作者 蔡贤铮 区采莹 +2 位作者 王香凤 华德 陈历昌 《中国热带医学》 CAS 2001年第1期3-5,共3页
目的建立一种适合于我国恶性疟、间日疟和两者混合感染地区,一次性检测人体内或蚊体内的恶性疟原虫(P.f.)和间日疟原虫(P.v.)的双重聚合酶链反应(PCR)法.方法根据疟原虫红内期SSUrRNA基因特定片段,设计合成3条寡核苷酸特异引物,在一个... 目的建立一种适合于我国恶性疟、间日疟和两者混合感染地区,一次性检测人体内或蚊体内的恶性疟原虫(P.f.)和间日疟原虫(P.v.)的双重聚合酶链反应(PCR)法.方法根据疟原虫红内期SSUrRNA基因特定片段,设计合成3条寡核苷酸特异引物,在一个反应体系中,同时检测P.f.与P.v.的双重PCR技术,操作方法按PCR常规.结果从P.f.和P.v.感染血样中,分别扩增出274bp和412bp的特异片段,检出水平达1～5个虫/μl血,而人基因组DNA、约氏疟原虫、伯氏疟原虫均未见扩增条带;但食蟹猴疟原虫(P.c.)与P.v.相似,在412bp可见扩增条带.经对采自不同疟区发热待查病人的滤纸干血滴和确诊疟疾病人的静脉血检测,344例血样中,检出阴性112例、P.f.109例、P.v.114例、P.f.+P.v.9例,阳性率67.4%;比常规镜检的阳性率66.3%稍高,尤以检出P.f.+P.v.感染病例高.分别检测人工感染P.f.与P.v.各10只大劣按蚊的阳性唾腺,均被检出同种的阳性结果.结论一次性检测P.f.DNA与P.v.DNA的双重PCR法,敏感性高,特异性强,稳定性好,具有简化操作、提高工效、降低耗费的优点.对发热待查病人诊断和蚊媒感染疟原虫调查,以及疟疾病原学的检测质控方面,均有实用价值. 展开更多
关键词 疟疾 双重pcr 双重聚合酶链反应 恶性疟原虫 间日疟原虫 检测方法
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沙门菌和志贺菌二重PCR检测方法的建立及应用 被引量：8
15
作者 盘宝进 罗兆飞 +3 位作者 韦梅良 汪文龙 刘军义 陈立标 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第5期19-23,共5页
根据GenBank提供的沙门菌invA基因序列和志贺菌ipaH基因序列设计引物，建立了二重PCR方法，在同一反应体系同时检测两种致病菌核酸，经二重PCR方法扩增后，在同一泳道同时检出沙门菌284bp和志贺菌611bp特异性扩增条带，而普通大肠埃希... 根据GenBank提供的沙门菌invA基因序列和志贺菌ipaH基因序列设计引物，建立了二重PCR方法，在同一反应体系同时检测两种致病菌核酸，经二重PCR方法扩增后，在同一泳道同时检出沙门菌284bp和志贺菌611bp特异性扩增条带，而普通大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、阪畸大肠埃希菌、绿脓杆菌、蜡样芽胞杆菌、马链球菌、产单核细胞李斯特菌、鹅大肠埃希菌、猪水肿病大肠埃希菌均未出现这两种条带。对PCR产物进行测序，测序结果与已发表的基因核苷酸序列比较，沙门菌同源性为93％～100％，志贺菌同源性为98％～100％。应用建立的沙门菌和志贺菌二重PCR方法对广西6个试验猴养殖场1665份猴粪便样品进行检测，检出沙门菌阳性25份，志贺菌阳性90份，阳性检出率分别为1．5％和5．4％。表明建立的沙门菌和志贺菌二重PCR检测方法特异性强、敏感性高，适用于临床粪便样品的快速检测。 展开更多
关键词 猴 沙门菌 志贺菌 二重聚合酶链式反应 检测
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猪肺炎支原体与猪鼻支原体分离鉴定及鉴别检测 被引量：7
16
作者 李海利 邓祖丽颖 +8 位作者 徐引弟 王治方 张青娴 朱文豪 方剑玉 游一 侯自花 郎利敏 王克领 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第11期148-151,共4页
为建立猪肺炎支原体与猪鼻支原体的鉴别诊断方法,对从河南省及周边地区猪场采集的患呼吸道疾病的猪只样品进行支原体的分离培养,针对猪肺炎支原体与猪鼻支原体设计了2对引物,扩增片段大小分别为480 bp和360 bp,对所分离纯化的病原微生... 为建立猪肺炎支原体与猪鼻支原体的鉴别诊断方法,对从河南省及周边地区猪场采集的患呼吸道疾病的猪只样品进行支原体的分离培养,针对猪肺炎支原体与猪鼻支原体设计了2对引物,扩增片段大小分别为480 bp和360 bp,对所分离纯化的病原微生物进行了菌落形态观察及分子鉴定。结果显示,分离的病原微生物为支原体,菌落呈典型的"煎蛋样"特征;通过单一PCR扩增反应,分别得到了猪肺炎支原体与猪鼻支原体相应的目的扩增片段。表明分离到了猪肺炎支原体与猪鼻支原体。在单一扩增的基础上,建立了猪肺炎支原体与猪鼻支原体二重PCR反应方法,可同时得到2条目的条带,与单一PCR扩增结果一致。表明建立的二重PCR方法可用于猪肺炎支原体与猪鼻支原体的同时检测和鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 猪鼻支原体 鉴别诊断 二重pcr
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双重PCR检测罗非鱼源无乳链球菌方法的建立 被引量：7
17
作者 樊海平 吴斌 +4 位作者 张新艳 邓志武 郑磊 钟全福 曾占壮 《福建农业学报》 CAS 2014年第1期8-11,共4页
根据罗非鱼源无乳链球菌16SrRNA基因和sip基因序列,设计、合成2对特异性引物,通过对反应体系和反应条件优化,建立快速检测无乳链球菌的双重PCR方法。该方法扩增无乳链球菌可获得1 305bp和121bp 2个特异性片段;对6株链球菌属的菌株进行... 根据罗非鱼源无乳链球菌16SrRNA基因和sip基因序列,设计、合成2对特异性引物,通过对反应体系和反应条件优化,建立快速检测无乳链球菌的双重PCR方法。该方法扩增无乳链球菌可获得1 305bp和121bp 2个特异性片段;对6株链球菌属的菌株进行特异性分析,仅无乳链球菌能扩增出16SrRNA基因和sip基因2条特异性条带,而海豚链球菌无条带检出;经灵敏度试验,可检测到无乳链球菌菌株070717LL的最小量为1.05×102 CFU;同时,双重PCR可以检测出无乳链球菌菌株070717LL人工感染的罗非鱼脾、脑、肾组织中细菌DNA,特别是脾脏和肾脏组织的样品检测效果好。结果证明所建立的方法具有快速、特异性强、灵敏度高等优点,适用于对罗非鱼源无乳链球菌病的流行病学调查。 展开更多
关键词 无乳链球菌 16S RRNA基因 sip基因 罗非鱼
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猪伪狂犬病病毒及猪细小病毒二联PCR检测方法的建立 被引量：6
18
作者 郁宏伟 杨润德 +2 位作者 崔弈杰 秦彤 刘晓慧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期216-219,共4页
根据猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)2种病原体的基因保守序列,分别设计并合成了与PRV的gp50基因序列和PPV的VP2基因互补的两对引物,进行单相PCR,分别扩增出预期的217bp片段及158bp片段;同时,用这两对引物对混合的样品中的PRV和PP... 根据猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)2种病原体的基因保守序列,分别设计并合成了与PRV的gp50基因序列和PPV的VP2基因互补的两对引物,进行单相PCR,分别扩增出预期的217bp片段及158bp片段;同时,用这两对引物对混合的样品中的PRV和PPV的DNA模板进行二联PCR扩增及二联PCR反应条件的优化,结果得到2条与试验设计相符的217bp(PRV)和158bp(PPV)特异性条带:敏感性检测结果表明,对PRV的检测可以达到10-6.11/20μLTCID50、对PPV的检测可以达到0.008HA单位的核酸模板。本文建立的PCR方法,可以在24h内对样品进行快速检测,可作为PRV、PPV感染和临床样品检测的可靠手段。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 猪细小病毒 二联pcr
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空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌双重PCR鉴别检测方法的建立 被引量：7
19
作者 孙久鹤 郭东春 +5 位作者 李安 刘家森 刘春国 刘大飞 侯振中 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期64-68,共5页
为快速检测和鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌,本研究设计并合成了空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因hipO和结肠弯曲杆菌cdtC基因的2对特异性引物,建立并优化了快速检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的双重PCR方法。结果显示,双重PCR对空肠弯曲杆... 为快速检测和鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌,本研究设计并合成了空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因hipO和结肠弯曲杆菌cdtC基因的2对特异性引物,建立并优化了快速检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的双重PCR方法。结果显示,双重PCR对空肠弯曲杆菌hipO基因和结肠弯曲杆菌cdtC基因的扩增产物的大小分别为653bp和313bp。PCR扩增条件最终确定为退火温度为52℃,dNTP终浓度为0.4mmol/L,hipO和cdtC基因引物的终浓度均为2 5μmol/L。该双重PCR的灵敏度可达到6.6 8×1 0-2μg/mL,对多杀性巴氏杆菌、产单核细胞李氏杆菌、产气荚膜梭菌、伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌扩增均无目的条带,说明该PCR方法具有良好的灵敏性和特异性。符合试验结果与单一PCR方法结果相同。用所建立的方法对本实验室采集的鸡肛拭子划线培养后的可疑菌落进行PCR鉴定,结果显示2株为空肠弯曲杆菌,2株为结肠弯曲杆菌。结果表明,本研究建立的双重PCR可以用于同时检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌。 展开更多
关键词 空肠弯曲杆菌 结肠弯曲杆菌 双重pcr hipO基因 cdtC基因
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双重PCR检测沙门氏菌和变形杆菌方法的建立 被引量：6
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作者 郇娟 戈红雨 +3 位作者 张成龙 韩双羽 师伟 王玉宝 《天津医科大学学报》 2015年第1期84-86,共3页
目的:建立快速鉴定腹泻患者粪便标本中沙门氏菌和变形杆菌的双重聚合酶链式反应(PCR)方法。方法:针对沙门氏菌属特异基因inv A和变形杆菌属特异基因tuf分别设计特异性引物,将天津某医院肠道门诊腹泻患者粪便标本经SS培养基分离培养后,... 目的:建立快速鉴定腹泻患者粪便标本中沙门氏菌和变形杆菌的双重聚合酶链式反应(PCR)方法。方法:针对沙门氏菌属特异基因inv A和变形杆菌属特异基因tuf分别设计特异性引物,将天津某医院肠道门诊腹泻患者粪便标本经SS培养基分离培养后,对可疑菌株同时进行inv A-tuf基因双重PCR鉴定和生化鉴定,比较两种方法结果的一致性;对沙门氏菌进一步行血清学分型。结果:双重PCR和生化反应都各自鉴定得到沙门氏菌31株和变形杆菌62株,而且二者鉴定结果完全一致;31株沙门氏菌包括鼠伤寒、肠炎等常见血清型和格兰扁、菲尔摩雷等罕见血清型,均能扩增出283 bp长度片段,62株变形杆菌包括48株奇异变形杆菌、8株普通变形杆菌、2株潘氏变形杆菌、4株产黏液变形杆菌,均能扩增出541bp长度片段。结论:inv A-tuf基因双重PCR方法能够快速可靠地鉴定SS培养基上生长的沙门氏菌和变形杆菌。 展开更多
关键词 沙门氏菌 变形杆菌 双重pcr 生化反应
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