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人外周血淋巴细胞高分辨染色体制备技术的研究 被引量:10
1
作者 张清健 郑立新 +8 位作者 田佩玲 叶嘉玲 杨卫 王柏贤 徐珊珊 周冰燚 蔡慧娜 方俊宇 朱志勇 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2013年第1期53-56,共4页
目的:建立一种具有分裂指数高和染色体分散好等优点的550~850条带纹高分辨染色体的制备方法。方法:取10例健康人外周血为样本制备淋巴细胞高分辨染色体。固定5-氟尿嘧啶核苷、尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶核苷、溴化乙锭、秋水仙胺的剂量,... 目的:建立一种具有分裂指数高和染色体分散好等优点的550~850条带纹高分辨染色体的制备方法。方法:取10例健康人外周血为样本制备淋巴细胞高分辨染色体。固定5-氟尿嘧啶核苷、尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶核苷、溴化乙锭、秋水仙胺的剂量,进行5个因素3个水平的正交设计15种实验方案。5个因素分别为培养时间、胸腺嘧啶核苷、溴化乙锭、秋水仙胺作用时间以及低渗时间。3个水平分别为培养时间64、72、80h;胸腺嘧啶核苷作用时间16、17、18h;溴化乙锭作用时间3、4、5h;秋水仙胺作用时间10、15、20min以及低渗时间30、40、50min。每例样本同时采用15种方案进行实验,比较各方案带纹在550条以上时染色体分裂指数和分裂相分散的情况。结果:在15种方案中培养时间以及秋水仙胺作用时间对分裂指数有显著影响俨〈0.01),其中培养72h后加5-氟尿嘧啶核苷和尿嘧啶核苷进行同步化和秋水仙胺作用15min高分辨染色体分裂指数最大。37℃低渗40min高分辨染色体分散效果最佳。结论:本实验方案的高分辨染色体制备方法,具有分裂指数高和染色体分散好等优点,具有较好的推广价值。 展开更多
关键词 高分辨染色体 G显带 秋水仙胺 分裂指数
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化学诱导法——卵母细胞去核新策略 被引量:4
2
作者 王强 顾玲 张涌 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期763-766,共4页
哺乳动物体细胞克隆技术在过去的几年里取得了飞速发展 ,但是核移植的效率依然很低。于是人们不断的从各个方面进行探索 ,去核方法随之也成为其中的一个热点。但是传统的物理去核存在着技术要求高、耗费时间长、对细胞损伤大的缺点 ,作... 哺乳动物体细胞克隆技术在过去的几年里取得了飞速发展 ,但是核移植的效率依然很低。于是人们不断的从各个方面进行探索 ,去核方法随之也成为其中的一个热点。但是传统的物理去核存在着技术要求高、耗费时间长、对细胞损伤大的缺点 ,作为思路转换的产物 ,一种新的卵母细胞去核技术———Deme诱导去核引起了各国科学家的广泛关注。文章着重介绍了Deme诱导去核辅助的核移植程序 ,Deme诱导去核成功率的影响因素 ,Deme诱导去核方法对卵母细胞及克隆胚胎的影响 ,并结合作者从事的研究对该方法目前存在的问题及某些环节可能的改进措施提出了看法。无论如何 ,Deme诱导去核方法的有效应用仍然需要作进一步的深入研究。 展开更多
关键词 诱导去核 脱羰秋水仙碱 核移植 克隆效率 体细胞 核移植技术
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猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究 被引量:5
3
作者 任子利 赵彦玲 +3 位作者 杨小淦 陆阳清 卢晟盛 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期921-931,共11页
本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较... 本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%~80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μg.mL-1作用0.5~1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%~80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P<0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。 展开更多
关键词 化学辅助去核 脱羰秋水酰碱 手工体细胞核移植
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多倍体肿瘤细胞的建立及其生物学特性的研究 被引量:4
4
作者 王士勇 杨振君 +3 位作者 于环 杨云锋 宋利 张晖 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2008年第12期886-889,共4页
目的:建立多倍体肿瘤细胞,研究其增殖、分裂和药物敏感性。方法:将鼠纤维肉瘤细胞株Meth-A经270 nmol/L秋水仙碱、800nmol/L K-252a、100nmol/L Staurospo-line和100nmol/L紫杉醇处理60h后继续培养,台盼蓝染色计数细胞,经碘化丙啶染色... 目的:建立多倍体肿瘤细胞,研究其增殖、分裂和药物敏感性。方法:将鼠纤维肉瘤细胞株Meth-A经270 nmol/L秋水仙碱、800nmol/L K-252a、100nmol/L Staurospo-line和100nmol/L紫杉醇处理60h后继续培养,台盼蓝染色计数细胞,经碘化丙啶染色后流式细胞仪检测细胞DNA含量;并测定肿瘤细胞对3种化疗药物的半数抑制浓度(IC50)。结果:建成了可稳定生长47d的多倍体细胞,DNA含量为4倍体。此细胞呈指数增殖,但比2倍体Meth-A细胞株生长缓慢。柔红霉素对2倍体和4倍体细胞的IC50分别为(0.022±0.002)和(0.023±0.003)μg/mL,顺铂的IC50分别为(0.108±0.035)和(0.173±0.086)μg/mL,两者差异无统计学意义,t值分别为0.85和1.23,P均>0.05;但紫杉醇的IC50分别是(39.812±0.116)和(21.385±0.660)μg/mL,4倍体细胞明显低于2倍体细胞,t=6.16,P<0.01。Gimsa染色显示,多倍体细胞体积大,多核。结论:4倍体细胞可连续地增殖和分裂,对抗肿瘤药物仍然敏感,此细胞可以用于研究多倍体化后的生物学行为。 展开更多
关键词 多倍体 Meth-A细胞 秋水仙碱 肿瘤细胞 培养的
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秋水仙的化学成分 被引量:4
5
作者 何红平 胡琳 刘复初 《化学研究与应用》 CAS CSCD 1999年第5期509-510,共2页
Twelve known compounds, colchicine, 2-demethylcolchicine, 2-demethyldemecolcine, 2-demethylcolchifoline, 2-demethyl-lumicolchicine, lumicolchicine, demecolcine, luteolin, apigenin, n-hentriacontane, n-triacontanol and... Twelve known compounds, colchicine, 2-demethylcolchicine, 2-demethyldemecolcine, 2-demethylcolchifoline, 2-demethyl-lumicolchicine, lumicolchicine, demecolcine, luteolin, apigenin, n-hentriacontane, n-triacontanol and sitosterol were isolated from cormsand flowers of colchicum autumnale Liliaceae which was introduced from Europe and cultivated in Zhaotong Yunnan, China The contents ofcolchicine in corms and flowers of colchicum autumnale were 0.015% and 0.04% respectively, and the content of demecolcine in corms was0.043%. 展开更多
关键词 化学成分 秋水仙 生物碱 秋水仙碱 秋水仙胺
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超高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定化妆品中秋水仙碱、秋水仙胺和秋水仙碱苷 被引量:2
6
作者 林伟坚 康海宁 +5 位作者 吴凤琪 沈金灿 徐婷婷 赵凤娟 谢志榕 李雅玫 《分析试验室》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第7期783-788,共6页
建立了一种同时测定化妆品中秋水仙碱、秋水仙胺和秋水仙碱苷的超高效液相色谱-三重四极杆质谱分析方法。试样经正己烷饱和的甲醇-乙腈(1∶1,V/V)混合溶剂超声提取,蜡基类样品经正己烷溶解分散后提取,膏霜类样品在提取液中加入乙酸铵以... 建立了一种同时测定化妆品中秋水仙碱、秋水仙胺和秋水仙碱苷的超高效液相色谱-三重四极杆质谱分析方法。试样经正己烷饱和的甲醇-乙腈(1∶1,V/V)混合溶剂超声提取,蜡基类样品经正己烷溶解分散后提取,膏霜类样品在提取液中加入乙酸铵以改善样品乳化情况,提取液离心过滤后,以5 mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸)-甲醇作为流动相梯度洗脱,经ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱分离后,采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱在电喷雾正离子电离模式和多反应监测(MRM)模式检测。3种化合物在0.5~10μg/L范围内线性关系良好,相关系数大于0.995,检出限为3.0μg/kg,定量限为10.0μg/kg,在10.0,20.0,100μg/kg 3个加标水平下的平均回收率为81.5%~109.2%,相对标准偏差为0.5%~8.7%。该方法适用于化妆品中秋水仙碱、秋水仙胺和秋水仙碱苷的测定。 展开更多
关键词 超高效液相色谱-三重四极杆质谱法 化妆品 秋水仙碱 秋水仙胺 秋水仙碱苷
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化学辅助去核法对延边黄牛卵母细胞去核率及其重构胚发育率的影响 被引量:1
7
作者 王玉涵 朱玉霞 +2 位作者 尹多 李钟淑 方南洙 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期340-344,共5页
为提高延边黄牛体细胞克隆的效率,采用化学辅助去核法——化学诱导剂脱羰秋水仙碱(Demecolcine,简称Deme)处理体外成熟的MⅡ期延边黄牛卵母细胞,经显微操作构建重构胚后观察发育情况。试验研究了Deme的处理浓度、作用时间对延边黄牛卵... 为提高延边黄牛体细胞克隆的效率,采用化学辅助去核法——化学诱导剂脱羰秋水仙碱(Demecolcine,简称Deme)处理体外成熟的MⅡ期延边黄牛卵母细胞,经显微操作构建重构胚后观察发育情况。试验研究了Deme的处理浓度、作用时间对延边黄牛卵母细胞去核效果及其重构胚发育的影响。结果显示:体外成熟的卵母细胞在0.2μg/mL、0.3μg/mL、0.4μg/mL的Deme溶液中处理45 min,显核率与去核率无显著差异,去核率达100%,但是0.2μg/mL处理组的囊胚发育率显著高于其他处理组;45 min处理组的显核率显著高于30 min、60 min处理组,45 min处理组的囊胚率高于其他处理组;化学辅助去核法的囊胚率显著高于盲吸法。化学辅助去核能够准确定位去除细胞核,并提高了延边黄牛体细胞克隆的去核率及重构胚的体外发育率。 展开更多
关键词 延边黄牛 核移植 脱羰秋水仙碱 化学辅助去核
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秋水仙素条件优化及其对牛卵细胞c-mos基因表达水平的影响
8
作者 任久生 邓琼 +5 位作者 刘慧玉 徐靖博 柳思源 李付娟 俞先峰 张嘉保 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期636-640,共5页
为探讨秋水仙素对牛卵母细胞产生细胞膜突起的最适条件与对减数分裂纺锤体组装起重要调控作用的母源基因c-mos表达量的影响,设计如下试验:比较试验组(Deme+sucrose处理)与对照组1(Deme单独处理)和对照组2(sucrose单独处理)的卵母细胞细... 为探讨秋水仙素对牛卵母细胞产生细胞膜突起的最适条件与对减数分裂纺锤体组装起重要调控作用的母源基因c-mos表达量的影响,设计如下试验:比较试验组(Deme+sucrose处理)与对照组1(Deme单独处理)和对照组2(sucrose单独处理)的卵母细胞细胞膜突起率变化。用荧光定量检测最适合秋水仙素浓度处理的卵母细胞与空白组和对照组母源基因c-mos基因表达量的差异。结果表明,用0.6mg/L秋水仙素+0.05mol/L蔗糖处理牛卵母细胞1h细胞膜突起率达72.0%,要显著高于对照组1(13.0%)和对照组2(P<0.05);0.6mg/L秋水仙素浓度优于其他质量浓度(P<0.05)。秋水仙素加蔗糖处理的卵母细胞的母源基因c-mos表达高于蔗糖处理组和空白组c-mos基因的表达(P<0.05)。 展开更多
关键词 秋水仙素 牛卵母细胞 c—mos
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秋水仙胺半合成新方法
9
作者 刘守信 冯霄 +1 位作者 甄晓丽 田霞 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期569-571,共3页
Demecolcine was synthesized from colchicine in two steps. The methylation of colchicine with (iodomethane) was carried out in a THF solution of potassium t-butoxide at -20 ℃ for 4 h. The product was (isolated) on... Demecolcine was synthesized from colchicine in two steps. The methylation of colchicine with (iodomethane) was carried out in a THF solution of potassium t-butoxide at -20 ℃ for 4 h. The product was (isolated) on a silica gel flash column with a yield of over 78%. N-Methylcolchicine was then (hydrolyzed) in (i-propanol) and aqueous solution of sodium hydroxide under refluxing temperature to give (demecolcine). The (overall) yield was 69%. The structures of the two products were confirmed by IR and 1H NMR. 展开更多
关键词 秋水仙胺 秋水仙碱 半合成
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脱羰秋水仙碱(DM)辅助去牛卵母细胞核的研究 被引量:6
10
作者 李向臣 吴月红 +2 位作者 马毅 山灵 张涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期537-541,共5页
受体细胞去核是核移植关键步骤之一。利用脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DM)显示牛卵母细胞染色体的位置进行去核,主要从以下几个方面进行了试验:卵母细胞在DM中孵育浓度、卵母细胞在DM中孵育时间及卵母细胞成熟时间对显示效果的影响。结果... 受体细胞去核是核移植关键步骤之一。利用脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DM)显示牛卵母细胞染色体的位置进行去核,主要从以下几个方面进行了试验:卵母细胞在DM中孵育浓度、卵母细胞在DM中孵育时间及卵母细胞成熟时间对显示效果的影响。结果表明:(1)成熟牛卵母细胞用离子霉素激活5 min,DM孵育2 h完全诱导去核,结果没有见到完全去核的卵母细胞;(2)挑选有第一极体的成熟牛卵母细胞,在浓度为0.5μg/mL的DM中孵育2 h显示率可达76.54%;(3)牛卵母细胞在成熟18 h可以获得73.86%的显示效果。(4)在没有去卵丘细胞的卵母细胞中添加DM取得了更好的显示效果(80.82%),囊胚的发育率也较其它组高,可达18.60%,说明未去卵丘细胞的卵母细胞添加DM更有利于显示染色体的位置,而且更有利于囊胚的发育。利用DM显示染色体的位置不仅可以高效快速的去核,同时也避免了传统去核时荧光对卵母细胞的照射。 展开更多
关键词 显示去核 脱羰秋水仙碱(demecolcine DM) 核移植 卵母细胞
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脱羰秋水仙碱诱导昆明白小鼠卵母细胞去核的研究 被引量:3
11
作者 王强 安志兴 +3 位作者 顾玲 马利兵 郑月茂 张涌 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期653-657,共5页
在已有的demecolcine(以下简称Deme)诱导去核技术路线的基础上,以昆明白小鼠卵母细胞为实验材料,对影响去核率的几个因素(包括Deme浓度、Deme处理起始时间和作用时间、卵母细胞的卵龄)逐次进行实验。结果表明:(1)激活卵母细胞在浓度为0 ... 在已有的demecolcine(以下简称Deme)诱导去核技术路线的基础上,以昆明白小鼠卵母细胞为实验材料,对影响去核率的几个因素(包括Deme浓度、Deme处理起始时间和作用时间、卵母细胞的卵龄)逐次进行实验。结果表明:(1)激活卵母细胞在浓度为0 4μg/mL和0 5μg/mLDeme KSOM液中处理60min均能有效去核,但0 5μg/mL组获得更高的去核率(33 3%)。(2)卵母细胞在激活后0~5min之内迅速放入0 5μg/mLDeme KSOM液中,处理60~180min得到了相对较高的去核率(31 9%~24 5%)。(3)昆明白小鼠hCG注射后17~18h收集的卵母细胞更有利于Deme诱导去核,去核率为27 1%。经比较分析,建立了优化的Deme诱导去核程序。 展开更多
关键词 小鼠 诱导去核 脱羰秋水仙碱(demecolcine) 核移植 卵母细胞
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梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究
12
作者 王士勇 郑军军 +3 位作者 杨月春 刘宗岳 于淼 杨福合 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1381-1386,共6页
本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies somatic cell nuclear transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和... 本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies somatic cell nuclear transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和脱羰秋水仙碱(Demecoline,DEME)化学辅助的方法去核,带下注射(Perivitelline microin—jection,PM)、Pizeo破膜细胞胞质内注射(Break—membrane-cell intracytoplasmic microinjection,BMCIM)和全细胞胞质内注射(Whole-cell intracytoplasmic microinjection,WCIM)的方法注核,带下注核的卵母细胞电融合后化学激活,其余方法注核后直接化学激活,重组胚用CR1aa培养液体外培养。结果表明:(1)DEME辅助法去核率最高,挤压法最低,3种去核方法的去核率差异显著(P<0.05),去核时间差异不显著(P>0.05);(2)PM组和WCIM组注核成功率分别为100.0%和94.8%,注核时间分别为31.0和35.1 s,显著低于BMCIM法(P<0.05),但是注核成功率显著高于BMCIM法(P<0.05),而且两者差异不显著(P>0.05);(3)BMCIM组和WCIM组的激活率均显著高于PM组(P<0.05),其中一步法的BMCIM组最高,一步法和两步法在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显著差异(P>0.05)。结果提示:DEME辅助去核、Pizeo辅助破膜胞质内注射的一步法显微操作可有效用于梅花鹿-牛的异种体细胞核移植的研究。 展开更多
关键词 异种体细胞核移植 盲吸法 挤压法 demecolcine化学辅助去核 带下注核 胞质内注射
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Demecolcine化学辅助去核技术在牛体细胞核移植中的初步研究
13
作者 沙伟 郭振华 +5 位作者 刘赫 殷志明 马红 李仲秋 吴赛辉 刘娣 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期87-91,共5页
研究demecolcine辅助去核后的牛卵母细胞能否支持牛的核移植胚胎的发育。通过化学药物demecolcine处理牛MII期卵母细胞后,借助显微操作去除牛卵母细胞核,并将去核的卵母细胞作为受体,构建重构胚后观察发育情况。实验结果显示,demecolcin... 研究demecolcine辅助去核后的牛卵母细胞能否支持牛的核移植胚胎的发育。通过化学药物demecolcine处理牛MII期卵母细胞后,借助显微操作去除牛卵母细胞核,并将去核的卵母细胞作为受体,构建重构胚后观察发育情况。实验结果显示,demecolcine处理后牛卵母细胞质膜有明显一个或二个突起,且突起内含有卵母细胞染色体,demecolcine辅助牛卵母细胞去核效果较好(57.89%~73.3%),处理时间以1h为宜,去核率可达73.3%。对demecolcine辅助去核后获得的核移植胚胎发育情况显示,囊胚发育率较盲吸法去核核移植胚胎较好(12.5%vs 10.2%),但二者差异不显著(p>0.05)。Demecolcine辅助处理去核技术能有效去除牛卵母细胞核,且去核后的卵母细胞能够支持核移植胚胎的发育。 展开更多
关键词 秋水仙素 化学辅助去核 整细胞注入 体细胞核移植
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