一种用于流感病毒亚单位疫苗纯度分析的改进方法

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作者 田文莉 邵铭 +5 位作者 祁骥 刘淑珍 谷堃 李长贵 杨旭 李小强 《生物技术通讯》 CAS 2013年第1期98-100,共3页

目的:在SDS-PAGE方法的基础上建立一种改进方法,用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析。方法:用糖苷酶F对不同亚型的疫苗中间体去糖基化处理后进行SDS-PAGE,与未经去糖基化处理的还原型SDS-PAGE结果进行比较。结果:去糖基化处理消除... 目的:在SDS-PAGE方法的基础上建立一种改进方法,用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析。方法:用糖苷酶F对不同亚型的疫苗中间体去糖基化处理后进行SDS-PAGE,与未经去糖基化处理的还原型SDS-PAGE结果进行比较。结果:去糖基化处理消除了血凝素的糖基化对电泳迁移率的影响,从而实现了血凝素亚基和杂质的电泳分离。结论:此方法应用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析,较之常规的还原型SDS-PAGE方法具有更高的分辨力。 展开更多

关键词 流感病毒亚单位疫苗 SDS-PAGE 血凝素 糖苷酶F 去糖基化

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离体大鼠肠道菌对6种皂苷类成分代谢研究 被引量：24

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作者 高霞 耿婷 +4 位作者 马阳 李艳静 黄文哲 王振中 萧伟 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2329-2338,共10页

为考察离体大鼠肠道菌群对6种皂苷类成分代谢转化的情况,将6种皂苷类成分单体(三七皂苷R_1,人参皂苷Rg_1,人参皂苷Rg_2,人参皂苷Re,人参皂苷Rd和人参皂苷Rb_1)分别与离体大鼠肠道菌群在厌氧条件下孵育8,24 h,通过乙腈沉淀蛋白和乙酸乙... 为考察离体大鼠肠道菌群对6种皂苷类成分代谢转化的情况,将6种皂苷类成分单体(三七皂苷R_1,人参皂苷Rg_1,人参皂苷Rg_2,人参皂苷Re,人参皂苷Rd和人参皂苷Rb_1)分别与离体大鼠肠道菌群在厌氧条件下孵育8,24 h,通过乙腈沉淀蛋白和乙酸乙酯萃取处理后,采用LC-Q-TOF-MS/MS对代谢产物进行定性分析。通过比较空白对照样品和加药孵育样品的总离子流以及各个色谱峰的准分子离子和多级碎片离子,分析各皂苷类成分在大鼠粪便中可能的代谢产物。结果发现,大鼠肠道菌群对6种皂苷类成分具有显著的代谢转化作用,三七皂苷R_1主要被代谢为5个产物,代谢途径为三七皂苷R_1→人参皂苷Rg_1→人参皂苷Rh_1和人参皂苷F_1→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Rg_1主要被代谢为4个产物,代谢途径为人参皂苷Rg_1→人参皂苷Rh_1和人参皂苷F_1→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Rg_2主要被代谢为2个产物,代谢途径为人参皂苷Rg_2→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Re主要被代谢为4个产物,代谢途径为人参皂苷Re→人参皂苷Rg_2→人参皂苷F_1→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Rd主要被代谢为4个产物,代谢途径为人参皂苷Rd→人参皂苷Rg_3和人参皂苷F_2→人参皂苷Rh_2→原人参二醇;人参皂苷Rb_1主要被代谢为5个产物,分别为人参皂苷Rb_1→人参皂苷Rd→人参皂苷Rg_3和人参皂苷F_2→人参皂苷Rh_2→原人参二醇。综上所述,6种皂苷类单体均能够被离体大鼠肠道菌群代谢,主要的代谢途径为脱糖基和脱氢。 展开更多

关键词 大鼠肠道菌群 皂苷类成分 LC-Q-TOF-MS/MS 代谢 脱糖基

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天然黄酮苷的代谢途径研究进展 被引量：19

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作者 孙欣光 张洁 +5 位作者 庞旭 陈晓娟 张涛 刘曙晨 余利岩 马百平 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期3078-3089,共12页

黄酮苷是自然界中多种植物的次级代谢产物,具有多种生物活性,如抗癌、抗氧化及抗菌活性等。根据苷元与糖的连接形式,黄酮苷又可以分为黄酮O-苷和黄酮C-苷。黄酮苷在体内的代谢主要以胃肠道水解和肝脏代谢为主,胃肠道中水解葡萄糖、木糖... 黄酮苷是自然界中多种植物的次级代谢产物,具有多种生物活性,如抗癌、抗氧化及抗菌活性等。根据苷元与糖的连接形式,黄酮苷又可以分为黄酮O-苷和黄酮C-苷。黄酮苷在体内的代谢主要以胃肠道水解和肝脏代谢为主,胃肠道中水解葡萄糖、木糖、鼠李糖等糖基产生次生苷或苷元,肝脏则主要对入血的黄酮苷或苷元进行葡萄糖醛酸化、甲氧基化等II相代谢反应。对常用中药淫羊藿EpimediiFolium、甘草GlycyrrhizaeRadixetRhizoma、黄芩ScutellariaeRadix、陈皮Citri Reticulatae Pericarpium、大蓟Cirsii Japonici Herba、知母Anemarrhenae Rhizoma、葛根Puerariae Lobatae Radix等的黄酮类化合物体内代谢及体外肠道菌群转化进行综述,并对其代谢规律进行总结,以期明确黄酮苷的体内代谢规律,为科学阐释以黄酮苷为主要成分的中药发挥药效的体内物质基础及基于黄酮苷体内代谢产物的新药研发提供依据。 展开更多

关键词 黄酮苷 黄酮O-苷 黄酮C-苷 体内代谢 糖基水解 葡萄糖醛酸化

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三七皂苷的人肠道菌群体外代谢研究 被引量：16

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作者 李雪晴 李丽 +1 位作者 刘秀峰 刘吉华 《药物生物技术》 CAS 2017年第3期218-223,共6页

研究三七中皂苷类成分(原人参二醇PPD型和原人参三醇PPT型)的人离体肠道菌群的厌氧代谢,为三七皂苷类成分代谢特征的研究提供参考。采集健康成人的新鲜粪便制备肠道菌群混悬液,分别与每种三七皂苷进行体外厌氧培养,HPLC-ESI-Q-TOF-MS/M... 研究三七中皂苷类成分(原人参二醇PPD型和原人参三醇PPT型)的人离体肠道菌群的厌氧代谢,为三七皂苷类成分代谢特征的研究提供参考。采集健康成人的新鲜粪便制备肠道菌群混悬液,分别与每种三七皂苷进行体外厌氧培养,HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS方法对代谢产物进行定性和定量分析。结果:(1)三七中皂苷类成分的代谢途径包括PPD和PPT型,PPD型代谢途径为人参皂苷Rb1→人参皂苷Rd→人参皂苷Rg3→人参皂苷Rh2→PPD和人参皂苷Rb1→七叶胆苷XVII→人参皂苷F2→人参皂苷Compound K→PPD,PPT型代谢途径为人参皂苷Re→人参皂苷Rg2→人参皂苷F1→PPT和三七皂苷R1→三七皂苷R2→人参皂苷Rh1→PPT以及人参皂苷Rg1→人参皂苷Rh1→PPT。(2)三七皂苷的人肠道菌群代谢反应主要是脱糖反应,即在相同母核结构下,四糖苷、三糖苷、二糖苷、单糖苷逐步转化为苷元,其中单糖苷和苷元在肠道菌群环境中的含量较多且相对稳定。(3)由于三七皂苷上的糖基位置的差异,PPD的代谢程度要高于PPT。结论:三七中的皂苷类成分可被人肠道菌群代谢,皂苷成分的代谢造成比例发生变化,单糖苷和苷元的含量较多且相对稳定,揭示了单糖苷和苷元可能是三七在体内发挥药效的物质基础。 展开更多

关键词 原人参二醇 原人参三醇 人肠道菌群 脱糖反应 液相质谱 药效物质基础

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汽爆技术促进中药资源高值化利用 被引量：12

5

作者 陈洪章 彭小伟 《化学进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1857-1864,共8页

汽爆技术在中药资源高值化利用中发挥的作用正在逐渐体现:汽爆处理打破中药植物细胞壁的屏障结构,有利于有效成分的分离提取;汽爆过程物料自体水解发生去糖苷化作用使天然植物中的苷元与糖基分离,提高苷类物质提取和分离效率;汽爆应用... 汽爆技术在中药资源高值化利用中发挥的作用正在逐渐体现:汽爆处理打破中药植物细胞壁的屏障结构,有利于有效成分的分离提取;汽爆过程物料自体水解发生去糖苷化作用使天然植物中的苷元与糖基分离,提高苷类物质提取和分离效率;汽爆应用于中药炮制和中药脱毒有高效、快速和避免有效成分流失等优点;汽爆处理有利于中药非药用组分如纤维素、半纤维素等的有效分离和利用,联产乙醇、丁醇等能源和化工产品。本文对汽爆技术在中药资源高值化利用中的研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 汽爆 中药现代化 生物质 去糖苷化

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雷公藤内酯醇对IgA肾病大鼠血清IgA异常糖基化的影响 被引量：10

6

作者 朱彩凤 包自阳 +1 位作者 朱斌 陈洪宇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期186-187,193,共3页

目的:观察IgA肾病(IgAN)大鼠血清IgA异常糖基化的程度及雷公藤内酯醇(TP)对其影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常组、IgAN模型组(模型组)、IgAN+TP干预组(TP组)、IgAN+泼尼松干预组(Pred组),每组8只。采用牛血清白蛋白(BSA)(葡萄球菌... 目的:观察IgA肾病(IgAN)大鼠血清IgA异常糖基化的程度及雷公藤内酯醇(TP)对其影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常组、IgAN模型组(模型组)、IgAN+TP干预组(TP组)、IgAN+泼尼松干预组(Pred组),每组8只。采用牛血清白蛋白(BSA)(葡萄球菌肠毒素(SEB)(四氯化碳(CCl4)的方法建立IgAN大鼠模型,TP组给予TP 100μg.kg-1.d-1,Pred组给予Pred 5.0 mg.kg-1.d-1灌胃。分别于0、7、11周测24h尿蛋白定量;12周处死大鼠取血,ELISA法测血清IgA的含量,凝集素亲和ELISA方法检测血清IgA异常糖基化的程度;肾组织切片观察病理学改变。结果:造模7周后模型组、TP组、Pred组大鼠尿蛋白较正常组显著增多,第11周时TP组及Pred组尿蛋白较模型组显著减少。模型组血清IgA水平显著高于正常组,TP组显著低于模型组,Pred组与模型组相比,差异无显著。模型组大鼠光镜下肾系膜基质增生,系膜细胞增多,部分毛细血管攀闭塞;荧光下IgA呈团块状在系膜区沉积;TP组及Pred组病理较模型组显著改善,正常组未见病理改变。凝集素亲和ELISA法测定,模型组IgA异常糖基化程度最重,TP组较模型组显著改善,Pred组无明显改善。结论:TP能显著降低血清IgA的水平,改善血清IgA异常糖基化程度,改善肾功能和肾组织病理损伤。可见改善IgA异常糖基化程度可能是TP治疗IgAN的重要机制之一。 展开更多

关键词 雷公藤甲素 肾小球肾炎 IGA 免疫球蛋白A 糖基化缺陷

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三七蒸制前后主要活性成分体内药动学及其抗血小板聚集活性比较研究 被引量：9

7

作者 狄亚维 康安 +5 位作者 狄留庆 钱静 李俊松 单进军 赵晓莉 毕肖林 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期95-100,共6页

目的研究不同蒸制时间(0、2、4、8 h)三七主要活性成分变化、体内药动学和抗血小板聚集活性之间的关系。方法采用高效液相色谱(HPLC-UV)法分析三七蒸制前后主要活性成分变化;大鼠ig 500 mg/kg不同蒸制时间的三七样品液后于不同时间点眼... 目的研究不同蒸制时间(0、2、4、8 h)三七主要活性成分变化、体内药动学和抗血小板聚集活性之间的关系。方法采用高效液相色谱(HPLC-UV)法分析三七蒸制前后主要活性成分变化;大鼠ig 500 mg/kg不同蒸制时间的三七样品液后于不同时间点眼眶取血,超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定三七蒸制前后主要皂苷的血药浓度,运用DAS 3.2.6软件计算各成分的药动学参数;采用PAPE-I型血小板聚集/血凝测定仪检测抗血小板聚集活性。结果蒸制过程降低了生物活性物质三七皂苷R_1及人参皂苷Rg_1、Rd、Rb_1、Re的水平,并产生了新的成分人参皂苷Rg_2、Rg_3、Rh_1、F_2、Rk_3、Rh_4。人参皂苷Rb_1、Rd的脱糖基代谢产物人参皂苷Rg_3与原型皂苷人参皂苷Rb_1比较,t_(max)略有降低,表明脱糖基之后吸收速度加快。蒸三七比生三七有更明显的抗血小板聚集活性,且随着蒸制过程的延长,抗血小板聚集活性更强。结论三七蒸制后,皂苷类成分脱糖基后可能产生活性更强的成分,某些脱糖基代谢产物更易吸收入血,可能导致抗凝血活性增强。 展开更多

关键词 三七 蒸制 人参皂苷 药动学 血小板聚集 脱糖基

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中药皂苷类化合物生物转化研究进展 被引量：2

8

作者 李忆红 梁雨璐 +2 位作者 解嘉琪 王灿 黄建梅 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期989-1003,共15页

皂苷广泛存在于药用植物中,按母核结构可分为三萜和甾体皂苷,具有多种药理活性。众多研究发现皂苷中糖基部分的组成与其药理活性密切相关,改变皂苷分子中的糖基数量和结构能改变皂苷的药理活性及其生物利用度,为开发药物提供更多的化合... 皂苷广泛存在于药用植物中,按母核结构可分为三萜和甾体皂苷,具有多种药理活性。众多研究发现皂苷中糖基部分的组成与其药理活性密切相关,改变皂苷分子中的糖基数量和结构能改变皂苷的药理活性及其生物利用度,为开发药物提供更多的化合物资源。相较于传统的化学方法,皂苷生物转化修饰糖基部分具有选择性高、成本低、污染小等优点,被广泛用于次级皂苷与皂苷元的制备。通过对皂苷脱糖基转化生成较高生物活性的次级皂苷与苷元的研究进展进行综述,为皂苷类化合物生物转化研究提供思路和方法。 展开更多

关键词 皂苷 生物转化 肠内菌 微生物 酶 脱糖基 人参皂苷 绞股蓝皂苷 黄芪甲苷

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人参皂苷体内代谢及其产物的生物活性 被引量：8

9

作者 郑志忠 明艳林 《海峡药学》 2012年第1期9-13,共5页

人参皂苷(ginsenoside)是从人参中提取出来的萜类化合物,是人参诸多药理药效作用的主要活性成分。天然人参皂苷口服难以被直接吸收,必须经过体内代谢后,其产物才能发挥生物活性。然而,迄今国内尚未检索到人参皂苷体内代谢过程比较系统... 人参皂苷(ginsenoside)是从人参中提取出来的萜类化合物,是人参诸多药理药效作用的主要活性成分。天然人参皂苷口服难以被直接吸收,必须经过体内代谢后,其产物才能发挥生物活性。然而,迄今国内尚未检索到人参皂苷体内代谢过程比较系统的研究报道。因此,本文从以下4个方面概述下人参皂苷在体内的代谢研究:一是人参皂苷胃酸液、肠道菌、其他微生物的去糖基化;二是代谢产物通过被动扩散的方式进行吸收;三是代谢产物在肝脏中的酯化和聚集;四是代谢产物的生物活性。 展开更多

关键词 人参皂苷 体内代谢 去糖基化 酯化 生物活性

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缬沙坦对IgA肾病大鼠血清IgA1异常糖基化的影响 被引量：7

10

作者 包自阳 朱彩凤 +1 位作者 李建秋 朱斌 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 2014年第3期274-278,共5页

目的观察IgA肾病(IgAN)大鼠血清IgA1异常糖基化的程度及缬沙坦对其影响。方法将♂SD大鼠随机分为正常对照组、IgAN组、缬沙坦组、泼尼松组,每组12只。采用口服牛血清白蛋白(BSA)和尾静脉注射BSA和葡萄球菌肠毒素(SEB)的方法建立IgAN大... 目的观察IgA肾病(IgAN)大鼠血清IgA1异常糖基化的程度及缬沙坦对其影响。方法将♂SD大鼠随机分为正常对照组、IgAN组、缬沙坦组、泼尼松组,每组12只。采用口服牛血清白蛋白(BSA)和尾静脉注射BSA和葡萄球菌肠毒素(SEB)的方法建立IgAN大鼠模型,缬沙坦组给予缬沙坦30 mg·kg·1·d·1,泼尼松组给予泼尼松5 mg·kg·1·d·1,灌胃给药。分别于1,8,12周测24 h尿蛋白量;12周处死大鼠取血,ELISA法测血清IgA含量,凝集素亲和ELISA法检测血清IgA异常糖基化的程度;肾组织切片观察病理学改变。结果造模8周后IgAN组、缬沙坦组、泼尼松组大鼠尿蛋白较正常对照组显著增多,第12周时缬沙坦组及泼尼松组尿蛋白较IgAN组显著减少。IgAN组血清IgA水平较正常对照组显著升高,缬沙坦组及泼尼松组均较IgAN组显著减少。IgAN组大鼠光镜下肾系膜基质增生,系膜细胞增多,部分毛细血管攀闭塞;荧光下IgA呈团块状在系膜区沉积;缬沙坦组及泼尼松组病理较IgAN组显著改善,正常对照组未见病理改变。IgAN组IgA异常糖基化程度最重,缬沙坦组较IgAN组显著改善,泼尼松组无明显改善。结论缬沙坦能显著降低血清IgA的水平,改善血清IgA1异常糖基化程度,改善临床及病理损伤。可见改善IgA1异常糖基化程度可能是缬沙坦治疗IgAN的重要机制之一。 展开更多

关键词 缬沙坦 IGA肾病 免疫球蛋白A 糖基化缺陷

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白头翁皂苷B5及其衍生物对脂多糖诱导急性肾损伤小鼠药效学研究

11

作者 陈炼 韩珊 +6 位作者 王宝林 董智丹 唐婉润 杨世林 潘其明 苑仁祎坤 高红伟 《药物评价研究》 CAS 北大核心 2024年第7期1452-1458,共7页

目的 酶水解法制备白头翁皂苷B5的C-28位脱糖衍生物,探究白头翁皂苷B5及其衍生物对脂多糖(LPS)诱导的急性肾损伤小鼠的药效学作用。方法 通过α-L鼠李糖苷酶水解白头翁皂苷B5,分离纯化后得到其衍生物,采用ip LPS致雄性BALB/c小鼠急性肾... 目的 酶水解法制备白头翁皂苷B5的C-28位脱糖衍生物,探究白头翁皂苷B5及其衍生物对脂多糖(LPS)诱导的急性肾损伤小鼠的药效学作用。方法 通过α-L鼠李糖苷酶水解白头翁皂苷B5,分离纯化后得到其衍生物,采用ip LPS致雄性BALB/c小鼠急性肾损伤模型。将70只小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松(DEX,阳性药,5 mg·kg^(-1))和白头翁皂苷B5低、高剂量(20、40 mg·kg^(-1))组及白头翁皂苷B5衍生物低、高剂量(20、40 mg·kg^(-1))组,每组10只,造模前2 h和造模后6 h给药。末次给药后6 h摘眼球取血,全自动生化仪计数血液中的白细胞(WBC)和中性粒细胞(Neu);试剂盒法测定血清中肌酐(CRE)和尿素氮(BUN)水平;ELISA法检测血清和肾组织中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;苏木素-伊红(HE)检测肾组织病理变化。结果 与模型组相比,白头翁皂苷B5组及其衍生物组小鼠的血清WBC、Neu、CRE、BUN水平及血清和肾组织中TNF-α、 IL-6、 IL-1β水平均显著降低(P<0.05、0.01、0.001),肾组织损伤明显减轻。与白头翁皂苷B5组相比,相同剂量下,白头翁皂苷B5衍生物组可显著降低WBC、Neu和BUN的数量(P<0.05、0.01、0.001);在低剂量下可明显抑制小鼠血清中CRE的水平(P<0.001)和肾组织中IL-6、IL-1β的释放(P<0.001);在高剂量下显著改善肾脏病理损伤程度。结论 白头翁皂苷B5及其衍生物可以减轻由LPS诱导的急性肾损伤小鼠的肾脏组织损伤程度,相同剂量下,白头翁皂苷B5的C-28位脱糖衍生物药效优于白头翁皂苷B5。 展开更多

关键词 白头翁皂苷B5 脱糖衍生物 酶水解 急性肾损伤 药效学 炎症

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N-糖酰胺酶F在大肠杆菌中的高效表达及其脱糖基化作用研究 被引量：3

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作者 苏移山 王圣钧 +1 位作者 王鹏 祁庆生 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期911-915,共5页

从脑膜炎脓杆菌(Flavobacterium meningosepticum)基因组中通过PCR扩增了N糖酰胺酶F(PNGaseF)基因,经酶切后与表达载体pET28a连接,获得的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)。重组大肠杆菌经诱导表达和纯化提取后,获取大量高纯度N糖酰胺酶F... 从脑膜炎脓杆菌(Flavobacterium meningosepticum)基因组中通过PCR扩增了N糖酰胺酶F(PNGaseF)基因,经酶切后与表达载体pET28a连接,获得的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)。重组大肠杆菌经诱导表达和纯化提取后,获取大量高纯度N糖酰胺酶F,其纯度达90%以上。试验证明,经纯化的重组N糖酰胺酶F可以切除核糖核酸酶B、转铁蛋白和人IgG等糖蛋白上的N糖链,具有脱糖基化作用。 展开更多

关键词 N-糖酰胺酶F PET28a RNASE B 脱糖基化

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超高效液相色谱-质谱联用法分析α-常春藤皂苷在大鼠体内的代谢产物 被引量：4

13

作者 梁起栋 何明珍 +6 位作者 欧阳辉 黄文平 郭宜城 冯育林 周欣 黄何松 杨世林 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第13期1883-1888,共6页

目的研究大鼠口服α-常春藤皂苷后粪便中的代谢产物。方法大鼠igα-常春藤皂苷150 mg/kg后,采集其0~24h粪便样品,应用超高效液相色谱-复合三重四级杆线性离子阱质谱（UPLC-Q/Trap-MS）联用技术对样品进行分析。结果检测到原形药物、原... 目的研究大鼠口服α-常春藤皂苷后粪便中的代谢产物。方法大鼠igα-常春藤皂苷150 mg/kg后,采集其0~24h粪便样品,应用超高效液相色谱-复合三重四级杆线性离子阱质谱（UPLC-Q/Trap-MS）联用技术对样品进行分析。结果检测到原形药物、原形药物的同分异构体及7个可能的代谢产物,包括去甲基化代谢物（M1）、脱糖代谢物（M2、M3）、葡萄糖醛酸化代谢物（M4）和双键加成代谢物（M5、M6-1、M6-2）。结论α-常春藤皂苷在大鼠胃肠道内会发生多种代谢反应,主要有脱糖代谢、葡萄糖醛酸化代谢、去甲基化代谢等。 展开更多

关键词 α-常春藤皂苷 代谢产物 超高效液相色谱-复合四级杆离子阱质谱 脱糖代谢 葡萄糖醛酸化 去甲基化代谢

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差示扫描量热法研究寡糖链对糖蛋白的热力学性质的影响 被引量：1

14

作者 朱科学 周惠明 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期38-40,共3页

报道了研究寡糖链对糖蛋白热力学性质影响的新方法 ;以小麦胚芽为原料 ,从其水溶性提取物中分离得到粗蛋白 -糖复合物 ,经DEAE_Cellulose52和SephadexG_100柱层析 ,得到一种糖蛋白(WGGP) ;采用差示扫描量热法 (DSC)分别对WGGP和去糖基化... 报道了研究寡糖链对糖蛋白热力学性质影响的新方法 ;以小麦胚芽为原料 ,从其水溶性提取物中分离得到粗蛋白 -糖复合物 ,经DEAE_Cellulose52和SephadexG_100柱层析 ,得到一种糖蛋白(WGGP) ;采用差示扫描量热法 (DSC)分别对WGGP和去糖基化的WGGP的热力学参数进行了测定 ,二者的tp 分别为96.098℃和74.338℃ ,说明WGGP的寡糖链对于蛋白质具有较好的稳定和抗变性功能。 展开更多

关键词 寡糖链 糖蛋白 热力学性质 差示扫描量热法 去糖基化

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HIV-1膜抗原部分糖基化位点改造对免疫原性及假病毒形成的影响 被引量：2

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作者 聂建辉 张春涛 +5 位作者 种辉辉 刘春雨 吴雪伶 吴瑜 赵晨燕 王佑春 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期540-544,共5页

目的研究HIV-1膜蛋白（Env）特定糖基化位点改造对Env免疫原性及功能性假病毒形成能力的影响。方法采用环形诱变，DpnⅠ筛选的方法对Env进行定点突变，单周期感染试验检测功能性假病毒形成能力，免疫小鼠，利用假病毒中和试验与ELISPOT... 目的研究HIV-1膜蛋白（Env）特定糖基化位点改造对Env免疫原性及功能性假病毒形成能力的影响。方法采用环形诱变，DpnⅠ筛选的方法对Env进行定点突变，单周期感染试验检测功能性假病毒形成能力，免疫小鼠，利用假病毒中和试验与ELISPOT分别检测突变对中和抗体和T细胞分泌Env特异的IFN-γ的影响。结果N197Q突变体使Env诱导中和抗体的能力提高而诱导T细胞分泌Env特异的IFN-γ的能力降低，并使Env不能形成功能性假病毒；G2突变体（N624Q，N637Q）诱导的中和抗体能更好地中和假病毒74-2，但中和假病毒Wt的能力下降，对Env诱导T细胞分泌Env特异的IFN-γ的能力和功能性假病毒形成无明显影响。结论特定糖基化位点的改造影响假病毒的形成及Env的免疫原性。 展开更多

关键词 HIV-1 免疫原性 中和试验 去糖基化 ELISPOT

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阿尔次海默病tau蛋白异常修饰与其功能的关系 被引量：1

16

作者 王建枝 龚成新 +1 位作者 I.GRUNDKE-IQBAL K.IQBAL 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期154-157,共4页

阿尔次海默病易溶型胞浆ｔａｕ和难溶型双螺旋丝中的ｔａｕ均被异常磷酸化和异常糖基化修饰．异常修饰的ｔａｕ丧失其促微管组装活性，用不同蛋白磷酸酯酶对难溶型双螺旋丝中的ｔａｕ去磷酸化处理后可不同程度恢复其促微管组装生物学活... 阿尔次海默病易溶型胞浆ｔａｕ和难溶型双螺旋丝中的ｔａｕ均被异常磷酸化和异常糖基化修饰．异常修饰的ｔａｕ丧失其促微管组装活性，用不同蛋白磷酸酯酶对难溶型双螺旋丝中的ｔａｕ去磷酸化处理后可不同程度恢复其促微管组装生物学活性．单纯去糖基化处理只在很小限度恢复ｔａｕ的功能，但去糖基化预处理可增强去磷酸化对ｔａｕ上述活性的恢复．提示：ａｔａｕ的异常磷酸化是导致其功能活性丧失的直接因素，而糖基化修饰可能通过对其结构的影响而间接对ｔａｕ功能活性发挥作用；ｂ蛋白磷酸酯酶可部分抑制和逆转阿尔次海默病的脑病理损伤． 展开更多

关键词 早老性痴呆 微管组装 去磷酸化 去糖基 tau基因

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大豆β-伴球蛋白脱糖基化及其酶解后抗原活性变化 被引量：2

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作者 王章存 刘洋 +3 位作者 安广杰 胡金强 赵学伟 贺志铮 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第12期62-66,共5页

大豆蛋白的抗原性是影响其食用安全的重要因素。为了探讨大豆主要抗原蛋白β-伴球蛋白中的糖基化在其抗原反应中的地位和作用,本研究用N-糖苷酶PNGase F对β-伴球蛋白脱糖基化处理后,脱糖和未脱糖β-伴球蛋白在相同条件下用风味蛋白酶水... 大豆蛋白的抗原性是影响其食用安全的重要因素。为了探讨大豆主要抗原蛋白β-伴球蛋白中的糖基化在其抗原反应中的地位和作用,本研究用N-糖苷酶PNGase F对β-伴球蛋白脱糖基化处理后,脱糖和未脱糖β-伴球蛋白在相同条件下用风味蛋白酶水解,用SDS-PAGE电泳和专用β-伴球蛋白酶联免疫试剂盒分别测定了脱糖和未脱糖β-伴球蛋白在酶解过程中的蛋白质组分和抗原性变化。结果表明,β-伴球蛋白分子中不仅含有N-糖肽键连接,也有O-糖肽键连接。脱糖后β-伴球蛋白抗原活性降低到原来的60.1%;脱糖和不脱糖两种β-伴球蛋白及其酶解产物电泳谱带和抗原性变化均有显著差异。酶解180 min时,β-伴球蛋白抗原活性下降为43.4%,脱糖β-伴球蛋白抗原活性仅剩25.0%。此结果揭示了糖链存在影响β-伴球蛋白抗原活性和酶解时的降解行为,为探讨有效消除大豆蛋白抗原性提供一定的理论基础。 展开更多

关键词 大豆β-伴球蛋白 脱糖基化 酶解 抗原活性 电泳

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Muc3羧基端SEA组件完整性与蛋白酶切的关系 被引量：2

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作者 汪荣泉 房殿春 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期726-728,共3页

目的探讨大鼠黏蛋白3(Muc3)羧基端SEA组件的完整性与蛋白酶切的关系。方法对截断了的大鼠Muc3的羧基端(p20t和p20SEA)采用定点突变的方法在所要求的位点插入终止密码子,采用SDS/PAGE和Western blot方法检测蛋白表达,N-glycosidase F消... 目的探讨大鼠黏蛋白3(Muc3)羧基端SEA组件的完整性与蛋白酶切的关系。方法对截断了的大鼠Muc3的羧基端(p20t和p20SEA)采用定点突变的方法在所要求的位点插入终止密码子,采用SDS/PAGE和Western blot方法检测蛋白表达,N-glycosidase F消化法对表达蛋白质行脱N型糖链。结果Muc3完整的羧基端产物翻译后经蛋白酶切产生30kD的氨基端酶切片段和49kD的羧基端酶切片段,30kD的氨基端酶切片段经脱N型糖链后分子量变为22kD;含完整SEA组件但不含SEA组件后续氨基酸的截断大鼠Muc3羧基端用V5抗体可以检测到30kD的表达产物,脱N型糖链后分子量变为22kD;含不完整SEA组件的截断的大鼠Muc3羧基端用V5抗体可以检测到26～30kD的表达产物,脱N型糖链后分子量变为26kD。结论Muc3完整的羧基端产物和SEA组件完整但不含SEA组件后续氨基酸的大鼠Muc3羧基端均在翻译后经历了蛋白酶切,但是SEA组件不完整的大鼠Muc3羧基端在翻译后未能出现蛋白酶切,提示SEA组件完整性是Muc3羧基端蛋白酶切反应发生的一个重要条件。 展开更多

关键词 黏蛋白类 蛋白酶切 SEA组件 脱糖基化

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人源γ-分泌酶的重要亚基nicastrin蛋白表达与纯化 被引量：2

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作者 齐佩瑾 吴更 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期909-916,共8页

γ-分泌酶是具有天冬氨酸内切酶活性跨膜蛋白复合物,与阿尔茨海默症的病理特征的β-淀粉样蛋白(amyloid proteinβ,Aβ)生成有关。Nicastrin(NCT)是Ⅰ型单次跨膜糖蛋白,具有709个氨基酸。它是γ-分泌酶的重要组分,具有募集和结合γ-分... γ-分泌酶是具有天冬氨酸内切酶活性跨膜蛋白复合物,与阿尔茨海默症的病理特征的β-淀粉样蛋白(amyloid proteinβ,Aβ)生成有关。Nicastrin(NCT)是Ⅰ型单次跨膜糖蛋白,具有709个氨基酸。它是γ-分泌酶的重要组分,具有募集和结合γ-分泌酶底物的功能,参与γ-分泌酶的组装过程。本研究中,利用昆虫杆状病毒表达系统表达人源NCT全长和胞外结构域,得到了纯度较好的蛋白,用于晶体初筛。由于nicastrin自身高度糖基化,使用Endo H和PNGase F去糖基化酶进行体外脱糖基作用,使得蛋白均一度提高,纯化到较稳定的胞外结构域蛋白,为下一步对人源nicastrin蛋白进行结构生物学研究奠定了基础。 展开更多

关键词 Γ-分泌酶 NICASTRIN 蛋白表达纯化 去糖基化

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高效液相色谱-电喷雾质谱分析川续断皂苷Ⅵ在大鼠体内的代谢产物 被引量：2

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作者 韦英杰 刘炜 +2 位作者 彭蕴茹 王长梅 贾晓斌 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1132-1136,共5页

目的:研究川续断皂苷Ⅵ在大鼠体内的代谢。方法:采用高效液相色谱-电喷雾质谱检测大鼠灌胃川续断皂苷Ⅵ后血浆、尿液、胆汁和粪便中的代谢产物。使用Agilent公司Zorbax Extend-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5!m),以0.05%甲酸乙腈-0.05... 目的:研究川续断皂苷Ⅵ在大鼠体内的代谢。方法:采用高效液相色谱-电喷雾质谱检测大鼠灌胃川续断皂苷Ⅵ后血浆、尿液、胆汁和粪便中的代谢产物。使用Agilent公司Zorbax Extend-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5!m),以0.05%甲酸乙腈-0.05%甲酸水为流动相梯度洗脱(0～12 min,25%B→27%B;12～30 min,27%B→50%B;30～40 min,50%B→80%B;40～45 min,80%B→90%B;45～50 min,90%B),进行色谱分离,并与电喷雾质谱联用,毛细管电压为2.50 kV,锥孔电压为35 V,干燥气流速为320 L.h-1以及离子源温度为120℃,根据全扫描检测正、负离子模式下获得的准分子离子峰推测化合物的分子量信息及其可能的化学结构。结果:在大鼠血浆、尿液、粪便和胆汁中均检测到原型成分,粪便中检测到川续断皂苷Ⅵ脱去1分子(RM1,RM2)、2分子(RM3,RM4)及全部糖基(RM5)的5个代谢产物,血浆和胆汁中检测出脱去2分子葡萄糖残基的代谢产物(RM4),此外在胆汁中首次发现川续断皂苷Ⅵ的羟基化产物(RM6)。结论:川续断皂苷Ⅵ在大鼠体内的转化主要是在肠道的脱糖基代谢及在肝脏的羟基化反应。 展开更多

关键词 川续断皂苷Ⅵ 大鼠代谢 羟基化反应 脱糖基代谢 高效液相色谱-电喷雾质谱

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