文摘目的基于蛋白组学探讨细辛水提物诱发肝损伤的作用机制。方法30只大鼠随机分为对照组和细辛高、低剂量(12、6 g/kg)组,每组10只,每日ig给药1次,连续28 d。末次给药后采取血清样本和肝脏样本,检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性;苏木素-伊红(hematoxylineosin,HE)染色法观察肝脏病理组织形态;串联质谱标签定量蛋白质组学法检测肝组织差异表达蛋白;免疫组化法测定大鼠肝脏组织细胞色素P4501A1(cytochrome P4501A1,CYP1A1)、金属硫蛋白-1(metallothionein-1,MT-1)、肌肉特异性烯醇化酶3(recombinant enolase 3,ENO3)、抗原转运蛋白(transporter associated with antigen processing 1,TAP1)蛋白表达。CCK-8法考察细辛水提物对小鼠肝实质AML-12细胞活力的影响,并采用qRT-PCR与Western blotting检测AML-12细胞中CYP1A1、MT-1、ENO3、TAP1蛋白及m RNA表达。结果与对照组比较,细辛组大鼠血清AST、ALT活性均显著升高(P<0.01);肝组织出现明显炎性改变;肝组织中存在179个差异蛋白,主要富集于次级代谢产物的生物合成途径、视黄醇代谢途径、吞噬体等;肝组织CYP1A1、MT-1蛋白表达显著增加(P<0.01),ENO3、TAP1蛋白表达显著减少(P<0.01)。体外实验结果显示,细辛组AML-12细胞CYP1A1、MT-1 m RNA与蛋白表达显著增加(P<0.05、0.01),ENO3、TAP1 m RNA与蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01)。结论细辛水提物可诱发大鼠肝损伤,引起肝功能异常和肝组织病理改变,肝损伤机制与上调CYP1A1、MT-1 m RNA及蛋白表达及下调ENO3、TAP1 m RNA及蛋白表达有关。
