目的:构建人颗粒溶素(GNLY)全长编码序列的真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察GNLY在细胞内的表达及其对细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR技术获取人GNLY全长编码序列cDNA,克隆至pGEM-T载体进行测序,再将克隆片段插入质粒pcDNA3.1(+)中,...目的:构建人颗粒溶素(GNLY)全长编码序列的真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察GNLY在细胞内的表达及其对细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR技术获取人GNLY全长编码序列cDNA,克隆至pGEM-T载体进行测序,再将克隆片段插入质粒pcDNA3.1(+)中,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY,用阳离子聚合物转染试剂转染肝癌细胞系SMMC-7721,检测目的基因mRNA的表达,W ST-8法检测细胞增殖活性。结果:获得人GNLY全长编码序列cDNA,并成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY;转染SMMC-7721细胞后,检测出目的基因mRNA的表达;重组质粒转染组与空质粒对照组细胞增殖活性有非常显著性差异(P<0.01和P<0.001),并且随着转染基因浓度的增加,细胞增殖活性逐渐降低,2.0μg/m l pcDNA3.1(+)/GNLY转染组细胞增殖活性下降至0.329。结论:pcDNA3.1(+)/GNLY真核表达载体构建成功,GNLY基因转染对SMMC-7721细胞能产生细胞毒性效应,对肝癌细胞具有一定的杀伤作用。展开更多
文摘目的:构建人颗粒溶素(GNLY)全长编码序列的真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察GNLY在细胞内的表达及其对细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR技术获取人GNLY全长编码序列cDNA,克隆至pGEM-T载体进行测序,再将克隆片段插入质粒pcDNA3.1(+)中,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY,用阳离子聚合物转染试剂转染肝癌细胞系SMMC-7721,检测目的基因mRNA的表达,W ST-8法检测细胞增殖活性。结果:获得人GNLY全长编码序列cDNA,并成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY;转染SMMC-7721细胞后,检测出目的基因mRNA的表达;重组质粒转染组与空质粒对照组细胞增殖活性有非常显著性差异(P<0.01和P<0.001),并且随着转染基因浓度的增加,细胞增殖活性逐渐降低,2.0μg/m l pcDNA3.1(+)/GNLY转染组细胞增殖活性下降至0.329。结论:pcDNA3.1(+)/GNLY真核表达载体构建成功,GNLY基因转染对SMMC-7721细胞能产生细胞毒性效应,对肝癌细胞具有一定的杀伤作用。
