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大肠杆菌LTB与霍乱弧菌CTB基因的克隆和表达及鉴定 被引量:9
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作者 夏肖萍 严杰 +2 位作者 钊守凤 毛亚飞 李淑萍 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2003年第1期17-20,共4页
目的 :克隆大肠杆菌不耐热肠毒素 B亚单位 (L TB)及霍乱弧菌肠毒素 B亚单位 (CTB)基因 ,构建其表达载体。方法 :采用高保真 PCR分别从 E.coli4 4 815株与 V.cholerae东 74株基因组 DNA中扩增 L TB与 CTB基因 ,T- A克隆后测定核苷酸序列... 目的 :克隆大肠杆菌不耐热肠毒素 B亚单位 (L TB)及霍乱弧菌肠毒素 B亚单位 (CTB)基因 ,构建其表达载体。方法 :采用高保真 PCR分别从 E.coli4 4 815株与 V.cholerae东 74株基因组 DNA中扩增 L TB与 CTB基因 ,T- A克隆后测定核苷酸序列。分别构建 p ET32 a的 LTB及 CTB表达载体 ,在 E.coli BL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的 IPTG诱导表达。采用 SDS- PAGE及 GM1- EL ISA鉴定表达产物。结果 :所克隆的 LTB和 CTB基因与报道的相应核苷酸序列同源性分别为 99.12 %~ 99.71%和 98.5 4 %~ 99.4 2 % ,氨基酸序列同源性分别高达 97.5 8%~99.19%和 96.77%~ 99.19%。p ET32 a- L TB- BL2 1DE3和 p ET32 a- CTB- BL2 1DE3系统表达的融合蛋白产量分别占细菌总蛋白的 30 %和 10 %左右。GM1- EL ISA结果证实 LTB及 CTB融合蛋白均能与牛 GM1结合。结论 :本研究成功地构建了 LTB与 CTB表达系统 ,所表达的 L TB与 CTB融合蛋白具有粘膜免疫佐剂活性。 展开更多
关键词 大肠杆菌 LTB基因 霍乱弧菌 ctb基因 分子克隆 LTB融合蛋白 ctb融合蛋白 免疫学
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rLTB/rCTB-rOmpL1/1融合基因及其原核表达系统的构建和鉴定 被引量:7
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作者 阮萍 严杰 +3 位作者 毛亚飞 李淑萍 罗依惠 李立伟 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2005年第1期21-26,共6页
目的 :构建 lt B/ ct B- omp L1/ 1融合基因及其原核表达系统 ,鉴定表达产物的免疫和佐剂活性 ,检测问号钩端螺旋体 (简称钩体 )野生株 omp L 1基因的携带和表达情况及钩体患者血清特异性抗体水平。方法 :采用连接引物 PCR构建 lt B- om... 目的 :构建 lt B/ ct B- omp L1/ 1融合基因及其原核表达系统 ,鉴定表达产物的免疫和佐剂活性 ,检测问号钩端螺旋体 (简称钩体 )野生株 omp L 1基因的携带和表达情况及钩体患者血清特异性抗体水平。方法 :采用连接引物 PCR构建 lt B- omp L 1/ 1和 ct B- omp L 1/ 1融合基因 ,常规方法构建其原核表达系统。采用 SDS- PAGE、Westernblot和 GM1- ELISA分别检测目的重组蛋白 r LTB- r Omp L 1/ 1和 r CTB- r Omp L 1/ 1表达量、免疫反应性及与 GM1结合的活性。采用 PCR和 MAT分别检测 97株问号钩体野生株 omp L1基因及其表达情况。采用 ELISA检测 2 2 8例钩体患者血清 omp L1基因产物的抗体。结果 :与报道的相关序列比较 ,lt B- omp L1/ 1和 ct B- omp L1/ 1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性 ,分别为 99.7%~ 99.9%和 99.5 %~ 10 0 %。r LTB- r Omp L1/ 1和 r CTB- r Omp L1/ 1表达产量均约为细菌总蛋白的 10 % ,主要以包涵体形式存在。 r LTB- r Omp L 1/ 1和 r CTB- r Omp L1/ 1均分别能与r Omp L 1/ 1兔抗血清和牛 GM1结合。 89.7%问号钩体野生株含有 omp L1基因 ,87.6 %问号钩体野生株分别与r Omp L 1/ 1和 r Omp L1/ 2兔抗血清出现效价 ,为 1∶ 4~ 1∶ 2 5 6的 MAT阳性结果。 86 .8%和 88.6 %的患? 展开更多
关键词 钩端螺旋体 问号 ompL1基因 大肠埃希茵 LTB基因 霍乱弧茵 ctb基因 序列同源性 核酸 序列同源性 氨基酸 克隆 分子 rLTB—rOmpLl/1/免疫学 rctb-rOmpL1/1/免疫学
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问号钩端螺旋体rLTB/rCTB-LipL32/1免疫保护作用及野生株LipL32基因表达和患者抗体检测 被引量:4
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作者 阮萍 严杰 +1 位作者 毛亚飞 周晓辉 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期369-374,共6页
目的 构建LTB- LipL32/ 1和CTB- LipL32 / 1融合基因原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫和佐剂活性及保护作用,了解问号钩端螺旋体(简称钩体)野生株LipL32基因携带、表达及钩体病人血清LipL32基因产物抗体产生频率。方法 采用常规... 目的 构建LTB- LipL32/ 1和CTB- LipL32 / 1融合基因原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫和佐剂活性及保护作用,了解问号钩端螺旋体(简称钩体)野生株LipL32基因携带、表达及钩体病人血清LipL32基因产物抗体产生频率。方法 采用常规分子生物学技术构建LTB- LipL32 / 1和CTB- LipL32 /1融合基因及其原核表达系统。采用SDS PAGE检测目的重组蛋白rLTB -LipL32 / 1及rCTB -LipL32 / 1表达情况。分别采用Westernblot和GM1 -ELISA检测rLTB -LipL32 / 1及rCTB -LipL32 /1的免疫反应性和佐剂活性。采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株LipL32基因及其表达情况。采用ELISA检测2 2 8例钩体病人血清LipL32基因产物的抗体。采用豚鼠保护试验检测重组蛋白的免疫保护作用。结果 与报道的相关序列比较,LTB -LipL32 /1和CTB- LipL32 / 1融合基因核苷酸序列相似性分别为99.12 %~99.71%和98.5 4 %~99.4 2 % ,氨基酸序列相似性分别为97.5 8%~99.6 3%和96 .77%~99.6 3%。rLTB- LipL32 1和rCTB- LipL32 /1表达产量均约为细菌总蛋白的10 % ,并主要以包涵体形式存在。rLTB -LipL32 / 1和rCTB- LipL32 /1均分别能与LipL32 /1兔抗血清和牛GM1结合。97.9%(95 97)问号钩体野生株含有LipL32基因,95 .9% (93 97)问? 展开更多
关键词 问号钩端螺旋体 lipL32基因 大肠埃希菌 LTB基因 霍乱弧菌 ctb基因 免疫性佐剂活性
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幽门螺杆菌CagA蛋白与CTB融合基因的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:5
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作者 姜云水 方平楚 +1 位作者 付亚萍 朱诚 《科技通报》 北大核心 2004年第3期189-193,共5页
目的 构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法 采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和... 目的 构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法 采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造了水稻Wx启动子,在其3′端融合加入Ω序列和Kozak序列.通过一系列亚克隆最终将两个融合基因和NOS终止子插入根癌农杆菌双元载体pCAMBI A1300的表达框架内.结果 PCR验证和测序分析证明,CTB和cagA融合基因以正确的方向插入到载体pCAMBI A1300中,并位于水稻Wx启动子后.结论 成功构建CTB和cagA融合基因的植物表达载体,为幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础. 展开更多
关键词 生物工程 幽门螺杆菌 CAGA基因 ctb基因 水稻Wx启动子 基因融合 植物表达载体
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含幽门螺杆菌CagA、UreB蛋白与霍乱肠毒素B亚单位(CTB)融合基因的植物表达载体的构建及遗传转化 被引量:4
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作者 程畅 陈珍 朱诚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期29-33,共5页
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因,与胃癌和胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的发生也密切相关。目前所用的疫苗制造成本高、运输费用贵,然而利用转基因植物生产的植物疫苗成本低廉、服用方便... 幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因,与胃癌和胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的发生也密切相关。目前所用的疫苗制造成本高、运输费用贵,然而利用转基因植物生产的植物疫苗成本低廉、服用方便是现有疫苗的良好替代品。将Hp相关蛋白与免疫佐剂CTB的融合基因(ctb-linker-cagA和ctb-linker-ureB)利用PCR、酶切、连接等一系列方法从载体p1300-WxCLCN和p1300-WxCLUN中重组到载体pCAMBIA2301中(含35S启动子),重组载体分别命名为p2301-35SCLCN和p2301-35SCLUN。通过冻融法将载体导入农杆菌EHA105菌株中,以农杆菌介导的方法,将重组载体p2301-35SCLCN和p2301-35SCLUN转化烟草黄苗榆和心叶烟,获得了具有卡那霉素抗性再生植株,经过酶切、PCR、GUS染色和PCR-Southern鉴定结果表明,目的基因分别正确插入载体中并稳定整合到植株中,为利用植物反应器生产幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 CAGA基因 ureB基因 ctb基因 基因融合 表达载体
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恶性疟原虫多抗原表位基因表达载体的构建及其在大豆幼胚中的表达 被引量:3
6
作者 李霞 钟辉 +2 位作者 李军 陈杭 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 1999年第3期175-179,共5页
疟疾是当今最需要研究有效疫苗的主要传染病之一。AWTE基因编码恶性疟原虫多种抗原表位基因 ,CTB基因编码霍乱毒素 B亚基 ,是一种既能引起细胞免疫又能引起体液免疫的免疫载体和佐剂。把 AWTE- CTB融合基因构建到植物表达载体 p BVG- ny... 疟疾是当今最需要研究有效疫苗的主要传染病之一。AWTE基因编码恶性疟原虫多种抗原表位基因 ,CTB基因编码霍乱毒素 B亚基 ,是一种既能引起细胞免疫又能引起体液免疫的免疫载体和佐剂。把 AWTE- CTB融合基因构建到植物表达载体 p BVG- ny2上 ,通过基因枪导入法 ,转化大豆幼胚分生组织。 X- glu染色检测到 GUS基因的表达 ;抗原性分析实验结果表明 ,特异表达的融合蛋白可与 CTB和 AWTE抗体结合 ,具有 CTB抗原性。这个实验结果 。 展开更多
关键词 疟疾 多抗原表位基因 转基因大豆幼胚 瞬时表达 ctb抗原性
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植物细胞表达人胰岛素的载体构建 被引量:3
7
作者 汪春义 戚凤春 +3 位作者 陈桂玲 申镇维 王宣军 盛军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期344-346,共3页
目的构建人胰岛素的植物细胞表达载体。方法设计多对引物,通过PCR反应合成霍乱毒素B亚单位(CTB)基因和不带C肽的人胰岛素基因。将霍乱毒素B亚单位(CTB)基因与这种不带C肽的人胰岛素基因融合后,插入克隆载体,然后用BamHⅠ和SacⅠ进行酶切... 目的构建人胰岛素的植物细胞表达载体。方法设计多对引物,通过PCR反应合成霍乱毒素B亚单位(CTB)基因和不带C肽的人胰岛素基因。将霍乱毒素B亚单位(CTB)基因与这种不带C肽的人胰岛素基因融合后,插入克隆载体,然后用BamHⅠ和SacⅠ进行酶切,并将酶切的融合基因片段连接在植物表达载体pBI121上,最后用BamHⅠ和SacⅠ进行酶切鉴定。结果测序结果表明,PCR扩增的目的基因顺序与设计完全一致,并构建了克隆载体和植物表达载体。植物表达载体经酶切后鉴定,所含基因片段大小与预期相符。结论已成功地构建了人胰岛素基因的植物细胞表达载体。 展开更多
关键词 人胰岛素基因 霍乱毒素B亚单位(ctb) 植物表达载体
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Development of Hybrid Rice Variety FY7206 with Blast Resistance Gene Pid3 and Cold Tolerance Gene Ctb1 被引量:2
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作者 XIE Hong-guang JIANG Jia-huang +6 位作者 ZHENG Yan-mei ZHU Yong-sheng WU Fang-xi LUO Xi CAI Qiu-hua ZHANG Jian-fu XIE Hua-an 《Rice science》 SCIE CSCD 2016年第5期266-273,共8页
Hybrid rice Fanyou 7206(FY7206), derived from the cross between a sterile line Fanyuan A and a restorer line Fuhui 7206, was bred by the Rice Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences, China. FY720... Hybrid rice Fanyou 7206(FY7206), derived from the cross between a sterile line Fanyuan A and a restorer line Fuhui 7206, was bred by the Rice Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences, China. FY7206 was characterized by moderate blast resistance, cold tolerance, as well as wide adaptability, and high yields. The blast resistance results indicated that the frequencies of blast races in race B, race C and the total resistance frequency for FY7206 were 95.5%, 100.0% and 97.2%, respectively. The disease resistance results showed that the leaf blast grade for FY7206 was level 1 and panicle blast was level 5. The indoor spray results indicated that FY7206 was resistant to 11 isolates of Magnorpathe oryzae. The blast resistance of FY7206 might be derived from the high expression of blast resistance gene Pid3. The results for simulated cold resistance in an artificial climate chamber indicated that the cold tolerance for FY7206 was moderate at the booting and flowering stages. The cold tolerance results also indicated that FY7206 could be tolerant to temperatures as low as 10 °C at the seedling stage. The q RT-PCR results showed that the expression of cold tolerance gene Ctb1 in FY7206 was relatively high. These results suggested that FY7206 is a hybrid indica rice variety with good comprehensive characteristics, including blast resistance and cold tolerance. 展开更多
关键词 hybrid rice blast resistance gene Pid3 cold tolerance gene ctb1 yield breeding
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霍乱弧菌CTB基因的克隆、表达及重组蛋白活性分析 被引量:1
9
作者 张国广 曾雅明 +2 位作者 李东霄 张红心 陈亮 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期13-17,共5页
霍乱弧菌CTB蛋白具有免疫佐剂活性。根据已发表CTB基因的序列设计一对引物,从一株霍乱弧菌中扩增出CTB基因,测序后发现该基因全长375bp,与国内分离的六株CTB基因的同源性达96.0%-99.2%。将该基因与pTWIN1连接构建了原核表达载体p... 霍乱弧菌CTB蛋白具有免疫佐剂活性。根据已发表CTB基因的序列设计一对引物,从一株霍乱弧菌中扩增出CTB基因,测序后发现该基因全长375bp,与国内分离的六株CTB基因的同源性达96.0%-99.2%。将该基因与pTWIN1连接构建了原核表达载体pTWIN1-CTB,重组表达载体转化BL21(DE3)表达菌株,0.8mmol/LIPTG诱导4h后,收获的细菌总蛋白SDS—PAGE电泳显示CTB在原核表达系统中得到表达,融合蛋白大小与理论值符合,蛋白产量占细菌总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在,Western杂交和GM1-ELISA结果表明重组蛋白具有免疫原性和粘膜佐剂活性。 展开更多
关键词 霍乱弧菌ctb基因 原核表达 粘膜佐剂活性
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CTB-CPA融合基因构建、表达及其产物的免疫原性 被引量:3
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作者 蒋玉文 杨京岚 +2 位作者 许崇波 朱平 龚人雄 《中国兽药杂志》 2002年第3期22-26,共5页
构建成含有编码霍乱毒素B亚单位 (CTB)和产气荚膜梭菌α毒素 (CPA)第 70~ 370位氨基酸的融合基因CTB CPA ,并在大肠杆菌中获得表达。经限制性内切酶鉴定和核苷酸序列分析表明 ,CPA基因在重组质粒中与CTB基因的连接向位是正确的 ,位于CT... 构建成含有编码霍乱毒素B亚单位 (CTB)和产气荚膜梭菌α毒素 (CPA)第 70~ 370位氨基酸的融合基因CTB CPA ,并在大肠杆菌中获得表达。经限制性内切酶鉴定和核苷酸序列分析表明 ,CPA基因在重组质粒中与CTB基因的连接向位是正确的 ,位于CTB基因的下游并与CTB基因处于同一阅读框架。重组菌株BL2 1(DE3) (pECTB CPA)经IPTG诱导后 ,其表达产物经SDS PAGE和Western blot检测表明 ,重组菌株可以表达CTB CPA融合蛋白。表达的产物以包涵体的形式存在 ,可分别被抗CT和A型产气荚膜梭菌抗毒素识别 ,表达量占菌体总蛋白的 2 2 7%。用表达产物免疫小鼠后 ,所产生的对A型产气荚膜梭菌毒素攻击的免疫保护力高于用单独的A型产气荚膜梭菌类毒素免疫的小鼠所产生的免疫力 ,证明所表达的融合蛋白中CTB起到免疫佐剂的作用 。 展开更多
关键词 ctb-CPA融合基因 融合蛋白 免疫原性 A型产气荚膜梭菌
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重组Hp疫苗CTB-HUUC对BALB/c小鼠Hp感染的预防效果 被引量:2
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作者 柯鸿 潘兴 +3 位作者 牛晓娟 李莉 张友旺 潘龙瑞 《湖北医药学院学报》 CAS 2018年第3期203-207,212,F0002,共7页
目的:构建口服幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)多价表位疫苗CTB-Hap A-Ure A-Ure B-CagA(CTB-HUUC),观察其在BABL/c小鼠体内抗Hp SS1感染的免疫预防效果。方法:文献查找Hp相关黏附分子(HpaA、UreA、UreB)抗原的显性表位序列HpaA88-... 目的:构建口服幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)多价表位疫苗CTB-Hap A-Ure A-Ure B-CagA(CTB-HUUC),观察其在BABL/c小鼠体内抗Hp SS1感染的免疫预防效果。方法:文献查找Hp相关黏附分子(HpaA、UreA、UreB)抗原的显性表位序列HpaA88-100、HpaA132-141、UreA27-53、UreA183-203、UreB229-251、UreB317-329、UreB321-339、UreB373-385、UreB438-452、UreB546-561,在其C端引入Hp黏附分子抗原CagA,再在其N端引入分子内黏膜佐剂霍乱毒素B亚基(cholera toxin B,CTB),通过Linker(EFM、GS、KK)将其串联,构建重组质粒pET28a(+)/ctB-hpa A-ureA-ureB-CagA[pET28a(+)/ctB-HUUC]。将pET28a(+)/ctB-HUUC转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达后进行蛋白层析纯化,获得疫苗靶抗原CTB-HUUC,并采用Western Blot和ELISA对其进行免疫反应性和免疫原性鉴定。6周龄BABL/c小鼠,分别用CTB-HUUC重组蛋白、CTB、PBS 200μg,每周一次灌胃,连续免疫治疗4次。末次免疫治疗后2周,用10~8CFU的幽门螺杆菌悉尼株(Helieobacter pylori Sydney Strain1,Hp SS1),每天一次灌胃,每次50μL,连续感染4次;两周后脱颈处死小鼠,取小鼠的胃窦部组织进行快速尿素酶试验,其余胃组织进行Hp SS1计数和病理切片HE染色。结果:获得了高纯度的CTB-HUUC蛋白,Western Blot结果显示CTB-HUUC可以与鼠抗Hp SS1血清及鼠抗CTB抗体发生特异性反应,人抗神经节苷脂抗体酶联免疫吸附法(GM1-ELISA)检测重组蛋白CTB-HUUC体外可结合GM1,具有良好的佐剂活性。CTB-HUUC组小鼠胃组织快速尿素酶试验阳性明显比CTB组和PBS组少(P<0.01),Hp SS1培养计数结果较CTB组和PBS组显著减少(P<0.01),炎性损伤程度及炎性细胞浸润程度较CTB组和PBS组轻微。结论:口服重组幽门螺杆菌多价疫苗CTB-HUUC对BALB/c小鼠的Hp感染预防有效。 展开更多
关键词 ctb-HUUC 幽门螺杆菌黏附素A亚单位 尿素酶 细胞毒素相关蛋白A 预防性接种
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霍乱毒素B亚单位与胰岛素原融合基因的克隆、表达及重组蛋白特性分析 被引量:2
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作者 陈丽 欧阳凤秀 +7 位作者 钱炳俊 任宏 王强 姜庆五 王玉炯 刘静波 梁婉琪 张大兵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期204-210,共7页
构建了霍乱毒素B亚单位 (CholeratoxinBsubunit,CTB)与胰岛素原 (Proinsulin)的融合基因CTB -PROIN ,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET 30a(+)中 ,获得重组质粒pETCPI,并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL2 1(DE3)中 ;重组菌株经IPTG诱... 构建了霍乱毒素B亚单位 (CholeratoxinBsubunit,CTB)与胰岛素原 (Proinsulin)的融合基因CTB -PROIN ,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET 30a(+)中 ,获得重组质粒pETCPI,并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL2 1(DE3)中 ;重组菌株经IPTG诱导后 ,其表达产物经过 15 %SDS PAGE分析表明该菌株可以表达融合蛋白 ,其分子量约为 2 1. 6kD ,且主要以包涵体形式存在 ,约占全菌蛋白的 2 5 %。含CTB- PROIN重组蛋白的包涵体经过变性和复性后 ,CTB- PROIN可以在体外自组装成五聚体结构。Westernblotting分析结果表明重组CTB PROIN蛋白可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别 ,说明该蛋白具有霍乱毒素和胰岛素的双重抗原性。同时在体外 ,CTB PROIN蛋白可与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合 ,表明了该融合蛋白在体外具有生物活性。这些研究结果为利用原核生物表达系统研制廉价、高效的I型糖尿病口服疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 霍乱毒素B亚单位 胰岛素原 融合基因ctb-PROIN 神经节苷脂GMI
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p75NTR对小鼠面神经损伤轴突再生影响的实验研究 被引量:1
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作者 张风河 杨丕山 +1 位作者 魏奉才 张学广 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2007年第1期29-31,共3页
目的:探讨p75神经营养蛋白受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)在面神经损伤再生修复中的作用。方法:p75NTR基因敲除小鼠和野生型小鼠的面神经总干损伤后第4天,在损伤的近中侧注射霍乱毒素B(choleratoxin B,CTB)进行示踪,对再生神... 目的:探讨p75神经营养蛋白受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)在面神经损伤再生修复中的作用。方法:p75NTR基因敲除小鼠和野生型小鼠的面神经总干损伤后第4天,在损伤的近中侧注射霍乱毒素B(choleratoxin B,CTB)进行示踪,对再生神经纤维进行免疫组化染色,然后计数进行统计分析。结果:p75NTR基因敲除小鼠再生的神经纤维,明显较野生型小鼠的短,差异有显著性(P<0.01)。结论:p75NTR可以增强面神经的再生。 展开更多
关键词 p75神经营养蛋白受体 霍乱毒素B 再生 小鼠 基因敲除
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霍乱毒素B亚基融合蛋白表达系统的构建 被引量:1
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作者 曹诚 石成华 +1 位作者 张京生 马清钧 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第5期579-583,共5页
霍乱毒素B亚基(CTB)是良好的免疫佐剂和载体蛋白。本研究通过定点突变,在CTB基因(ctxB)3′端终止密码前引入了限制性内切酶EcoRI,构建了质粒pMC05。pMC05中CTB与下游lacZ′基因阅读框架相同,... 霍乱毒素B亚基(CTB)是良好的免疫佐剂和载体蛋白。本研究通过定点突变,在CTB基因(ctxB)3′端终止密码前引入了限制性内切酶EcoRI,构建了质粒pMC05。pMC05中CTB与下游lacZ′基因阅读框架相同,转化大肠杆菌后能够表达CTB与β-半乳糖苷酶α肽的融合蛋白;所表达的融合蛋白能与GM1结合,说明融合蛋白保持CTB的基本高级结构和生物学活性;融合蛋白能与抗-CTB抗体结合,说明融合蛋白具有CTB的抗原性。以上结果表明:通过将外源抗原决定簇基因融合至ctxB的3′端,在大肠杆菌中表达融合蛋白,构建基因工程肽苗是可行的。还探索了转录终止序列对融合基因蛋白表达水平的影响,构建了高效表达融合蛋白的载体-宿主系统。 展开更多
关键词 霍乱毒素B亚基 基因融合 肽苗
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免疫佐剂分子CTB基因的克隆与表达 被引量:1
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作者 王涛 陈建平 +2 位作者 张雷 王玉芳 马莹 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2004年第2期255-258,共4页
我们采用聚合酶链式反应从霍乱弧菌 5 6 9B和 M0 4 5中扩增得到霍乱弧菌 B亚基基因 ,导入载体p UC18,构建重组质粒 p CTB并转化大肠杆菌 JM10 9,并用限制性酶切分析、聚合酶链式反应、序列分析、硫酸十二烷酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳、We... 我们采用聚合酶链式反应从霍乱弧菌 5 6 9B和 M0 4 5中扩增得到霍乱弧菌 B亚基基因 ,导入载体p UC18,构建重组质粒 p CTB并转化大肠杆菌 JM10 9,并用限制性酶切分析、聚合酶链式反应、序列分析、硫酸十二烷酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹进行鉴定。实验结果表明我们成功地扩增出 376 bp的霍乱弧菌 B亚基基因 ;构建免疫佐剂分子的重组质粒 p CTB;并在原核系统中表达出 12 KD的霍乱弧菌 B亚基抗原区带。 展开更多
关键词 免疫佐剂 ctb基因 克隆技术 基因表达 聚合酶链式反应
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基于引物扩增受阻突变技术开发水稻耐冷基因CTB4a特异性分子标记
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作者 梁海福 潘英华 +6 位作者 刘开强 邓国富 黄娟 卿东进 高菊 伍豪 高利军 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1719-1724,共6页
水稻(Oryza sativa)作为热带与亚热带起源的作物对低温敏感。对水稻种质进行耐冷性鉴定,能筛选出耐冷性强的种质,发展耐冷基因分子标记,能够有效鉴别种质中耐冷基因的基因型。本研究使用芽期4℃低温处理10 d对41份水稻材料进行芽期耐冷... 水稻(Oryza sativa)作为热带与亚热带起源的作物对低温敏感。对水稻种质进行耐冷性鉴定,能筛选出耐冷性强的种质,发展耐冷基因分子标记,能够有效鉴别种质中耐冷基因的基因型。本研究使用芽期4℃低温处理10 d对41份水稻材料进行芽期耐冷鉴定,对品种的芽期耐冷能力进行评价,获得了参试材料中除了‘昆明小白谷’之外的芽期耐冷性最强的品种‘南特号’。对已克隆的耐冷基因CTB4a开发分子标记,能够辅助选择水稻的耐冷育种。水稻孕穗期耐冷基因CTB4a来源于‘昆明小白谷’,能够影响水稻抵抗低温的能力。参照公布的CTB4a序列信息,从中挑选出序列中的作用位点SNP (单核苷酸多态性, single nucleotide polymorphism),结合引物扩增受阻突变技术(Penta-primer amplification refractory mutation system,PARMS),用Primer 6.0设计引物,建立CTB4a基因荧光分子标记GM-CTB4a,使用荧光分子标记GM-CTB4a对41份水稻品种进行鉴定,使用酶标仪在‘昆明小白谷’中检测到利用标记扩增产物中包含‘昆明小白谷’特异SNP、T碱基引物携带的FAM荧光信号,在另外40份品种的扩增产物中检测到包含作用位点的C碱基引物携带的HEX荧光信号。本研究利用设计的分子标记,鉴定了41份水稻品种的耐冷性和基因型。比对分析耐冷性和基因型鉴定结果,说明我们开发的分子标记GM-CTB4a特异性较强,具有实际应用价值。研究结果为利用水稻孕穗期耐冷基因CTB4a培育强耐冷水稻品种奠定坚实基础。 展开更多
关键词 耐冷基因 ctb4a 分子标记
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含CpG和CTB的HIV多表位基因真核表达载体的构建及表达
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作者 杜寿文 任大勇 +5 位作者 王宇航 王婧 孙丹丹 任静强 李昌 金宁一 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期180-183,共4页
目的构建含非甲基化的CpG ODN序列及霍乱毒素B亚单位(CTB)的HIV复合多表位基因的真核表达载体,并在体外进行表达。方法设计并合成含CpG ODN序列和linker序列的CTB基因引物,用PCR方法扩增CpG-CTB基因(CC),定向连接到真核表达载体pVL上,... 目的构建含非甲基化的CpG ODN序列及霍乱毒素B亚单位(CTB)的HIV复合多表位基因的真核表达载体,并在体外进行表达。方法设计并合成含CpG ODN序列和linker序列的CTB基因引物,用PCR方法扩增CpG-CTB基因(CC),定向连接到真核表达载体pVL上,然后在CC基因下游插入HIV复合多表位基因MEGNp24,构建重组质粒pVL-CC-MEGNp24,酶切鉴定。纯化重组质粒,转染293T细胞,RT-PCR和细胞免疫染色方法分别检测CTB和p24基因的转录及表达,同时设质粒pVL及空白对照。结果构建了重组质粒pVL-CC-MEGNp24,该质粒转染293T细胞后,CTB和复合多表位基因在293T细胞中得到稳定表达。结论成功构建了含免疫佐剂的HIV复合多表位真核表达载体,为后期疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 CPG ODN ctb HIV多表位基因 RT-PCR 细胞免疫染色
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霍乱毒素B亚基对胡萝卜的遗传转化
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作者 陈书霞 方荣祥 +2 位作者 刘玲 程智慧 李霞 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2003年第5期43-46,共4页
 以胡萝卜无菌幼苗的下胚轴为外植体,通过携带CTB基因的根癌农杆菌的介导进行转化,在Kan50mg/L和Carb500mg/L的MS3-1固体培养基上诱导形成胚性愈伤组织,转至Kan100mg/L和Carb100mg/L的MS0固体培养基上形成植株,同时还进行了以经过预处...  以胡萝卜无菌幼苗的下胚轴为外植体,通过携带CTB基因的根癌农杆菌的介导进行转化,在Kan50mg/L和Carb500mg/L的MS3-1固体培养基上诱导形成胚性愈伤组织,转至Kan100mg/L和Carb100mg/L的MS0固体培养基上形成植株,同时还进行了以经过预处理的下胚轴为外植体进行转化的试验,发现低温处理4d的下胚轴的抗性愈伤诱导率较高。经PCR检测、PCR-Southern杂交检测以后,表明CTB基因已整合进胡萝卜的基因组中。RT-PCR检测初步证明了CTB基因的转录。 展开更多
关键词 霍乱毒素B亚基 胡萝卜 遗传转化 下胚轴 外植体 根癌农杆菌 固体培养基 胚性愈伤组织
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