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rhSCF在大肠埃希菌中的高效表达及纯化
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作者 王克波 王庆民 +8 位作者 徐同文 孙丽霞 潘怀明 刘克玲 米凤景 史文龙 王希菊 阎岩 王晶翼 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第5期30-34,共5页
干细胞因子（SCF）是一种重要的造血生长因子，它在自体造血干细胞动员、肿瘤放疗化疗的辅助治疗以及其它血液病的治疗上具有良好的应用前景。为了制备高纯度、活性的重组人SCF，将人工合成的SCF的cDNA序列，克隆入原核表达载体pET43．1... 干细胞因子（SCF）是一种重要的造血生长因子，它在自体造血干细胞动员、肿瘤放疗化疗的辅助治疗以及其它血液病的治疗上具有良好的应用前景。为了制备高纯度、活性的重组人SCF，将人工合成的SCF的cDNA序列，克隆入原核表达载体pET43．1a中，转化大肠埃希菌BL21（DE3），获得了高效表达菌株。SCF通过诱导表达形成包涵体，包涵体经洗涤、变性和初步纯化后，进行直接稀释复性，复性液经离子交换层析、分子筛层析等分离除去共价二聚体和异构体，获得纯度大于95％的重组人SCF样品，生物学比活性在7．0×10^5U／mg以上。结果表明：建立了有效的rhSCF制备工艺，且产物具有较高的纯度和生物学活性。 展开更多
关键词 重组人干细胞因子 原核表达 纯化 共价二聚体 生物学比活性
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二连体人干细胞因子基因的构建及其在昆虫细胞中的表达 被引量：1
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作者 唐晶 朱洁 +3 位作者 智强 焦瑞清 韩俊海 秦浚川 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期166-172,共7页
应用DNA重组技术构建两端为人干细胞因子 (hSCF) 1～ 16 5肽编码区 ,中间为柔性连接肽 (GGGGSGGGGSGG)编码区的头尾相连的二连体基因 (dSCF) ,并将其插入杆状病毒转移载体 pVL1392中 .重组转移载体 pVL1392 dSCF与野生型苜蓿夜蛾核型... 应用DNA重组技术构建两端为人干细胞因子 (hSCF) 1～ 16 5肽编码区 ,中间为柔性连接肽 (GGGGSGGGGSGG)编码区的头尾相连的二连体基因 (dSCF) ,并将其插入杆状病毒转移载体 pVL1392中 .重组转移载体 pVL1392 dSCF与野生型苜蓿夜蛾核型多角体病毒AcNPVDNA共转染草地贪夜蛾细胞Sf9,经胞内同源重组和 4轮筛选获得纯净的重组病毒AcNPV dSCF .重组病毒感染Sf9单层培养细胞时 ,主要以分泌形式表达二连体蛋白 ,经MTT比色法测得dSCF的表达量约为 1180units/3× 10 6cells .WesternBlotting鉴定了昆虫细胞表达的重组人二连体干细胞因子 (rhdSCF) ,两种主要产物的分子量分别为 4 0kDa、4 9kDa . 展开更多
关键词 二连体人干细胞因子 昆虫细胞 共价二聚体 昆虫表达体系 DAN重组技术 基因表达 基因重组
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