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重组腺病毒介导的人野生型p53,GM-CSF和B7-1基因在胰腺癌细胞中的表达 被引量:1
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作者 谭玉林 严国度 +3 位作者 奚剑波 法镇中 汤建军 耿宏 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2009年第6期489-492,共4页
目的:以复制缺陷型重组腺病毒为载体,使用人野生型p53基因、人GM-CSF基因和B7-1基因为目的基因,探讨三基因在胰腺癌细胞BxPC-3中的表达。方法:免疫组织化学方法检测外源性p53蛋白在BxPC-3细胞中表达。ELISA方法测定GM-CSF表达量;流式细... 目的:以复制缺陷型重组腺病毒为载体,使用人野生型p53基因、人GM-CSF基因和B7-1基因为目的基因,探讨三基因在胰腺癌细胞BxPC-3中的表达。方法:免疫组织化学方法检测外源性p53蛋白在BxPC-3细胞中表达。ELISA方法测定GM-CSF表达量;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测BxPC-3细胞转染B7-1的表达效果。结果:重组腺病毒介导的p53基因、GM-CSF基因、B7-1基因在BxPC-3细胞中得到高效表达。结论:重组腺病毒介导的外源基因在BxPC-3细胞中得到高效的表达,为进一步探讨其体内外治疗胰腺癌的实验研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 胰腺癌 基因治疗 腺病毒 抑癌基因P53 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 免疫共刺激分子b7-1
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B7-1和B7-2基因转染神经母细胞瘤细胞免疫原性的研究 被引量:1
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作者 王斌 陈芳 +1 位作者 毛健雄 王建尧 《中国优生与遗传杂志》 2012年第4期17-19,共3页
目的比较免疫共刺激信号B7-1和B7-2以腺病毒为载体转染神经母细胞瘤(NB)SH-SY5Y细胞株,观察其对肿瘤细胞免疫原性的影响。方法以携带绿色荧光蛋白的腺病毒质粒(Ad-GFP)转染SH—SYSY细胞,通过流式细胞仪(FCM)判断转染效率,确定合适的感... 目的比较免疫共刺激信号B7-1和B7-2以腺病毒为载体转染神经母细胞瘤(NB)SH-SY5Y细胞株,观察其对肿瘤细胞免疫原性的影响。方法以携带绿色荧光蛋白的腺病毒质粒(Ad-GFP)转染SH—SYSY细胞,通过流式细胞仪(FCM)判断转染效率,确定合适的感染倍数(MOI)。分别以空病毒质粒(Ad)及携带B7-1或B7-2的腺病毒质粒转染SH-SYSY细胞,即对照组和B7-1或B7-2组;并以未转染的肿瘤细胞为空白对照(空白组)。采用流式细胞仪(FCM)检测B7-1分子和B7-2蛋白表达,Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞,分别以效靶比5∶1和10∶1进行混合淋巴细胞培养后,测定放射性核素闪烁计数(cpm)/min,同时检测上清液中细胞因子IFN-γ及IL-2的分泌水平。结果腺病毒对SH-SY5Y细胞有较高的转染效率,转染后目的基因B7-1和B7-2得到了有效表达。B7-1组、B7-2组cpm值及上清液IFN-γ、IL-2水平明显高于Ad组、SH组(P<0.01);B7-1组与B7-2组比较,cpm值及细胞因子水平增高无明显差别(P>0.05)。效靶比5∶1时,与10∶1相比,cpm值及IFN-γ、IL-2含量的增加更明显(P<0.05)。结论 B7-1和B7-2分子可促进T淋巴细胞的增殖及活化T细胞分泌IFN-γ、IL-2,而B7-1与B7-2两组间cpm值及细胞因子水平无明显差别。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 腺病毒 共刺激分子b7-1 共刺激分子b7-2
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重组腺病毒介导多重基因对喉癌的治疗研究 被引量:1
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作者 雷磊 邱兆华 +4 位作者 王澜 王荣光 韩东一 杨伟炎 吴祖泽 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期497-500,共4页
目的 探讨携带p5 3、B7 1和GM CSF基因的重组腺病毒 (BB 1 0 2 )对荷瘤裸鼠体内人喉癌细胞的基因治疗效果。方法 建立喉癌裸鼠模型 ,瘤内注射BB 1 0 2、Ad GFP和PBS ,观察肿瘤生长情况 ,并对肿瘤组织进行病理学和免疫组化检查。结果... 目的 探讨携带p5 3、B7 1和GM CSF基因的重组腺病毒 (BB 1 0 2 )对荷瘤裸鼠体内人喉癌细胞的基因治疗效果。方法 建立喉癌裸鼠模型 ,瘤内注射BB 1 0 2、Ad GFP和PBS ,观察肿瘤生长情况 ,并对肿瘤组织进行病理学和免疫组化检查。结果 经多因素析因方差分析 ,实验组与对照组肿瘤重量和瘤体积差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。经治疗后 ,实验组肿瘤中未发现突变型 p5 3的表达 ,Ki6 7阳性表达率极低 ;光镜和透射电镜下可见肿瘤细胞凋亡。结论 BB 1 0 2可在喉癌细胞中有效表达 ,抑制其生长 ,诱导其凋亡 ,在喉癌基因治疗中具有较好的应用前景 。 展开更多
关键词 腺病毒 抑癌基因P53 免疫共刺激分子b7—1 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 喉肿瘤 基因治疗
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反义B7—1质粒载体的构建与鉴定
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作者 李蕊 米曰堂 +1 位作者 杨玉秀 张颖慧 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1586-1588,共3页
目的构建反义B7—1质粒载体,为研究阻断B7—1/CD28共刺激分子通路提供基础。方法设计含有XhoI和BamHI酶切位点的1对引物,通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增获取质粒载体pcDNA3.B7—1上的目的片段B7—1(118~530nt,426bp),克隆入P... 目的构建反义B7—1质粒载体,为研究阻断B7—1/CD28共刺激分子通路提供基础。方法设计含有XhoI和BamHI酶切位点的1对引物,通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增获取质粒载体pcDNA3.B7—1上的目的片段B7—1(118~530nt,426bp),克隆入PMDl8-T中间载体。PMD18-T-B7—1经XhoI和BamHI双酶切后,B7—1片段与pcDNA3B(-)连接,pcDNA3B(-)的XhoI和BamHI酶切位点与B7—1全基因序列所含酶切位点相反,构建反义B7.1表达载体。结果反义基因重组体经过酶切和PCR检测,得到426bp左有的目的基因片段。测序证明捅人的目的片段碱基序列与Genebank报道的B7-1基因序列(G1:111038144)中的B7—1片段100%同源,且反方向插入载体。结论成功构建大鼠B7—1反义真核表达载体,为阻断B7—1/CD28共刺激通路抑制排斥反应奠定了基础. 展开更多
关键词 共刺激分子b7—1 反义寡核苷酸类 真核表达载体
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B7-1和新型隐球菌DHA1基因嵌合重组质粒的构建
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作者 沈纪川 谢奇峰 +2 位作者 翁锦生 顾琳 姚集鲁 《中山大学研究生学刊(自然科学与医学版)》 2003年第1期1-5,共5页
目的构建包含新型隐球菌细胞免疫主要相关基因—迟发超敏反应抗原基因(delayed-type hypersentivity antigen 1,DHA1)与小鼠共刺激分子B7-1的嵌合重组质粒。方法设计合成两对寡核苷酸引物,用PCR法分别从pUCmB7-1TM和新型隐球菌重组质粒p... 目的构建包含新型隐球菌细胞免疫主要相关基因—迟发超敏反应抗原基因(delayed-type hypersentivity antigen 1,DHA1)与小鼠共刺激分子B7-1的嵌合重组质粒。方法设计合成两对寡核苷酸引物,用PCR法分别从pUCmB7-1TM和新型隐球菌重组质粒pcDNA3-DHA1中特异扩增出编码B7-1和DHA1的基因片段(921和984bp),分别用HindⅢ、EcoRⅠ、XbaⅠ酶切后,逐个定向连接到质粒pcDNA3中,转化宿主菌DH-5α,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符,测序结果与文献报道序列及预计结果一致,证实符合表达框架。结论本实验成功构建了新型隐球菌嵌合重组质粒pcDNA3-B7-1-DHA1,为进一步研究新型隐球菌DNA免疫奠定了基础。 展开更多
关键词 新型隐球菌 b7-1 重组质粒 PCDNA3 嵌合 基因 DHA 酶切 方法设计 DNA测序
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聚乙二醇干扰素α-2a联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎患者疗效及其外周血单个核细胞TLR4和B7-H1表达变化 被引量:7
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作者 徐欢 谭钧元 +1 位作者 黄荷 董丹丹 《实用肝脏病杂志》 CAS 2022年第5期637-640,共4页
目的探讨应用聚乙二醇干扰素α-2a(peg-IFNα-2a)联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效及外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体4(TLR4)和协同刺激分子B7家族1(B7-H1)表达变化。方法2019年7月~2021年7月我院诊治的CHB患者96例,被... 目的探讨应用聚乙二醇干扰素α-2a(peg-IFNα-2a)联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效及外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体4(TLR4)和协同刺激分子B7家族1(B7-H1)表达变化。方法2019年7月~2021年7月我院诊治的CHB患者96例,被随机分为对照组48例和观察组48例,分别接受恩替卡韦或恩替卡韦联合Peg-IFNα-2a治疗48周。采用ELISA法检测血清Ⅳ型胶原、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原、透明质酸、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6;使用流式细胞仪检测PBMCs表面TLR4和B7-H1表达水平。结果在治疗结束时,观察组血清HBeAg转阴率为37.5%,显著高于对照组的14.6%(P<0.05),血清HBeAg血清转换率为25.0%,显著高于对照组的0.0%(P<0.05);两组血清AST和ALT水平均恢复正常,差异无统计学意义(P>0.05);观察组血清Ⅳ-C水平为(83.9±17.7)μg/L,血清LN水平为(89.2±25.5)μg/L,血清HA水平为(124.9±22.7)μg/L,均显著低于对照组【分别为(106.5±20.3)μg/L、(124.1±32.7)μg/L和(179.2±38.4)μg/L,P<0.05】;观察组血清IL-10水平为(30.6±5.7)pg/mL,显著高于对照组【(20.4±8.6)pg/mL,P<0.05】,而血清TNF-α水平为(28.8±7.4)mg/L,显著低于对照组【(39.1±9.7)mg/L,P<0.05】,血清IL-6水平为(19.1±3.8)pg/mL,显著低于对照组【(27.5±5.4)pg/mL,P<0.05】;观察组PBMCs表面TLR4表达水平为(10.2±3.1)%,显著低于对照组【(15.8±4.6)%,P<0.05】,PBMCs表面B7-H1表达水平为(8.9±1.5)%,显著低于对照组【(11.6±2.2)%,P<0.05】。结论联合应用Peg-IFNα-2a和恩替卡韦治疗CHB患者具有良好的疗效,能抑制HBV复制,缓解肝纤维化进程,改善肝功能和机体炎症反应,降低PBMCs表面TLR4和B7-H1表达,值得进一步研究。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎 聚乙二醇干扰素Α-2A Toll样受体4 协同刺激分子b7家族1 治疗
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膀胱移行细胞癌组织中B7-H1和PTEN的表达及意义 被引量:3
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作者 王永华 庄乾元 +2 位作者 胡志全 兰儒竹 周四维 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第18期20-22,共3页
目的探讨共刺激分子B7-H1和PTEN在膀胱移行细胞癌组织中的表达变化及意义。方法采用免疫组化SP法检测50例膀胱移行细胞癌及10例正常膀胱组织中的B7-H1和PTEN,分析其与膀胱移行细胞癌临床病理参数的关系及两者的相关性。结果正常膀胱组织... 目的探讨共刺激分子B7-H1和PTEN在膀胱移行细胞癌组织中的表达变化及意义。方法采用免疫组化SP法检测50例膀胱移行细胞癌及10例正常膀胱组织中的B7-H1和PTEN,分析其与膀胱移行细胞癌临床病理参数的关系及两者的相关性。结果正常膀胱组织中B7-H1不表达,膀胱移行细胞癌组织中B7-H1的阳性表达率为72%,且B7-H1的表达与肿瘤的病理分级、临床分期及复发密切相关(P<0.05);正常膀胱组织中PTEN呈阳性表达,膀胱移行细胞癌中PTEN蛋白阳性表达率为58%,随着肿瘤病理分级、临床分期的增加PTEN表达显著降低(P<0.05)。B7-H1与PTEN的表达呈明显负相关(r=-0.44,P<0.01)。结论膀胱移行细胞癌中B7-H1的高表达和PTEN的突变或缺失与肿瘤的发生发展和免疫逃逸密切相关。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 共刺激分子b7-H1 抑癌基因PTEN
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B7-H1分子在肿瘤微环境中的特异表达及对调节性T细胞的诱导促进作用 被引量:1
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作者 华东 孙静 +3 位作者 茆勇 吴玉玉 周桓 朱明 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第3期444-447,共4页
目的通过分析人结直肠癌细胞表达B7-H1分子与肿瘤微环境中浸润的调节性T细胞的关系,探讨肿瘤性B7-H1信号参与肿瘤免疫逃逸的机制。方法采用免疫组化分析肠癌组织中B7-H1分子的表达及调节性T细胞的浸润情况,采用细胞培养和流式细胞术分... 目的通过分析人结直肠癌细胞表达B7-H1分子与肿瘤微环境中浸润的调节性T细胞的关系,探讨肿瘤性B7-H1信号参与肿瘤免疫逃逸的机制。方法采用免疫组化分析肠癌组织中B7-H1分子的表达及调节性T细胞的浸润情况,采用细胞培养和流式细胞术分析肿瘤性B7-H1信号对调节性T细胞分化的作用。结果 B7-H1异常高表达在肠癌组织中,正常组织不表达;肿瘤组织中B7-H1表达水平与调节性T细胞浸润数量成正相关(P<0.01),在TGFβ-的共同作用下,M435-B7-H1细胞可以显著促进Tregs的诱导。结论 B7-H1在肿瘤组织异常表达可通过诱导肿瘤微环境中调节性T细胞的分化参与肿瘤免疫逃逸。 展开更多
关键词 协同刺激分子b7-H1 调节性T细胞 结直肠癌 免疫逃逸
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B7-1和新型隐球菌DHA1基因嵌合重组质粒的构建
9
作者 沈纪川 谢奇峰 +2 位作者 翁锦生 顾琳 姚集鲁 《广东医学》 CAS CSCD 2003年第6期585-587,共3页
目的 构建包含新型隐球菌细胞免疫主要相关基因———迟发超敏反应抗原基因 (delayed -typehypersen tivityantigen 1,DHA1)与小鼠共刺激分子B 7-1的嵌合重组质粒。方法 设计合成两对寡核苷酸引物 ,用PCR法分别从pUCmB 7-1TM和新型隐... 目的 构建包含新型隐球菌细胞免疫主要相关基因———迟发超敏反应抗原基因 (delayed -typehypersen tivityantigen 1,DHA1)与小鼠共刺激分子B 7-1的嵌合重组质粒。方法 设计合成两对寡核苷酸引物 ,用PCR法分别从pUCmB 7-1TM和新型隐球菌重组质粒pcDNA3 -DHA1中特异扩增出编码B 7-1和DHA1的基因片段 ( 92 1bp和 984bp) ,分别用HindⅢ ,EcoRⅠ ,XbaⅠ酶切后 ,逐个定向连接到质粒pcDNA3中 ,转化宿主菌DH -5α ,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果 酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符 ,测序结果与文献报道序列及预计结果一致 ,证实符合表达框架。结论 该研究成功构建了新型隐球菌嵌合重组质粒pcDNA3 -B 7-1-DHA1。 展开更多
关键词 b7-1 DHA1基因 嵌合重组质粒 DNA疫苗 新型隐球菌病
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