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逆境诱导型启动子rd29A的克隆及植物表达载体的构建 被引量：4
1
作者 李晶 李杰 +1 位作者 关英芝 朱延明 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期111-114,共4页
根据文献上发表的逆境诱导型启动子rd2 9A序列设计并合成了一对引物 ,通过PCR的方法从拟南芥基因组中扩增到rd2 9A的启动子序列。根据GenBank中已发表的转录因子DREB1A基因的cDNA序列设计并合成了一对引物 ,通过RT PCR的方法从低温处理... 根据文献上发表的逆境诱导型启动子rd2 9A序列设计并合成了一对引物 ,通过PCR的方法从拟南芥基因组中扩增到rd2 9A的启动子序列。根据GenBank中已发表的转录因子DREB1A基因的cDNA序列设计并合成了一对引物 ,通过RT PCR的方法从低温处理的拟南芥总RNA中扩增出DREB1A基因的全长cDNA片段。以植物表达载体pBch为基础 ,构建了由rd2 9A调控的DREB1A基因的植物表达载体pBDR2 9A 。 展开更多
关键词 逆境诱导型启动子 克隆 植物 表达载体
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农杆菌介导DR1172基因转化拟南芥 被引量：2
2
作者 张新 崔广艳 +3 位作者 陈翠娜 张思维 代其林 王劲 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期582-586,共5页
耐辐射奇球菌(D.radiodurans,DR)能在极端胁迫条件下生存,并且拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛用于研究。其中DR1172是在耐辐射球菌中分离出的一段基因,与LEA76家族同源,参与植物的抗旱机制。本研究利用基因工程手段以载体pBI... 耐辐射奇球菌(D.radiodurans,DR)能在极端胁迫条件下生存,并且拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛用于研究。其中DR1172是在耐辐射球菌中分离出的一段基因,与LEA76家族同源,参与植物的抗旱机制。本研究利用基因工程手段以载体pBI121为基础构建植物DR1172-GV3103表达载体,然后利用花序浸染法将目的基因DR1172转入模式植物拟南芥中,T2代得到50株植物,阳性为15棵,转化率为30%。该研究为探讨DR1172基因的功能以及植物抗逆机制提供了丰富的拟南芥材料,而且对利用基因工程技术手段改良植物性状,培育出抗逆性强的植物优良品种有重要的指导价值。 展开更多
关键词 拟南芥 DR1172 载体构建 遗传转化 抗旱
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灵芝-8基因的番茄果实特异性启动子植物表达载体的构建 被引量：1
3
作者 胡正萍 杨家森 +2 位作者 叶亮 刑莹莹 奚涛 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期23-26,共4页
构建含有灵芝-8(LZ-8)基因和番茄果实特异性E8启动子的重组载体,并将其转化到根瘤农杆菌中。通过PCR法获取LZ-8基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pB I121中,获得果实特异性表达LZ-8蛋白的重组质粒。并采用... 构建含有灵芝-8(LZ-8)基因和番茄果实特异性E8启动子的重组载体,并将其转化到根瘤农杆菌中。通过PCR法获取LZ-8基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pB I121中,获得果实特异性表达LZ-8蛋白的重组质粒。并采用PCR、限制性内切酶酶切和序列测定分析法,对重组质粒进行鉴定,将其转入根瘤农杆菌GV3101中。PCR法、限制性内切酶酶切图谱和序列测定分析均表明番茄果实特异性表达LZ-8蛋白的重组质粒构建成功。获得了含有LZ-8基因和E8启动子的重组质粒,并成功转化根瘤农杆菌,为下一步LZ-8蛋白在番茄果实中特异表达奠定基础。 展开更多
关键词 灵芝-8蛋白 果实特异性启动子 载体构建
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农杆菌介导DR1172基因转化甘蓝型油菜的研究
4
作者 张新 崔广艳 +3 位作者 陈翠娜 张思维 代其林 王劲 《绵阳师范学院学报》 2013年第2期51-56,共6页
耐辐射奇球菌(Deinococcus.Radiodurans,DR)能在极端胁迫条件下生存,并且拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛用于研究.其中DR1172是在耐辐射球菌中分离出的一段基因,与LEA76家族同源,参与植物的抗旱机制.本研究利用基因工程手段... 耐辐射奇球菌(Deinococcus.Radiodurans,DR)能在极端胁迫条件下生存,并且拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛用于研究.其中DR1172是在耐辐射球菌中分离出的一段基因,与LEA76家族同源,参与植物的抗旱机制.本研究利用基因工程手段以载体pBI121为基础构建了植物DR1172-EHA105表达载体,然后利用农杆菌介导法将目的基因DR1172转入油菜中,得到再生油菜植株97株,阳性植株48棵,转化植株阳性率为49.48%.该研究为探讨DR1172基因的功能以及植物抗逆性提供了丰富的植物材料,而且对利用生物工程技术手段改良植物性状,培育出抗逆性强的植物优良品种有重要的指导价值. 展开更多
关键词 DR1172基因 载体构建 基因工程 油菜
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农杆菌介导DR1372基因转化拟南芥的研究
5
作者 张思维 周文波 +2 位作者 张新 陈翠娜 代其林 《绵阳师范学院学报》 2013年第2期57-64,共8页
耐辐射奇球菌(D.radiodurans,DR)在极端胁迫条件下能够继续生存,其耐辐射奇球菌基因组中(DRR1)拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛研究.DR1372基因就是在DR R1中克隆得到的一个基因,其蛋白序列存在一个Why功能域,此功能域可能参... 耐辐射奇球菌(D.radiodurans,DR)在极端胁迫条件下能够继续生存,其耐辐射奇球菌基因组中(DRR1)拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛研究.DR1372基因就是在DR R1中克隆得到的一个基因,其蛋白序列存在一个Why功能域,此功能域可能参与了植物的抗旱过程.我们利用基因工程手段首先构建了植物DR1372-GV3103表达载体,然后利用花序浸染法成功将目的基因DR1372转入拟南芥中,最后对阳性植株进行盐胁迫,证实了DR1372基因在拟南芥中的表达明显改善了转基因植株的耐盐性.初步建立了农杆菌介导DR1372基因转化拟南芥体系,为后续DR1372基因的功能研究工作提供了理论基础. 展开更多
关键词 DR1372 载体构建 盐胁迫 拟南芥
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转录因子DREB1A基因的克隆与植物表达载体的构建 被引量：9
6
作者 李晶 朱延明 李杰 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期211-214,共4页
根据GenBank中已发表的转录因子DREB1A基因的cDNA序列设计并合成了一对引物 ,通过RT PCR的方法从低温处理的拟南芥总RNA中扩增出DREB1A基因的全长cDNA片段。将其克隆到 pMD1 8T vector中。经测序证明该片段与GenBank上报道的序列具有 99... 根据GenBank中已发表的转录因子DREB1A基因的cDNA序列设计并合成了一对引物 ,通过RT PCR的方法从低温处理的拟南芥总RNA中扩增出DREB1A基因的全长cDNA片段。将其克隆到 pMD1 8T vector中。经测序证明该片段与GenBank上报道的序列具有 99.8%的同源性。 2个碱基的置换导致了一处氨基酸的差异 ,但这一氨基酸并不在基因的功能结构域上 ,推测其不会影响基因功能。以植物表达载体pBch为基础 ,构建了由组成型启动子 35S调控的DREB1A基因的植物表达载体pBDR35S 。 展开更多
关键词 转录因子 DREB1A基因 克隆 植物表达载体 CDNA序列 拟南芥
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拟南芥蛋白磷酸酶基因AtPP2C的克隆及植物表达载体的构建 被引量：1
7
作者 郭新红 邓克勤 +1 位作者 姜泽海 刘选明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第22期5800-5801,5831,共3页
根据GenBank中已发表的拟南芥蛋白磷酸酶基因AtPP2C(AT1g07430)的cDNA序列设计并合成了1对引物。通过RT-PCR方法从NaCl处理的拟南芥总RNA中扩增出AtPP2C基因的全长cDNA片段,采用gateway技术中的BP反应将其克隆到pDONR201中。测序表明,... 根据GenBank中已发表的拟南芥蛋白磷酸酶基因AtPP2C(AT1g07430)的cDNA序列设计并合成了1对引物。通过RT-PCR方法从NaCl处理的拟南芥总RNA中扩增出AtPP2C基因的全长cDNA片段,采用gateway技术中的BP反应将其克隆到pDONR201中。测序表明,该片段与GenBank上报道的序列具有100%的同源性。采用gateway技术中的LR反应,以植物表达载体pLEELA为基础,构建了由组成型启动子35S调控的AtPP2C基因的植物表达载体pLAT35S。 展开更多
关键词 拟南芥 AtPP2C基因 gateway克隆技术 植物表达载体构建
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