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自发性高血压大鼠外周血CD4^+/CD8^+T淋巴细胞比率增加且连接子蛋白40(Cx40)和炎症因子水平升高 被引量：9
1
作者 王爱 张海超 +4 位作者 张亮 李新芝 李丽 司军强 马克涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期145-148,152,共5页
目的探讨连接子蛋白40(Cx40)与自发性高血压大鼠(SHR)外周血CD4^+T细胞和CD8^+T淋巴细胞亚群及炎症因子之间的关系。方法采用流式细胞术检测Wistar京都(WKy)大鼠和SHR外周血CD4^+T细胞和CD8^+T细胞及其表面Cx40的表达;采用ELISA检测炎... 目的探讨连接子蛋白40(Cx40)与自发性高血压大鼠(SHR)外周血CD4^+T细胞和CD8^+T淋巴细胞亚群及炎症因子之间的关系。方法采用流式细胞术检测Wistar京都(WKy)大鼠和SHR外周血CD4^+T细胞和CD8^+T细胞及其表面Cx40的表达;采用ELISA检测炎症因子白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-6表达。结果 SHR收缩压显著高于WKy大鼠,SHR外周血CD4^+T细胞百分率、CD4^+/CD8^+T细胞比率显著高于WKy大鼠,而CD8^+T细胞百分率显著低于WKy大鼠;SHR血清IL-2、IL-4、IL-6水平均显著高于WKy大鼠,IFN-γ无明显差异;SHR外周血CD4^+T细胞和CD8^+T细胞中Cx40表达均显著高于WKy大鼠。结论 SHR外周血CD4^+/CD8^+T淋巴细胞比率增加,且Cx40和IL-2、IL-4、IL-6水平明显升高。 展开更多
关键词 自发性高血压大鼠 连接子蛋白40(cx40) T淋巴细胞亚群 炎症因子
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过表达连接子蛋白40(Cx40)通过引起细胞周期阻滞抑制H9c2大鼠心肌细胞增殖
2
作者 任媛媛 杨洁 +1 位作者 魏民新 苏超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期714-720,共7页
目的 建立过表达连接子蛋白40(Cx40)的H9c2心肌细胞稳定株,初步探讨慢病毒载体介导的Cx40蛋白过表达对H9c2细胞增殖的影响及其相关机制。方法 采用实时定量PCR从H9c2细胞株扩增Cx40基因片段,与慢病毒载体质粒pLVX-IRES-Puro连接,获得重... 目的 建立过表达连接子蛋白40(Cx40)的H9c2心肌细胞稳定株,初步探讨慢病毒载体介导的Cx40蛋白过表达对H9c2细胞增殖的影响及其相关机制。方法 采用实时定量PCR从H9c2细胞株扩增Cx40基因片段,与慢病毒载体质粒pLVX-IRES-Puro连接,获得重组pLVX-Flag-Cx40表达载体。通过与包装质粒共转染人胚肾HEK293T细胞,获得携带Flag-Cx40的重组慢病毒颗粒。感染的H9c2细胞经嘌呤霉素(puromycin)筛选出稳定表达株(H9c2-Flag-Cx40细胞)。采用Western blot法检测Cx40蛋白表达情况;通过CCK-8法检测Cx40对H9c2细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的mRNA表达;Western blot法检测cyclin D1蛋白表达;免疫共沉淀(Co-IP)实验检测H9c2细胞Cx40和Yes相关蛋白(YAP)的相互结合情况;分离胞质、胞核蛋白,利用Western blot法检测Cx40对YAP细胞定位的影响。结果 测序结果显示成功构建重组pLVX-Flag-Cx40表达载体,Flag-Cx40重组慢病毒可在H9c2细胞过表达,H9c2-Flag-Cx40稳定细胞株构建成功。与对照组相比,过表达Cx40明显降低H9c2细胞的增殖速率,细胞周期阻滞在G0/G1期,cyclin D1表达量降低。H9c2-Flag-Cx40稳定转染细胞的胞质中YAP表达量明显增多,而在胞核中的表达量明显减低,Cx40通过在胞质中与YAP结合,阻止其进入细胞核发挥转录共激活作用。结论 慢病毒介导Cx40基因过表达使H9c2细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期,并抑制其增殖。 展开更多
关键词 连接子蛋白40(cx40) 慢病毒载体 H9C2细胞 心肌细胞 细胞增殖
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硫氢化钠抑制大鼠外周血淋巴细胞TNF-α和IL-6的释放并下调连接子蛋白40(Cx40)和Cx43水平
3
作者 杨瑞 王爱 +5 位作者 张莹莹 王璐 倪欣 单莉娅 胡娜 马克涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期684-689,共6页
目的探讨硫氢化钠(NaHS)对淋巴细胞连接子蛋白40(Cx40)和Cx43表达及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)释放的影响。方法选取清洁级Wistar京都(WKY)大鼠6只,采集腹主动脉外周血;密度梯度法分离淋巴细胞,分为对照组、伴刀豆球蛋... 目的探讨硫氢化钠(NaHS)对淋巴细胞连接子蛋白40(Cx40)和Cx43表达及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)释放的影响。方法选取清洁级Wistar京都(WKY)大鼠6只,采集腹主动脉外周血;密度梯度法分离淋巴细胞,分为对照组、伴刀豆球蛋白A (ConA)组、ConA联合NaHS组。ELISA检测培养细胞上清中IL-6和TNF-α的水平,免疫荧光染色技术检测淋巴细胞Cx40、Cx43表达和定位,流式细胞术检测淋巴细胞Cx40、Cx43表达频数,Western blot法检测淋巴细胞Cx40、Cx43的蛋白水平。结果与对照组相比,ConA组IL-6和TNF-α水平升高,ConA联合NaHS组较ConA组降低; Cx40主要表达在细胞质和细胞核,而Cx43主要表达在细胞膜上;与对照组相比,ConA组淋巴细胞Cx40和Cx43表达均明显增强、Cx40和Cx43表达频数及蛋白水平均升高;与ConA组相比,ConA联合NaHS组淋巴细胞Cx40和Cx43表达均降低、Cx40和Cx43表达频数及蛋白水平均降低。结论 NaHS处理抑制ConA处理引起的TNF-α和IL-6释放,下调淋巴细胞上Cx40和Cx43的表达。 展开更多
关键词 炎症 淋巴细胞 连接子蛋白40(cx40) 连接子蛋白43(cx43) 硫氢化钠(NaHS)
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一氧化氮抑制大鼠T淋巴细胞TNF-α和IL-6的释放并下调连接子蛋白40(Cx40)水平 被引量：1
4
作者 张莹莹 王爱 +8 位作者 王璐 杨瑞 倪欣 单莉娅 张亮 李丽 司军强 刘欢 马克涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期385-389,共5页
目的探讨一氧化氮(NO)对淋巴细胞上连接蛋白40(Cx40)表达及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)释放的影响。方法取WKY大鼠腹主动脉外周血,收集淋巴细胞进行体外培养,分为对照组、伴刀豆球蛋白A(Con A)处理组、Con A联合NO处理组... 目的探讨一氧化氮(NO)对淋巴细胞上连接蛋白40(Cx40)表达及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)释放的影响。方法取WKY大鼠腹主动脉外周血,收集淋巴细胞进行体外培养,分为对照组、伴刀豆球蛋白A(Con A)处理组、Con A联合NO处理组。ELISA检测培养基上清中TNF-α和IL-6水平,免疫荧光技术检测淋巴细胞Cx40的表达和分布,流式细胞术检测淋巴细胞Cx40表达频率的变化,Western blot法检测淋巴细胞Cx40的蛋白水平。结果与对照组相比,Con A处理组TNF-α和IL-6水平升高,Con A联合NO处理组较Con A处理组降低;Cx40表达在淋巴细胞的细胞质和细胞核,与对照组相比,Cx40蛋白表达水平和表达频数均增加,与Con A处理组淋巴细胞相比,Con A联合NO处理组Cx40蛋白表达水平和表达频数均明显降低。结论 NO抑制促炎因子TNF-α和IL-6释放,同时伴随下调淋巴细胞上Cx40的表达,提示Cx40可能参与NO的抑炎作用。 展开更多
关键词 一氧化氮 连接子蛋白40(cx40) 炎症 淋巴细胞
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房颤患者心房肌细胞的原代培养与应用
5
作者 卞誉豪 张飞 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第1期51-54,共4页
探索成功培养房颤(atrial fibrillation,AF)患者原代心房肌细胞的方法,能够为房颤发病机制的研究奠定实验基础。取心胸外科行迷宫手术患者的左心耳,利用I型胶原蛋白酶消化法培养房颤患者的原代心房肌细胞,通过免疫组化进行鉴定,同时对... 探索成功培养房颤(atrial fibrillation,AF)患者原代心房肌细胞的方法,能够为房颤发病机制的研究奠定实验基础。取心胸外科行迷宫手术患者的左心耳,利用I型胶原蛋白酶消化法培养房颤患者的原代心房肌细胞,通过免疫组化进行鉴定,同时对培养的心房肌细胞进行初步研究。与动物实验相反,房颤患者心房肌细胞缝隙连接蛋白40(connexin40,Cx40)及Kv1.5钾离子通道蛋白的表达量均降低。由此可见直接研究成人房颤患者的心房肌细胞具有更高的可靠性,同时也证明了房颤患者心房肌细胞的培养是研究其发病机制的基础。 展开更多
关键词 心房颤动(AF) 心房肌细胞 细胞培养 缝隙连接蛋白40(cx40) 钾离子通道(Kv1.5)
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缝隙连接蛋白40基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的关系 被引量：1
6
作者 廖志敏 符家武 刘根 《中风与神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2015年第2期115-118,共4页
目的探讨缝隙连接蛋白40(Cx40)基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)易感性的相关性。方法采用SNa Pshot技术对342例ACI患者(病例组)和296例健康者(对照组)的Cx40基因启动子区多态性位点rs35594137进行基因型检测,采用荧光定量PCR方... 目的探讨缝隙连接蛋白40(Cx40)基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)易感性的相关性。方法采用SNa Pshot技术对342例ACI患者(病例组)和296例健康者(对照组)的Cx40基因启动子区多态性位点rs35594137进行基因型检测,采用荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞Cx40 mRNA相对表达水平,并分析其与rs35594137位点多态性的相关性。结果病例组rs35594137位点的基因型和等位基因频率分布与对照组比较,差异均有统计学意义(基因型:P=0.003;等位基因A vs G:P=0.001,OR=1.479);病例组Cx40 mRNA相对表达水平低于对照组(P<0.05);对照组AG+AA基因型(A等位基因携带者)的Cx40 mRNA相对表达水平低于GG基因型(P<0.05)。结论 Cx40基因启动子区多态性位点rs35594137与ACI易感性相关,A等位基因是ACI发病的危险因素。 展开更多
关键词 缝隙连接蛋白40(cx40) 动脉粥样硬化性脑梗死 基因多态性
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