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全合成3α-羟类固醇脱氢酶基因密码子优化及酶性质研究
1
作者
王志臻
仝艳军
+1 位作者
杨海麟
王武
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014年第1期34-39,共6页
以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78...
以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78提高到0.87,GC含量由原来的63.17降低到56.46,大幅度减少了GC簇及寡聚A和T局域的存在,提高3α—hsd的可表达性。全合成基因定向克隆到pET28a载体中,并转化至大肠杆菌B121(DE3)中表达。采用乳糖诱导后,SDS—PAGE检测在约27 kD处有一高效表达的蛋白条带。采用Ni螯合柱分离纯化3α-HSD,获得了较高纯度及较高的产率。酶学性质初步分析表明,全基因合成表达的3α-HSD的性质与原始的3α-HSD基本相同。
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关键词
3α-羟类固醇脱氢酶
基因全合成
密码子优化
重组DNA表达
酶学性质
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职称材料
题名
全合成3α-羟类固醇脱氢酶基因密码子优化及酶性质研究
1
作者
王志臻
仝艳军
杨海麟
王武
机构
江南大学工业生物技术教育部重点实验室
出处
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014年第1期34-39,共6页
基金
江苏省科技计划项目(SBE201170578)(No.SBE201170578)
江苏省科技计划项目(SBE201077545)(No.SBE201077545)
+1 种基金
江苏省自然科学基金(SBK201240329(No.SBK201240329)
国家高技术研究发展计划(863计划)(2012AA021201)
文摘
以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78提高到0.87,GC含量由原来的63.17降低到56.46,大幅度减少了GC簇及寡聚A和T局域的存在,提高3α—hsd的可表达性。全合成基因定向克隆到pET28a载体中,并转化至大肠杆菌B121(DE3)中表达。采用乳糖诱导后,SDS—PAGE检测在约27 kD处有一高效表达的蛋白条带。采用Ni螯合柱分离纯化3α-HSD,获得了较高纯度及较高的产率。酶学性质初步分析表明,全基因合成表达的3α-HSD的性质与原始的3α-HSD基本相同。
关键词
3α-羟类固醇脱氢酶
基因全合成
密码子优化
重组DNA表达
酶学性质
Keywords
3α-hydroxysteroid
dehydrogenase
gene
synthesis
codon
alteration
gene
recombinant
expression
enzymatic
property
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
全合成3α-羟类固醇脱氢酶基因密码子优化及酶性质研究
王志臻
仝艳军
杨海麟
王武
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014
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